彭偉，趙媛媛，姜巍偉

(青島科技大學(xué) 化工學(xué)院，山東 青島 266000)

類胡蘿卜素是一種類異戊二烯顏料,綠葉蔬菜、水果和單細(xì)胞微藻都是天然類胡蘿卜素的主要來(lái)源[1]。天然類胡蘿卜素具有多種生理功能：超氧自由基陰離子介導(dǎo)的抗氧化性質(zhì)；防紫外線的光保護(hù)性能；調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、細(xì)胞周期和凋亡等。在工業(yè)上類胡蘿卜素常被用作食品著色劑、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑和抗氧化劑等[2]。葉黃素可作為食品著色劑用于面條、蛋黃醬、色拉調(diào)味品以及烘焙食品中[3]；在豆腐乳等調(diào)味品中，利用番茄紅素具有超強(qiáng)的抗氧化活性，代替亞硝酸鹽防止食物腐敗變質(zhì)，有效延長(zhǎng)保質(zhì)期。然而，人工合成的類胡蘿卜素不具有這些特殊的生理功能[4]，因此天然類胡蘿卜素的制備顯得尤為重要。近幾十年來(lái)，科研工作者們致力于類胡蘿卜素提取方法的開發(fā)與改進(jìn)。本文綜述了類胡蘿卜素各種提取方法、原材料的前處理以及提取溶劑的選擇，對(duì)其今后更為廣泛的提取應(yīng)用具有一定的參考價(jià)值。

1 生物材料的預(yù)處理

植物和微藻細(xì)胞存在剛性細(xì)胞壁，其胞內(nèi)類胡蘿卜素與蛋白質(zhì)等大分子之間有強(qiáng)大的作用力，這就使溶劑很難進(jìn)入細(xì)胞，從而阻礙了提取過(guò)程中類胡蘿卜素的傳質(zhì)。在提取前應(yīng)用凍融、低溫研磨、高壓均質(zhì)等物理方法，酸、堿、表面活性劑等化學(xué)方法，酶催化等生物方法對(duì)材料進(jìn)行預(yù)處理，可有效增加類胡蘿卜素的提取效率。Singh等[5]對(duì)提取海洋真菌中蝦青素的各種物理、化學(xué)和機(jī)械方法進(jìn)行比較。結(jié)果表明：與直接萃取相比，溶劑萃取前用二甲基亞砜(DMSO)處理后，蝦青素產(chǎn)率提高了2.5倍。用鹽酸處理后，蝦青素的產(chǎn)率最高。蝦青素的產(chǎn)率與酸的濃度成正比，然而酸度過(guò)高會(huì)引起蝦青素降解。在不同的機(jī)械細(xì)胞破碎方法中，用超聲波處理的蝦青素產(chǎn)率是珠磨法、勻漿法以及研磨法的5～6倍。

2 溶劑的選擇

類胡蘿卜素具有疏水性，通常使用丙酮、氯仿、己烷、甲醇和乙醚等有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取。溶劑的選擇要考慮到諸多方面的因素，如生物材料的種類，水分含量及類胡蘿卜素的極性等。通常選擇丙酮和己烷分別提取極性和非極性類胡蘿卜素。提取混合極性的類胡蘿卜素時(shí)，最常使用丙酮/乙醇/己烷的混合溶劑。丙酮和乙醇可以與水互溶，能夠有效提取含有大量水分的植物材料中的類胡蘿卜素。Alfonsi等[6]試驗(yàn)了使用各種有機(jī)溶劑從番茄中提取番茄紅素，結(jié)果表明：與己烷、乙醚、二氯甲烷和氯仿相比，乙醇和丙酮的回收率分別達(dá)到80%和75%，同時(shí)這兩種溶劑對(duì)人體危害最小，是番茄紅素提取的優(yōu)選溶劑。

3 類胡蘿卜素的提取方法

3.1 索氏提取法

索氏提取法是一種液固萃取方法，它是利用在沸騰溫度下冷凝下來(lái)的萃取溶劑對(duì)樣品進(jìn)行反復(fù)萃取[7]，得到目標(biāo)化合物。然而，該方法耗時(shí)較長(zhǎng)，需使用大量溶劑，從而增加了萃取成本。Cardenas-Toro等[8]利用索氏提取法從壓制棕櫚纖維中提取棕櫚油類胡蘿卜素，將溶劑/樣品比優(yōu)化為20 (mL/g)，獲得較高產(chǎn)率，而滲濾(35 ℃，2.4 g/min)和加速溶劑萃取(55 ℃，40 bar，2.4 g/min)則產(chǎn)率較低。

3.2 加速溶劑萃取(ASE)

