李相會(huì) 孫玲 孫健 張娜 吳紅麗

無(wú)乳鏈球菌檢測(cè)的影響因素及方法學(xué)改進(jìn)*

李相會(huì) 孫玲 孫健 張娜 吳紅麗

目的 針對(duì)無(wú)乳鏈球菌（GBS）檢出率較低的情況，分析和查找實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)中可能造成GBS檢出率過(guò)低的原因，從而改進(jìn)各環(huán)節(jié)的操作流程，更換高檢出率培養(yǎng)皿，提高GBS的陽(yáng)性檢出率。方法 根據(jù)不同的改進(jìn)環(huán)節(jié)將該實(shí)驗(yàn)研究數(shù)據(jù)分為4組。第1組：未改進(jìn)操作流程；第2組：采樣方法標(biāo)準(zhǔn)化；第3組：采集方法標(biāo)準(zhǔn)化后及時(shí)送檢；第4組：采集方法標(biāo)準(zhǔn)化后及時(shí)送檢，標(biāo)本接種于高檢出率培養(yǎng)基。通過(guò)回顧性實(shí)驗(yàn)研究，對(duì)4組標(biāo)本的GBS陽(yáng)性檢出率進(jìn)行比較。結(jié)果 第1組共采集標(biāo)本1 210例，其中陽(yáng)性標(biāo)本28例，陽(yáng)性率為2.3%；第2組共采集標(biāo)本850例，陽(yáng)性標(biāo)本38例，GBS陽(yáng)性檢出率為4.5%；第3組共采集標(biāo)本720例，陽(yáng)性標(biāo)本35例，GBS陽(yáng)性檢出率為4.9%；第4組共采集標(biāo)本990例，其中陽(yáng)性標(biāo)本84例，GBS陽(yáng)性檢出率達(dá)到8.5%。除第2組與第3組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）外，其余各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 改進(jìn)操作流程后無(wú)乳鏈球菌陽(yáng)性檢出率明顯提高，表明規(guī)范化操作、改進(jìn)操作流程，對(duì)于提高GBS檢出率具有重要意義。

無(wú)乳鏈球菌 影響因素 陽(yáng)性檢出率。

無(wú)乳鏈球菌又稱B群鏈球菌（Group B Streptococci，GBS）是一種革蘭陽(yáng)性鏈球菌，以其細(xì)胞壁多糖類(lèi)C物質(zhì)屬于Lancefield抗原結(jié)構(gòu)分類(lèi)中的B群而得名。GBS正常情況下寄居于婦女陰道和人體直腸隱窩處，逆行至宮腔可導(dǎo)致嚴(yán)重孕、產(chǎn)婦感染以及胎兒、新生兒死亡[1]。對(duì)于妊娠女性，該菌可感染羊水從而導(dǎo)致新生兒膿毒癥、肺炎、腦膜炎等。新生兒早發(fā)型感染主要引起肺炎和敗血癥，是新生兒死亡的主要原因之一。而晚發(fā)型感染主要引起腦膜炎，可導(dǎo)致嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥及聽(tīng)力喪失等不可逆損害。GBS早已被西方國(guó)家列為圍生期感染的首要病原菌之一[2]。目前國(guó)內(nèi)對(duì)GBS的危害高度關(guān)注，許多醫(yī)院均已開(kāi)展了妊娠婦女GBS的篩查工作，秦皇島市婦幼保健院對(duì)該菌的篩查工作已開(kāi)展多年，但陽(yáng)性檢出率一直低于其他地區(qū)的報(bào)道。因此，查找GBS檢出率的影響因素是該研究的主要目的，以指導(dǎo)臨床提前預(yù)防用藥，降低該菌對(duì)妊娠婦女及新生兒造成的危害。

