袁立志，周 瑋，孟凡珍

回、漢族非小細(xì)胞肺癌EGFR突變差異與臨床病理特征分析

袁立志，周 瑋，孟凡珍

目的 探討回、漢族肺癌患者EGFR(Epidermal growth factor recepor)突變差異與臨床病理特征的相關(guān)性。方法 收集確診非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)并且具備完整的臨床資料，通過組織活檢、淋巴結(jié)穿刺、惡性胸腔積液離心等方式獲取標(biāo)本完成基因檢測的NSCLC患者218例，統(tǒng)計(jì)分析NSCLC患者EGFR基因突變在回、漢族2個(gè)民族間及不同病理類型與臨床特征的相關(guān)性。結(jié)果 218例NSCLC患者中，回族突變率為21.53%，漢族為40.52%，2個(gè)民族間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。漢族組中，女性EGFR基因突變率為48.49%，明顯高于男性的34.48%；非吸煙患者EGFR突變率為55.88%,高于吸煙患者的28.24%；腺癌患者EGFR突變率為51.22%，高于非腺癌的28.17%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。65例回族肺癌患者中腺癌EGFR基因突變率為26.32%，非腺癌突變率為14.81%，腺癌組高于非腺癌組(P<0.05)。回族NSCLC患者EGFR基因突變率與年齡、性別及吸煙史無相關(guān)性。結(jié)論 漢族EGFR患者基因突變率高于回族；EGFR基因在漢族組患者中，女性、非吸煙和腺癌患者突變率較高；在回族組患者中，腺癌EGFR突變率高于非腺癌，但與年齡、吸煙史、性別無相關(guān)性。

非小細(xì)胞肺癌；表皮生長因子受體；TKI；回族

近年來，表皮生長因子受體-酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)對EGFR基因突變肺癌患者的顯著療效，將肺癌治療帶上了一個(gè)新的高度，為晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者帶來了新的希望，它們使EGFR基因突變陽性的非小細(xì)胞肺癌患者顯著獲益[1-2]。多項(xiàng)研究表明，對TKI治療敏感的NSCLC患者具有一定的臨床特征，如女性、腺癌、不吸煙[3]。我國是一個(gè)多民族組成的國家，寧夏是少數(shù)民族回族的主要居住地，近幾年觀察到回族肺癌患者發(fā)病率逐年提高，但EGFR基因突變率在回族肺癌患者的分布特點(diǎn)目前仍未見報(bào)道。為明確 EGFR基因在回族肺癌患者的突變特點(diǎn)，進(jìn)一步對患者有針對性地制定個(gè)體化治療方案提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集2011年9月-2015年9月我院經(jīng)病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)明確診斷為NSCLC，并且具備完整臨床資料的肺癌患者218例。漢族患者153例中，年齡<60歲65例，≥60歲88例；男性87例，女性66例；有吸煙史85例，無吸煙史68例；腺癌82例，非腺癌71例?；刈?5例患者中，年齡<60歲28例，≥60歲37例；男性29例，女性36例；有吸煙史12例，無吸煙史53例；腺癌38例，非腺癌27例。

1.2 方法

1.2.1 取材：所選218例肺癌患者均具備完整的臨床資料，通過電子支氣管鏡對腫瘤組織進(jìn)行活檢、刷檢、外科手術(shù)腫瘤切除、轉(zhuǎn)移淋巴組織針吸活檢、胸腔積液離心沉淀獲取腫瘤細(xì)胞等方式獲取檢測標(biāo)本。將檢測標(biāo)本放入專用標(biāo)本容器，用甲醛液進(jìn)行固定，由專一人員負(fù)責(zé)送往外地生物檢測中心進(jìn)行基因檢測。檢測中心統(tǒng)一采用探針擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)(ARMS)，檢測NSCLC的EGFR基因突變狀態(tài)。

