亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        不同emm基因型化膿性鏈球菌的菌落形態(tài)

        2021-08-05 07:11:38歐陽霖王小光宋馳萍陳明亮張穎華
        復旦學報(醫(yī)學版) 2021年4期
        關(guān)鍵詞:化膿性鏈球菌黏液

        歐陽霖王小光宋馳萍陳明亮張穎華△

        (1上海市閔行區(qū)疾病預防控制中心微檢科 上海 201101;2復旦大學公共衛(wèi)生學院閔行分院 上海 201101;3上海市疾病預防控制中心微生物實驗室 上海 200336)

        菌落是單個菌體或孢子在一定的固體培養(yǎng)基上生長繁殖后形成的肉眼可見的微生物聚集體,菌落形態(tài)(大小、形狀、邊緣、顏色等)是辨認和鑒定菌種的重要標志。研究表明菌落特征與細菌表型和分子特征相關(guān)[1-2],基因水平的變化會導致菌落形態(tài)的改變[2-4],同一種屬的病原菌基因型不同,菌落形態(tài)往往也不同,區(qū)別菌落形態(tài)有助于快速鑒別細菌種屬,甚至輔助鑒別基因型。

        化膿性鏈球菌屬A群β溶血鏈球菌,能引起猩紅熱、丹毒、新生兒敗血癥、腦膜炎、產(chǎn)褥熱以及鏈球菌變態(tài)反應性疾病等。菌落形態(tài)是實驗室初步判斷化膿性鏈球菌的重要依據(jù),化膿性鏈球菌在37℃培養(yǎng)18~24 h后,在血瓊脂平板上一般形成直徑約0.5 mm、圓形凸起、邊緣整齊、表面光滑或略粗糙、半透明或透明、β溶血的灰白色菌落[5]。表型由基因型決定,研究表明一些細菌基因的變化會導致同一種屬細菌的菌落形態(tài)變化[6-7]。目前微生物實驗室對菌落的觀察多停留在傳統(tǒng)的認知階段,未能更進一步區(qū)分菌落形態(tài)的細微差異,我們在對化膿性鏈球菌分離培養(yǎng)鑒定的過程中發(fā)現(xiàn)不同emm基因型分離株的菌落形態(tài)存在明顯差異,各亞菌落特點具有emm基因型特異性,總結(jié)如下。

        資料和方法

        菌株來源來源于上海市閔行區(qū)疾病預防控制中心微生物實驗室2019年1—12月自上海市閔行區(qū)猩紅熱監(jiān)測點兒童咽拭子標本中分離培養(yǎng)的化膿性鏈球菌菌株。

        菌落形態(tài)觀察菌株劃線接種于含5%無菌脫纖維羊血的瓊脂平板(上海科瑪嘉微生物技術(shù)有限公司),37℃培養(yǎng)18~24 h,觀察并記錄菌落形態(tài)(形狀,大小,溶血等)。

        生化確認實驗用化膿性鏈球菌的純培養(yǎng)物配置0.5麥氏濃度菌懸液,加入Vietek GP生化鑒定卡(生物梅里埃)進行生化鑒定,ID%為99%鑒定為化膿性鏈球菌。

        emm基因測序及分型emm基因擴增、測序和比對按照美國CDC網(wǎng)站化膿性鏈球菌測序方案進行(https://www.cdc.gov/streplab/groupa-strep/emm-typing-protocol.html)。以DNA為 模板,用通用引物PCR擴增,上游引物:5′-TATT(C/G)GCTTAGAAAATTAA-3′,下游引物:5′-GCAAGTTCTTCAGCTTGTTT-3′。反應體系為qPCR Mix 15 μL,Mg2+(25 mmol/L)上 下 游 引 物 各0.5 μL,DNA模板2 μL,補充ddH2O至30 μL。PCR擴增程序:94℃1 min;94℃15 s×15;47℃30 s×15;72℃延伸1 min 15 s×15;94℃15 s×15;47℃30 s×15;72℃延伸1 min 15 s,每個循環(huán)遞增10 s×15;72℃延伸7 min;4℃保持。委托上海生物人技術(shù)有限公司完成PCR擴增產(chǎn)物純化及測序。測序序列提交至數(shù)據(jù)庫比對(https://www2a.cdc.gov/ncidod/biotech/strepblast.asp),序列同源性99%判為同一emm基因型。

