亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定黃酒中4種游離嘌呤

        2017-04-20 03:13:34劉鎮(zhèn)王靈芝章姍姍葛樂(lè)勇諸葛慶曾紅燕
        釀酒科技 2017年4期
        關(guān)鍵詞:鳥嘌呤次黃嘌呤黃嘌呤

        劉鎮(zhèn),王靈芝,章姍姍,葛樂(lè)勇,諸葛慶,曾紅燕

        (紹興市食品藥品檢驗(yàn)研究院,國(guó)家黃酒產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心,浙江紹興312000)

        反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定黃酒中4種游離嘌呤

        劉鎮(zhèn),王靈芝,章姍姍,葛樂(lè)勇,諸葛慶,曾紅燕

        (紹興市食品藥品檢驗(yàn)研究院,國(guó)家黃酒產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心,浙江紹興312000)

        建立了一種簡(jiǎn)單、快捷的黃酒中4種游離嘌呤含量的高效液相色譜分析方法。在0.5~20mg/L濃度范圍內(nèi),各嘌呤的響應(yīng)值與其相應(yīng)濃度呈良好線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)大于0.9990,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.8%~1.5%,檢出限在0.02~0.17mg/L,加標(biāo)回收率在89%~105%,符合分析測(cè)試要求。實(shí)驗(yàn)黃酒中游離腺嘌呤、鳥嘌呤、次黃嘌呤及黃嘌呤的含量分別為4.30mg/L、1.29mg/L、2.93mg/L與3.92mg/L。

        嘌呤;黃酒;高效液相色譜

        嘌呤是一種生物堿,由一個(gè)嘧啶環(huán)和一個(gè)咪唑環(huán)稠合而成,主要包括腺嘌呤、鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤及其衍生物等。在人體內(nèi)嘌呤代謝會(huì)變成尿酸,其中黃嘌呤是尿酸的直接來(lái)源,而次黃嘌呤和鳥嘌呤是尿酸的間接來(lái)源,二者均是在黃嘌呤氧化酶的作用下被氧化為黃嘌呤,最后黃嘌呤被氧化為尿酸。尿酸是人體內(nèi)一些有害活性物質(zhì)的有效清除劑,包括羥自由基、超氧負(fù)離子、單態(tài)氧及高鐵血紅素等[1],因此嘌呤代謝正常的人食用含嘌呤較高的食物對(duì)機(jī)體是有益的。但是經(jīng)常進(jìn)食高嘌呤類食物,使腎臟不能將過(guò)多的嘌呤代謝物經(jīng)尿液排出,會(huì)造成血液尿酸的濃度超過(guò)正常值,尿酸鹽晶體可沉積于關(guān)節(jié)、軟組織、骨骼和腎臟等處,從而引發(fā)一系列疾病,如痛風(fēng)病、高尿酸血癥、腎臟疾病等等[2-3]。

        目前關(guān)于酒類食物中嘌呤的研究主要集中在啤酒上[4],其他酒類中嘌呤的研究則罕見(jiàn)報(bào)道。黃酒屬于非蒸餾酒,也含有一定量的嘌呤。對(duì)黃酒中嘌呤的檢測(cè)研究可為補(bǔ)充完善我國(guó)食物成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)提供數(shù)據(jù),為痛風(fēng)等嘌呤代謝障礙性疾病患者的健康飲酒提供參考。

        反相色譜是目前嘌呤最常用的分離模式[5-6]。微粒填料技術(shù)、化學(xué)鍵合技術(shù)以及合適的流動(dòng)相使反相色譜系統(tǒng)能有效、快速分離許多化合物。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定黃酒中游離的腺嘌呤、鳥嘌呤、次黃嘌呤及黃嘌呤,建立了一種方便、快捷的檢測(cè)方法。

        1 材料與方法

        1.1 材料與儀器

        樣品:市售某品牌黃酒。

        試劑:腺嘌呤(BR)、鳥嘌呤(BR)、黃嘌呤(BR)、次黃嘌呤(BR)、85%磷酸(AR)、KH2PO4(AR)、NaOH(AR),所有試劑均由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

        儀器:高效液相色譜儀(Agilent1260),精密電子天平(梅特勒-托利多,ME204E),酸度計(jì)(梅特勒-托利多,S220)。

        1.2 色譜條件

        色譜柱:ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6mm× 250 mm,5μm);柱溫:25℃;流動(dòng)相:0.02 mol/L KH2PO4-H3PO4緩沖溶液(pH4.0);流速:1m L/m in;進(jìn)樣量:20μL;檢測(cè)器:紫外檢測(cè)器(UV);檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm。

        1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

        準(zhǔn)確稱取腺嘌呤、鳥嘌呤、黃嘌呤和次黃嘌呤標(biāo)樣25mg,分別用超純水定容至25m L,配制濃度為1mg/m L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(嘌呤不易溶于水,可加入NaOH溶液助溶)。將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液稀釋配制成標(biāo)準(zhǔn)系列濃度:0.5mg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L。在上述色譜條件下進(jìn)行分析,以每種物質(zhì)的峰面積與標(biāo)樣濃度做線性回歸曲線。

        1.4 樣品測(cè)定

        將待測(cè)黃酒樣品用0.45μm針式過(guò)濾頭過(guò)濾,濾液進(jìn)行HPLC分析。

        2 結(jié)果分析

        2.1 色譜分析條件的確認(rèn)

        嘌呤為弱極性堿性化合物,可采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱分析。柱溫、流動(dòng)相組分、流動(dòng)相pH值和流速等對(duì)4種嘌呤的分離效果均有一定的影響,參考他人的研究成果[7-8]發(fā)現(xiàn),以0.02mol/L KH2PO4-H3PO4緩沖溶液(pH4.0)為流動(dòng)相,在1m L/m in流速下,25℃柱溫時(shí),4種嘌呤在15m in內(nèi)可達(dá)到完全分離(見(jiàn)圖1),出峰順序依次為鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤和腺嘌呤,與文獻(xiàn)結(jié)果一致。