1.2.2 基因檢測：檢測目標(biāo)為EGFR-TKI編碼區(qū)基因18-21外顯子，利用TaqDNA聚合酶缺乏3’→5’外切酶活性，該聚合酶如果進(jìn)行復(fù)制擴(kuò)增，其PCR引物的3’末端堿基必須具備與其互補(bǔ)的模板DNA，根據(jù)已經(jīng)獲得的不同類型的突變序列，設(shè)計(jì)與之相匹配對應(yīng)的“引物”片段用以檢測NSCLC患者EGFR基因突變狀態(tài)。反應(yīng)載體共設(shè)計(jì)了8管PCR反應(yīng)條，將DNA樣品、特異性PCR引物、雙環(huán)探針及氯化鎂、硫酸銨等化學(xué)物質(zhì)放入每個(gè)反應(yīng)體系管內(nèi)，通過凝膠電泳或?qū)崟r(shí)熒光定量PCR(real-time PCR)對復(fù)制擴(kuò)增產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物進(jìn)行分析[4]。

1.3 觀察指標(biāo)：EGFR基因突變結(jié)果的判斷，即：陽性為8個(gè)反應(yīng)體系管中1個(gè)或1個(gè)以上突變陽性或弱陽性；陰性為8個(gè) PCR反應(yīng)體系管中，7管突變反應(yīng)均為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，分析回、漢族2組間EGFR基因突變的差異，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 漢族NSCLC患者EGFR 基因突變檢測結(jié)果:本研究153例漢族NSCLC患者中，62例存在EGFR突變(40.52%，62/153)，包括第19號外顯子突變27例，第21號外顯子突變 24 例，第18號外顯子突變7例，第20號外顯子T790M突變患者4例。

2.2 漢族NSCLC患者EGFR 基因突變率與臨床特征及病理類型之間的關(guān)系:本研究漢族NSCLC患者中，男、女2組EGFR 基因突變率分別為34.48%(30/87)、48.49%(32/66),兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；有吸煙史患者 EGFR 突變率為 28.24%(24/85),無吸煙史EGFR 突變率為 55.88%(38/68)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；腺癌與非腺癌患者EGFR 基因突變率分別為 51.22%(42/82)、28.17%(20/71)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。漢族NSCLC患者EGFR 基因突變率與年齡分布無相關(guān)性(P>0.05),見表1。

表1 漢族NSCLC患者EGFR突變率與臨床特征及病理類型的關(guān)系

2.3 回族NSCLC患者EGFR基因突變檢測結(jié)果:65例回族NSCLC患者有14例EGFR 基因突變陽性(21.54%，14/65)，其中6例為外顯子19的缺失突變，7例為21外顯子L858R 點(diǎn)突變；第18號外顯子突變1例，未檢測到20 外顯子突變。

2.4 回族NSCLC患者EGFR 基因突變率與臨床特征及病理類型之間的關(guān)系:腺癌患者EGFR基因的突變率為26.32%(10/38)，非腺癌患者突變率為14.81%(4/27)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?；刈寤颊呓M中，EGFR 基因的突變與性別(P>0.05)、年齡(P>0.05)、有無吸煙史(P>0.05)無相關(guān)性,見表2。

表2 回族NSCLC患者EGFR突變率與臨床特征及病理類型的關(guān)系

2.5 漢、回族NSCLC患者EGFR基因突變差異:218例晚期NSCLC患者中，漢族患者153例，EGFR 基因突變率為40.52%(62/153)；回族患者65例，EGFR 基因突變率為 21.53%(14/65)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.240，P<0.05)。