        結(jié)果

        菌落形態(tài)179株化膿性鏈球菌在血平板上菌落大小、表面特征和溶血情況存在肉眼可見的差別,據(jù)此分為A、B、C、D 4種菌落形態(tài)(圖1)。A:灰白色,約0.5 mm,表面光滑或粗糙,β溶血;B:灰白色,約1 mm,比A菌落大,表面光滑,β溶血;C:3~4 mm,為所有菌落里最大的,黏液型(這是明顯不同于其他3種菌落的特點),β溶血;D:約0.5 mm,表面光滑或粗糙,溶血現(xiàn)象不同于其他3種菌落,介于α溶血和β溶血之間。

        菌落形態(tài)與emm基因型的關(guān)系不同emm基因型的菌落特征明顯不同,同一基因型亞型的菌落特征相同。4種基因型的菌株有與之對應的4種不同的菌落形態(tài)(圖1),分別稱之為emm12,emm1,emm3和emm4型菌落(表1)。

        表1 179株四種emm基因型化膿性鏈球菌的菌落形態(tài)Tab 1 The colony characteristics of four emm genotypes in 179 S.pyogenes

        討論表型由基因型決定,表型差異源于基因水平的差異,菌落形態(tài)的不同也有其分子生物學基礎(chǔ)?;撔枣溓蚓鷈mm基因編碼膜表面M蛋白,不同emm基因5’端的高變區(qū)堿基組成不同,根據(jù)這一結(jié)構(gòu)特點把化膿性鏈球菌分成不同的emm基因型,也造成了菌落形態(tài)的不同。

        化膿性鏈球菌流行emm基因型存在國家/地區(qū)差異[8-12]。本研究中化膿性鏈球菌emm基因型和國內(nèi)外其他學者的研究結(jié)果相符[13-16],主要為emm12型和emm1型(80%~97%),因此就我國大部分地區(qū)而言,化膿性鏈球菌的菌落形態(tài)也以這兩種常見。這兩個基因型的菌落形態(tài)的明顯區(qū)別在于菌落大小,emm1型(包含3種亞型)菌落較大,約為emm12型(包含9種亞型)菌落的2倍大小,雖然兩種菌落只有0.5 mm的差異,但在血平板上肉眼非常容易觀察出差別,emm1型菌落溶血環(huán)比emm12型菌落大,因此可以憑借菌落大小區(qū)別這兩種常見的emm基因型菌株。除此之外,emm1型均為光滑型,而emm12型有光滑型和粗糙型兩種。

        與emm12和emm1不 同,emm3和emm4型 在 我國少見報道。和其他emm基因型菌落不同,emm3型菌落屬于黏液型菌落,半透明水滴狀,且菌落是所有化膿性鏈球菌中最大的,約是其他的3倍以上,容易辨別,與Tamayo等[17]對130株emm3型黏液型菌落的描述相符。黏液型化膿性鏈球菌的這一特征具有時效性,Crater等[18]研究表明其在對數(shù)生長初期菌落特征最明顯,到生長平臺期這一特征容易消失。我們在研究中也發(fā)現(xiàn)這種菌落在培養(yǎng)16~18 h黏液型最明顯,超過24 h則不明顯。因此我們在化膿性鏈球菌分離培養(yǎng)18 h時觀察一次。emm3型菌落屬于黏液型,但并不是所有黏液型都是emm3型,個別黏液型化膿性鏈球菌屬于emm6型[19]。emm3型是歐洲某些國家比較常見的基因型[10],我國少見報道,也有可能是因為該菌菌落形態(tài)比較特殊,不符合典型的化膿性鏈球菌的菌落形態(tài)特征,在實驗室檢測中易被忽略。

        emm4型菌落不同于其他化膿性鏈球菌的特征是溶血環(huán),介于α溶血和β溶血之間。emm4型菌落的溶血特征可能是由于emm4型菌株編碼溶血素的基因發(fā)生改變所致。本研究只分離到2株emm4型化膿性鏈球菌,國內(nèi)也鮮有報道emm4型分離株,部分原因可能是其非典型的菌落特點導致漏檢。韓國學者曾報道2017年韓國emm4型化膿性鏈球菌突然增多[20],在化膿性鏈球菌的鑒定過程中應注意觀察具有該特征的菌落,防止emm4型菌落漏檢。