對(duì)象與方法

1 對(duì)象 選取在秦皇島市婦幼保健院產(chǎn)前檢查的妊娠婦女，孕周在35～37周時(shí)采集標(biāo)本，檢測(cè)GBS。將研究對(duì)象分為4組，第1組為2015年2～5月采集的標(biāo)本，為未改進(jìn)操作流程的孕婦標(biāo)本1 210例。采集方法：除去陳舊的陰道分泌物，用一次性無(wú)菌拭子取陰道下1/3陰道壁粘膜分泌物及肛周聯(lián)合采樣，標(biāo)本采集后置無(wú)菌管中送檢，標(biāo)本接種于羊血營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板。第2組為2015年6～8月采集的標(biāo)本，依照標(biāo)準(zhǔn)化方法采集樣本。采集方法：采樣部位由原來(lái)采集陰道下1/3及肛周，改為陰道下1/3及直腸隱窩處，標(biāo)本接種于羊血營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板。第3組為2015年9～10月采集的標(biāo)本，除采集方法標(biāo)準(zhǔn)化外，進(jìn)一步規(guī)范送檢時(shí)間，要求標(biāo)本采集后立即送檢，一般不超過(guò)1 h；標(biāo)本接種于羊血營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板。第4組為2015年10～12月采集的標(biāo)本，在采集方法標(biāo)準(zhǔn)化和及時(shí)送檢的基礎(chǔ)上，規(guī)范接種流程，標(biāo)本接收后及時(shí)接種，從取樣到標(biāo)本接種不超過(guò)2 h，將標(biāo)本接種于血平板和GBS顯色平板。

2 方法 根據(jù)各組的改進(jìn)措施不同操作也各異。①采樣部位：除第1組取材為陰道下1/3陰道壁粘膜分泌物及肛周聯(lián)合采樣外，其余各組采樣為陰道下1/3及直腸隱窩處；②送檢時(shí)間：除第1組為限制送檢時(shí)間外，其余各組均要求采樣后及時(shí)送檢，一般不超過(guò)1 h；③接種時(shí)間：除第1、2組外，其余2組均要求標(biāo)本及時(shí)接種，從取樣到標(biāo)本接種不超過(guò)2 h；④接種平板：除第4組增加接種了GBS顯色平板外，其余各組只接種羊血瓊脂平板。各組標(biāo)本接種后置37℃、5%～10% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，溫育18～24 h，觀察平板上菌落特點(diǎn)。在血平板上GBS菌落呈灰色、扁平、半透明或不透明、表面光滑、凸起、菌落干燥，呈不易乳化、β-溶血環(huán)；在GBS顯色平板上菌落為紅色或紫紅色。選取可疑菌落進(jìn)行涂片鏡檢，同時(shí)進(jìn)行鑒定試驗(yàn)（包括觸酶試驗(yàn)、桿菌肽試驗(yàn)、CAMP試驗(yàn)）。鑒定試驗(yàn)與無(wú)乳鏈球菌形態(tài)特征相符合者，第2日挑取分純后單個(gè)菌落進(jìn)行上機(jī)鑒定及藥敏試驗(yàn)。

3 試劑及儀器 該實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)皿為安圖公司生產(chǎn)羊血營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和GBS顯色平板，標(biāo)準(zhǔn)菌株為金黃色葡萄球菌ACTT29213，所用儀器為BD公司生產(chǎn)的PHONEX1000，所用培養(yǎng)肉湯及鑒定板均為BD公司原裝進(jìn)口配套試劑。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

將檢測(cè)標(biāo)本根據(jù)改進(jìn)措施中涉及到的不同影響因素分4組，第1組共采集標(biāo)本1 210例，其中陽(yáng)性標(biāo)本28例，GBS陽(yáng)性檢出率為2.3%；第2組共采集標(biāo)本850例，陽(yáng)性標(biāo)本38例，GBS陽(yáng)性檢出率4.5%。第3組共采集標(biāo)本720例，陽(yáng)性標(biāo)本35例，GBS陽(yáng)性檢出率4.9%；第4組共采集標(biāo)本990例，其中陽(yáng)性標(biāo)本84例，GBS陽(yáng)性檢出率8.5%。各組比較結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 4組間無(wú)乳鏈球菌陽(yáng)性檢出率的比較