3 討論

近幾年，EGFR在國內(nèi)外肺癌治療研究領(lǐng)域得到了廣泛關(guān)注，EGFR基因突變可以增加表皮生長因子受體的活性，隨后導(dǎo)致其下游信號通道被高度激活，從而促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。Lynch等首次報(bào)道了EGFR酪氨酸激酶編碼區(qū)基因突變是靶向藥物治療是否有效的一個(gè)重要條件[5]。通過對肺癌患者EGFR基因突變狀態(tài)的確定，用以指導(dǎo)肺癌患者是否接受TKI靶向治療已成為肺癌治療領(lǐng)域臨床醫(yī)師的共識。我國是一個(gè)多民族組成的國家，地域廣闊，不同地區(qū)、不同民族居民的生活方式有所不同。根據(jù)國內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)所述，EGFR基因突變率在我國不同區(qū)域有著顯著不同，如廣東地區(qū)以19外顯子缺失突變?yōu)橹鱗6]，北京地區(qū)19及21外顯子突變的檢出率大致相同[7]，廣西非小細(xì)胞肺癌患者 EGFR 突變率僅為 3.9%[8]，不同民族的EGFR基因突變率同樣存在差異，維吾爾族突變率(11.8%)低于漢族平均水平[9-10]。目前，大多數(shù)研究數(shù)據(jù)集中在亞洲及歐美人群，很少有數(shù)據(jù)對中東及中亞地區(qū)人群EGFR突變狀態(tài)進(jìn)行報(bào)道。寧夏回族自治區(qū)統(tǒng)計(jì)局2015年2月發(fā)布了寧夏人口統(tǒng)計(jì)相關(guān)數(shù)據(jù)，即2014年底，寧夏常住人口數(shù)為661.54萬，其中回族236.14萬，占總?cè)丝?5.7%，是全國所有省市、自治區(qū)中回族人口比例最多的區(qū)域，占全國回族人口超過1/5。因此，了解回族肺癌患者EGFR基因突變狀態(tài)，明確回、漢族患者基因突變差異，為寧夏地區(qū)肺癌患者提供個(gè)體化治療方案意義重大。

本研究結(jié)果顯示，在寧夏地區(qū)漢族NSCLC患者EGFR基因突變的檢出率為40.52%，其中女性患者突變率為48.49%，男性為34.48%，女性患者高于男性；腺癌組與非腺癌組患者EGFR基因突變率分別為51.22%和28.17%，腺癌患者的突變率較非腺癌患者明顯較高，這與國內(nèi)外研究報(bào)道較一致[11-12]。沒有吸煙史的NSCLC患者的突變率為55.88%，明顯高于有吸煙史患者突變率的28.24%。另外，本研究顯示，回族肺癌患者的EGFR基因突變率與漢族患者有著明顯差異。本研究所收集的病例資料顯示，在65例回族非小細(xì)胞肺癌患者中，EGFR基因總體突變率為21.53%，其中腺癌患者的突變率為26.32%(10/38)，非腺癌患者突變率為14.81%(4/27)，腺癌患者高于非腺癌患者(P<0.05)；但是回族患者EGFR基因的突變率與年齡、性別、有無吸煙史均無明顯相關(guān)性(P>0.05)。本研究中，回族患者EGFR基因突變率為21.53%，突變率較低，與目前相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的亞洲肺癌人群EGFR高突變率不一致，接近于歐美非小細(xì)胞肺癌患者的突變水平，可能這也是相對于漢族肺癌患者回族患者經(jīng)過靶向治療效果較差的原因之一。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，除外種族差異，地域因素在EGFR基因突變的發(fā)生中也發(fā)揮著一定的作用，EGFR突變率在歐美地區(qū)高加索人群肺癌患者不到10%，但在東亞地區(qū)突變率高達(dá)50%左右，表明肺癌的發(fā)生受遺傳學(xué)背景和環(huán)境因素的影響[13]。寧夏回族自治區(qū)是以回族為主體的少數(shù)民族，回族總?cè)藬?shù)占到了全國回民總數(shù)的1/5左右，各民族之間在遺傳、人種、文化飲食、生活習(xí)慣、住所等各個(gè)方面存在差異。本研究結(jié)果顯示，漢族NSCLC患者EGFR基因突變率為40.52%，回族為21.53%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。漢族肺癌患者突變率高于回族患者，這一結(jié)論在一定程度上可以解釋在臨床治療回族晚期非小細(xì)胞肺癌患者過程中，應(yīng)用EGFR-TKI效果不明顯的原因。