加速溶劑萃取是通過(guò)高壓萃取促進(jìn)細(xì)胞滲透性、分子間物理作用以及萃取溶劑的滲透，從而改善類胡蘿卜素提取過(guò)程中的傳質(zhì)。在高壓條件下，類胡蘿卜素結(jié)合蛋白發(fā)生變性，可以提高類胡蘿卜素的產(chǎn)率[9]。Zaghdoudi等[10]發(fā)現(xiàn)了ASE法提取不同極性類胡蘿卜素的最佳條件。以凍干杏、桃和柿子等水果為原材料，在40 ℃，103 bar壓力下，使用甲醇和四氫呋喃作為萃取劑，提取5 min，使葉黃素和玉米黃質(zhì)的回收率分別達(dá)到79%和71%。此外，ASE與傳統(tǒng)的溶劑萃取法相比，溶劑使用量較少而且不影響提取產(chǎn)率。

3.3 超臨界流體萃取(SFE)

超臨界流體萃取是使用超臨界CO2(SC-CO2)作為提取溶劑，從固體或液體基質(zhì)中提取類胡蘿卜素等不耐熱化合物的有效方法。與常規(guī)方法相比，超臨界CO2擴(kuò)散系數(shù)較高而粘度較低，能夠快速滲透到生物基質(zhì)中，從而提高萃取效率[11]。此外，該過(guò)程中使用的CO2可以在降壓過(guò)程中去除，使得提取物高度濃縮且沒(méi)有有機(jī)溶劑殘留，是提取類胡蘿卜素這種高純度不耐熱化合物的“綠色方法”。近年來(lái)，SFE與色譜技術(shù)如液相色譜(LC)、氣相色譜(GC)和超臨界流體色譜(SFC)等成功耦合，應(yīng)用于同時(shí)提取和分析類胡蘿卜素[12]。Pol等[13]采用SFE耦合高效液相色譜法(HPLC)，以番茄、葡萄柚、西瓜等新鮮水果為原材料，在90 ℃，400 bar壓力下，CO2流速為1.5 mL/min，以90%乙腈和10%甲基叔丁基醚作為流動(dòng)相，流速為1 mL/min，使番茄紅素的回收率達(dá)到了88.7%。

3.4 酶輔助提取(EAE)

酶輔助提取利用水解酶破壞細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)完整性，暴露細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)從而提高提取產(chǎn)率。常用的水解酶為纖維素酶和果膠酶，纖維素酶水解植物細(xì)胞壁中纖維素的1,4-β-d糖苷鍵，果膠酶分解細(xì)胞壁中的果膠物質(zhì)。Strati等利用纖維素酶和果膠酶(分別為70 U/g和122.5 U/g)從番茄、番石榴、胡蘿卜等中提取類胡蘿卜素，與非酶處理相比，處理后的回收率是未經(jīng)處理的6倍和10倍。

3.5 超聲輔助提取(UAE)

超聲輔助提取利用超聲波技術(shù)與其他提取方法聯(lián)合，用于提取熱不穩(wěn)定性生物活性物質(zhì)。該方法應(yīng)用廣泛、操作簡(jiǎn)單易行、節(jié)能環(huán)保。影響該提取方法的因素包括超聲功率、強(qiáng)度、溫度和樣品與溶劑比等。Yan等[14]從油菜籽中提取類胡蘿卜素，運(yùn)用響應(yīng)面法優(yōu)化了提取條件，提取溫度49.6 ℃，超聲功率252.9 W，樣品溶劑比41.4 (mL/g)，提取時(shí)間48.5 min，使類胡蘿卜素的回收率達(dá)到79.61%。Jaeschke等[15]利用超聲輔助提取法以微藻為原料提取類胡蘿卜素，在30 ℃，超聲功率664 W，75%的乙醇濃度下，使類胡蘿卜素回收率達(dá)到80%。

3.6 離子液體提取

離子液體(ILs)完全由陰陽(yáng)離子構(gòu)成，室溫下呈現(xiàn)液態(tài)，是提取類胡蘿卜素的“綠色溶劑”[16]。Desai等[17]利用ILs在45 ℃下提取血球囊腫細(xì)胞中的蝦青素，ILs具有強(qiáng)溶解能力，在帶電環(huán)境能夠起到保護(hù)蝦青素的作用，使其免于氧化，蝦青素回收率達(dá)到79%。同時(shí)，Bi等[18]從廢蝦料中提取蝦青素，試驗(yàn)了7種不同的離子液體，結(jié)果表明：與1-乙基咪唑鹽酸鹽、1-乙基咪唑四氟硼酸鹽等相比，1-正丁基-3-甲基咪唑鹽酸鹽(0.50 mol/L)的水溶液可獲得較高的蝦青素產(chǎn)率(82%)。