討 論

正常寄居于女性陰道和人體直腸隱窩處的GBS分離率可達(dá)30%[3]，國(guó)外相關(guān)報(bào)道亦顯示GBS的檢出率可達(dá)10%～30%[4]，并且有文獻(xiàn)報(bào)道，產(chǎn)前攜帶GBS的母親，其新生兒該菌的分離率高達(dá)65%[5]。GBS可導(dǎo)致新生兒膿毒癥、肺炎、腦膜炎，新生兒早發(fā)型感染主要引起肺炎和敗血癥，是新生兒死亡的主要原因之一。因此，提高妊娠婦女?dāng)y帶GBS的陽(yáng)性檢出率，可以有效指導(dǎo)臨床更好的對(duì)產(chǎn)婦和新生兒盡早采取預(yù)防保護(hù)措施，降低產(chǎn)婦與新生兒的感染風(fēng)險(xiǎn)。國(guó)內(nèi)有文獻(xiàn)[6-8]報(bào)道，標(biāo)本可接種于選擇轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基或在增菌肉湯中增菌，對(duì)于提高陽(yáng)性檢出率具有一定的成效。轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基的作用主要適用于標(biāo)本不能及時(shí)送檢的情況，防止由于長(zhǎng)時(shí)間溫、濕改變而造成細(xì)菌死亡，減低檢出率。而本院標(biāo)本采集來(lái)源基本為門(mén)診患者，能夠保證及時(shí)送檢，因此轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基的使用意義不大。增菌肉湯可抑制其他革蘭陰性菌生長(zhǎng)，適合目標(biāo)菌的生長(zhǎng)，有效提高GBS的檢出，但與GBS專用顯色培養(yǎng)基相比，增菌肉湯增菌后再進(jìn)行菌落分純及鑒定，所消耗的時(shí)間較長(zhǎng)，不能有效滿足臨床需求。兼顧提高陽(yáng)性檢出率及縮短檢測(cè)時(shí)間的考慮，本實(shí)驗(yàn)室從試驗(yàn)前、試驗(yàn)中的各操作環(huán)節(jié)進(jìn)行了有效改進(jìn)，同時(shí)引進(jìn)了GBS顯色培養(yǎng)基，使GBS陽(yáng)性檢出率由原來(lái)的2.3% 提高到8.5%。通過(guò)各組間的結(jié)果比較，發(fā)現(xiàn)每一個(gè)環(huán)節(jié)的改進(jìn)對(duì)于提高GBS檢出率均有一定的作用。其中第3組與第2組間的差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能因?yàn)闃?biāo)本送檢環(huán)節(jié)、在控制前存在的問(wèn)題不是很明顯，標(biāo)本基本都能按要求送達(dá)，但是經(jīng)過(guò)控制后，GBS陽(yáng)性率還是有了一定的提高，所以也不排除該因素對(duì)GBS檢出率的影響。而采樣部位與培養(yǎng)基的選擇對(duì)于GBS檢出率則有非常明顯的影響。通過(guò)各項(xiàng)舉措使GBS檢出率有了大幅度的提升，與其他地區(qū)報(bào)道[7-10]的陽(yáng)性率基本一致或高于某些地區(qū)。通過(guò)對(duì)各項(xiàng)影響因素的研究，改進(jìn)了操作流程后，提高了本實(shí)驗(yàn)室GBS的檢測(cè)水平，可有效指導(dǎo)臨床預(yù)防性用藥，降低產(chǎn)婦及新生兒的感染機(jī)率。

1 黃醒華，張為遠(yuǎn)．中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)［M］．北京：人民衛(wèi)生出版社，2012：76-77.

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3 陳東科，孫長(zhǎng)貴.實(shí)用臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)與圖譜[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：208.

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6 王輝，任健康，王明貴，主編.臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2015：348.

7 李相新，鄭芬，張玲華，等.女性生殖道B群鏈球菌顯色培養(yǎng)法篩查與耐藥性分析研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2015，25（19）：4379-4381.

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R378.1+2

A

1671-2587（2017）06-0609-03

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.06.023

*本課題受秦皇島市科技局計(jì)劃項(xiàng)目（No.201602A100）資助

066000 河北省秦皇島市婦幼保健院檢驗(yàn)科

李相會(huì)（1973–），女，河北秦皇島人，副主任檢驗(yàn)技師，學(xué)士，主要從事臨床檢驗(yàn)工作，（E-mail）rhxin1024@163.com。

吳紅麗，女，主要從事臨床檢驗(yàn)工作，

（E-mail）fybjyjyk@sina.com。

2017-06-22 ）

（本文編輯：王敏）