EGFR基因突變在NSCLC治療中存在著重要的臨床意義，在對肺癌患者的治療過程中發(fā)現(xiàn)，靶向藥物在肺癌患者治療過程中的療效個(gè)體差異較大。本研究提供了回族NSCLC的EGFR突變率信息，可以為寧夏地區(qū)在腫瘤領(lǐng)域工作的醫(yī)護(hù)人員提供重要信息。寧夏回族自治區(qū)位于中國大陸西北部，經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)仍相對落后，通過有效的方式篩選出不能從靶向治療獲益的肺癌患者，從而減輕該部分患者及其家庭的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，節(jié)約醫(yī)療資源。

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關(guān)于撰稿的要求

來稿應(yīng)具先進(jìn)性、科學(xué)性和邏輯性。來搞應(yīng)做到數(shù)據(jù)可靠、論點(diǎn)明確、結(jié)構(gòu)嚴(yán)謹(jǐn)、文字通順。論著、實(shí)驗(yàn)研究、臨床研究、調(diào)查研究等一般不少于6 000字(不包括圖表和參考文獻(xiàn))，經(jīng)驗(yàn)交流不少于4 000字，綜述、講座等不少于5 000字，病例報(bào)告等一般不超過1 500字(包括圖表和參考文獻(xiàn))。

An Analysis of EGFR Mutation and Clinicopathologic Characteristics in Hui and Han Patients with Non-small-cell Lung Cancer

YUANLizhi,ZHOUWei,MENGFanzhen.

DepartmentofRespiratoryDiseases,CardiovascularandCerebrovascularDiseaseHospitalofNingxiaMedicalUniversity,Yinchuan750002，China

ZHOUWei，Email：zhw0306@126.com

Objective To discuss the correlation of EGFR (epidermal growth factor recepor) mutation differences and clinicopathologic features between Hui and Han lung cancer patients.Methods Collect 218 cases of non-small cell lung cancer (NSCLC) patients with complete clinical data that were diagnosed from September，2011 to September，2015 in our hospital.These patients have been tested completely by the means of biopsy,lymph node biopsy,malignant pleural effusion centrifugation,etc.The correlation between EGFR gene mutation between Hui and Han nationalities as well as its relation with different clinical and pathological types were analyzed.Results Among the 218 cases,EGFR gene mutation of Han was 40.52%，while Hui was 21.53%.The difference was statistically significant (P<0.05).The EGFR gene mutation rate of Han female was 48.49%,which was higher than that of men which was 34.48%.The EGFR mutation rate of non-smoking patients was 55.88%,which was higher than that of smoking patients which was 28.24%.The EGFR mutation rate of adenocarcinoma patients was 51.22%,which was higher than that of non-adenocarcinoma which was 28.17%.All of these differences were statistically significant (P<0.05).Among the 65 cases of Hui patients,the EGFR gene mutation rate of those with adenocarcinoma was 26.32%,which was higher than that of non-adenocarcinoma patients which was 14.81%.The difference was statistically significant (P<0.05).Besides,the mutation rate of Hui cancer patients had no correlation with age,smoking history and gender.Conclusion The EGFR gene mutation rate was higher in women,non-smoking and adenocarcinoma cancer patients in Han.In Hui,the adenocarcinoma mutation rate was relatively high，but has no correlation with age,smoking history and gender.In conclusion，the EGFR mutation rate of Han was higher than that of Hui.

Non-smallcelllungcancer;EGFR;TKI;Hui

10.13621/j.1001-5949.2017.06.0484

寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院心腦血管病醫(yī)院，寧夏 銀川 750002

袁立志(1983-)，男，碩士研究生，主治醫(yī)師，從事呼吸系統(tǒng)相關(guān)疾病的診斷和治療研究方向。

周瑋，Email:zhw0306@126.com

http://kns.cnki.net/kcms/detail/64.1008.R.20170614.1314.006.html

R734.2

A

2016-05-05 [責(zé)任編輯]馬興忠