        菌落形態(tài)是細菌鑒定過程中最早觀察到的特征,根據(jù)特有的菌落特征可以初步鑒別種屬。隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展和認知水平的提高,可以進一步細分同一種屬細菌不同基因型的菌落特點。本研究中檢測出4種emm基因型,菌落特點各有不同。由于我國目前常見的化膿性鏈球菌基因型為emm12和emm1型[13-14],因此我們在初步鑒別化膿性鏈球菌時,可根據(jù)兩種基因型不同的菌落特點早期辨別emm12和emm1型。

        綜上所述,化膿性鏈球菌菌落有明顯的emm基因型特異性,不同emm基因型菌落形態(tài)不同,同一基因型的各亞型菌落特征相同,可根據(jù)菌落形態(tài)的基因型特異性輔助早期辨別化膿性鏈球菌的emm基因型。

        作者貢獻聲明歐陽霖emm基因測序,論文撰寫。王小光,宋馳萍,張穎華菌株分離培養(yǎng)。陳明亮,張穎華研究設(shè)計,論文撰寫。

        利益沖突聲明所有作者均聲明不存在利益沖突。

        猜你喜歡
        化膿性鏈球菌黏液
        鏈球菌感染與銀屑病相關(guān)性探究
        地塞米松治療新生兒化膿性腦膜炎療效及不良預后的觀察
        關(guān)節(jié)鏡下肩袖修補術(shù)后肩關(guān)節(jié)化膿性感染的診治一例
        鞍區(qū)軟骨黏液纖維瘤1例
        會陰部侵襲性血管黏液瘤1例
        聊聊猩紅熱與化膿性扁桃體炎
        媽媽寶寶(2017年4期)2017-02-25 07:00:20
        黏液型與非黏液型銅綠假單胞菌Cif基因表達研究
        黏液水腫性苔蘚1例
        肺炎鏈球菌表面蛋白A的制備與鑒定
        中西醫(yī)結(jié)合治療肛周化膿性汗腺炎21例
        狠狠色噜噜狠狠狠777米奇小说 | 国产人与禽zoz0性伦| 久久久久高潮综合影院| 偷偷夜夜精品一区二区三区蜜桃| 亚洲欧美日韩国产精品一区| 亚洲一本到无码av中文字幕| 国产香港明星裸体xxxx视频| 精品视频手机在线免费观看 | 日本变态网址中国字幕| 亚洲高清无码第一| 夜夜高潮夜夜爽夜夜爱爱 | 国内偷拍第一视频第一视频区| 加勒比无码专区中文字幕| 好吊色欧美一区二区三区四区 | 高h小月被几个老头调教| 少妇人妻无奈的跪趴翘起| 中文乱码字幕在线中文乱码| 亚洲VA中文字幕无码毛片春药 | 国产又爽又黄的激情精品视频| 亚洲精品无码久久久久牙蜜区| 射精区-区区三区| av中国av一区二区三区av| 色婷婷一区二区三区四| 日韩激情网| 福利网址在线观看| 丰满少妇大力进入av亚洲| 久久www免费人成精品| 欧美v国产v亚洲v日韩九九| 人妻少妇中文字幕,久久精品| 成人激情视频一区二区三区 | 干出白浆视频在线观看| 人妻免费黄色片手机版| 丰满熟妇人妻av无码区 | 亚洲av永久无码精品一福利 | 亚洲av无码无线在线观看| 亚洲综合偷自成人网第页色| 中文字幕人妻一区二区二区| 亚洲性码不卡视频在线| 成激情人妻视频| 甲状腺囊实性结节三级| 国产成人久久精品区一区二区|