4 結(jié)論

天然類胡蘿卜素具有多種生理和藥理功能，其相關(guān)功能性產(chǎn)品的開發(fā)和應(yīng)用前景廣闊，在調(diào)味品行業(yè)的突出貢獻(xiàn)更是不容小覷，如何經(jīng)濟(jì)高效地“綠色”提取類胡蘿卜素成為近期的研究熱點(diǎn)。利用數(shù)學(xué)建模來(lái)預(yù)測(cè)生物材料和溶劑之間的相互作用，有助于選擇合適的溶劑，從而提高類胡蘿卜素的產(chǎn)率。超臨界流體萃取是目前提取類胡蘿卜素的“綠色方法”，但其設(shè)備成本高，對(duì)極性類胡蘿卜素的回收率較低。用于類胡蘿卜素提取的其他方法也都存在利弊，因此未來(lái)還需要對(duì)這些方法的成本、環(huán)境安全性、效率和再現(xiàn)性進(jìn)行進(jìn)一步的分析與評(píng)估，為今后類胡蘿卜素的提取工作提供一個(gè)借鑒，從而促進(jìn)類胡蘿卜素更高水平的加工和更好的利用[19]，為中國(guó)調(diào)味品行業(yè)的發(fā)展做出貢獻(xiàn)。

參考文獻(xiàn)：

[1]孫玉敬，喬麗萍，鐘烈洲，等.類胡蘿卜素生物活性的研究進(jìn)展[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2012，12(1)：160-166.

[2]趙延福，張慧，李慧，等.天然類胡蘿卜素功能性產(chǎn)品的開發(fā)和應(yīng)用[J].中國(guó)食品添加劑，2017(8):54-159.

[3]狄濟(jì)樂(lè).天然食用類胡蘿卜素的來(lái)源、功能性及其應(yīng)用[J].山西食品工業(yè)，2002(1)：2-6.

[4]李福枝，劉飛，曾曉希，等.天然類胡蘿卜素的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2007，28(9):227-232.

[5]Singh D，Gupta A，Wilkens S L，et al.Understanding response surface optimisation to the modeling of astaxanthin extraction from a novel strainThraustochytrium[J].Algal Research，2015(11)：113-120.

[6]Alfonsi K，Colberg J，Dunn P J，et al.Green chemistry tools to influence a medicinal chemistry and research chemistry based organisation[J].Green Chemistry，2008，10(1)：31-36.

[7]韋芳三，李純厚，戴明，等.索氏提取法測(cè)定海洋微藻粗脂肪含量及其優(yōu)化方法的研究[J].上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，20(4)：619-623.

[8]Cardenas F P，Alcáza S C，Coutinho J P,et al.Pressurized liquid extraction and low-pressure solvent extraction of carotenoids from pressed palm fiber: experimental and economical evaluation[J].Food and Bioproducts Processing，2015,94：90-100.

[9]Strati I F，Gogou E，Oreopoulou V，et al.Enzyme and high pressure assisted extraction of carotenoids from tomato waste[J].Food and Bioproducts Processing，2015,94：668-674.

[10]Zaghdoudi K，Pontvianne S，F(xiàn)ramboisier X，et al.Accelerated solvent extraction of carotenoids from Tunisian Kaki peach and apricot[J].Food Chemistry，2015,184：131-139.

[11]Zaghdoudi K，F(xiàn)ramboisier X，F(xiàn)rochot C，et al.Response surface methodology applied to supercritical fluid extraction of carotenoids from persimmon[J].Food Chemistry，2016,208：209-219.

[12]Pan J，Zhang C，Zhang Z，et al.Review of online coupling of sample preparation techniques with liquid chromatography[J].Analytica Chimica Acta，2014,815：1-15.

[13]Pol J，Hyotylainen T，Ranta-Aho O，et al.Determination of lycopene in food by online SFE coupled to HPLC using a single monolithic column for trapping and separation[J].Journal of Chromatography A，2004，1052(1-2)：25-31.

[14]Yan F，F(xiàn)an K，He J，et al.Ultrasonic-assisted solvent extraction of carotenoids from rapeseed meal: optimization using response surface methodology[J].Journal of Food Quality，2015，38(6)：377-386.

[15]Jaeschke D P，Rech R，Marczak L D F，et al.Ultrasound as an alternative technology to extract carotenoids and lipids fromHeterochlorellaluteoviridis[J].Bioresource Technology，2017,224：753-757.

[16]Grosso C，Valentao P，F(xiàn)erreres F，et al.Alternative and efficient extraction methods for marine-derived compounds[J].Marine Drugs，2015，13(5)：3182-3230.

[17]Desai R K，Streefland M，Wijffels R，et al.Novel astaxanthin extraction fromHaematococcuspluvialisusing cell permeabilising ionic liquids[J].Green Chemistry，2016，18(5)：1261-1267.

[18]Bi W，Tian M，Zhou J，et al.Task-specific ionic liquid-assisted extraction and separation of astaxanthin from shrimp waste[J].Journal of Chromatography B，2010，878(24)：2243-2248.

[19]要志宏，李波，張琛，等.胡蘿卜粉中提取類胡蘿卜素的工藝研究[J].中國(guó)調(diào)味品，2017，42(7)：152-155.