        圖1 4種嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

        鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤和腺嘌呤均有共軛雙鍵,在紫外區(qū)有強(qiáng)烈的吸收,其吸收峰在220~300 nm之間。用二極管陣列檢測(cè)器(DAD)對(duì)嘌呤標(biāo)樣進(jìn)行檢測(cè),并保存全光譜,結(jié)果見(jiàn)圖2。綜合考慮各種嘌呤的吸收峰,選擇以254 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

        圖2 4種嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品的全光譜圖

        2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程和相關(guān)系數(shù)

        在上述方法條件下,分別將配制的各組分濃度為0.5mg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液注入液相色譜儀進(jìn)行分離測(cè)定,以峰面積與標(biāo)樣濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知,在0.5~20mg/L濃度范圍內(nèi),4種嘌呤的峰面積響應(yīng)值與濃度呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2大于0.9990。

        2.3 精密度和檢出限

        同一樣品連續(xù)進(jìn)樣6次,在相同的條件下進(jìn)行色譜分析,根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD,結(jié)果顯示RSD值均小于2%(見(jiàn)表2)。說(shuō)明本方法重復(fù)性良好,符合分析檢測(cè)試驗(yàn)的要求。以信噪比3∶1為檢出限,信噪比10∶1為定量限計(jì)算其檢測(cè)限,結(jié)果見(jiàn)表2。

        表1 各嘌呤的標(biāo)準(zhǔn)曲線

        表2 嘌呤的精密度及檢測(cè)限

        2.4 加標(biāo)回收率

        向已知嘌呤含量的黃酒樣品中加入一定量的嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品,進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表3。

        2.5 黃酒中4種游離嘌呤的測(cè)定結(jié)果

        對(duì)市售某品牌黃酒中的游離嘌呤進(jìn)行測(cè)定,采用保留時(shí)間與光譜圖定性,外標(biāo)法定量。測(cè)得游離鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤和腺嘌呤分別為1.29mg/L、2.93mg/L、3.92mg/L和4.30mg/L。

        3 結(jié)論

        反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定黃酒中4種游離嘌呤的條件為:ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱,柱溫25℃,進(jìn)樣量20μL,0.02 mol/L KH2PO4-H3PO4緩沖溶液(pH4.0)為流動(dòng)相,流速1.0 m L/m in,檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。4種嘌呤的標(biāo)準(zhǔn)曲線呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2大于0.9990,檢出限在0.02~0.17mg/L。鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤和腺嘌呤以該方法測(cè)定時(shí)的精密度分別為0.8%、0.6%、1.4%和1.5%,加標(biāo)回收率分別為89.9%,105%、92.1%和94.1%,符合分析檢測(cè)試驗(yàn)的要求。通過(guò)該方法測(cè)得市售某品牌黃酒中游離鳥嘌呤、次黃嘌呤、黃嘌呤和腺嘌呤分別為1.29mg/L、2.93mg/L、3.92mg/L和4.30mg/L。

        [1]張昌穎.核酸生物化學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1993:307-330.

        [2]FUKUUCHIT,YAMAOKAN,KANEKO K.Analysisof intra-and extracellular levelsof purinebases, nucleosides,and nucleotides in HepG2Cellsby highperformance liquid chromatography[J].Analytical sciences,2015,31(9):895-901.

        [3]陳偉,方衛(wèi)綱,顧蘋,等.富嘌呤食物攝入及肥胖、飲酒等因素與高尿酸血癥的相關(guān)性[J].中國(guó)臨床營(yíng)養(yǎng)雜志,2007, 15(2):70-74.

        [4]王海容,付大友.啤酒中嘌呤類物質(zhì)測(cè)定方法的研究進(jìn)展[J].釀酒科技,2009(6):95-98.

        [5]FUKUUCHIT,YASUDAM,INAZAWAK,etal.A simple HPLCmethod for determining the purine content of beerand beer-like alcoholic beverages[J].Analytical sciences,2013,29(5):511-517.

        [6]呂兵兵,張進(jìn)杰,儲(chǔ)銀,等.反相高效液相色譜法檢測(cè)帶魚糜中的嘌呤含量[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào),2012,12(7):192-198.

        [7]王海容,王蓉,付大友,等.啤酒中嘌呤類物質(zhì)的測(cè)定研究[J].釀酒科技,2008(10):107-110.

        [8]凌云,王新宴,雍煒,等.高效液相色譜法檢測(cè)肉類食品中4種嘌呤堿[J].分析化學(xué),2008,36(6):724-728.

        SimultaneousDeterm ination of Four Free Purines in Yellow RiceW ine by Reversed Phase HPLC

        LIU Zhen,WANG Lingzhi,ZHANG Shanshan,GELeyong,ZHUGEQing and ZENGHongyan
        (NationalQuality Supervision&Testing Center for Yellow RiceWine,Shaoxing Instituteof Food and Drug Testing,Shaoxing,Zhejiang 312000,China)

        A simplemethod for simultaneous determination of four free purines in yellow ricew ine by RP-HPLC had been developed. Within the range of 0.5mg/L to 20mg/L,the response of each purine showed a good linear relationship w ith its correlation coefficient R above 0.9990,RSD w ithin 0.8%to 1.5%,detection lim its between 0.02mg/L to 0.17mg/L,and the recoveries between 89%to 105%.The determ ination results suggested that the contentof free adenine,guanine,hypoxanthine and xanthine in yellow rice w ine were4.30mg/L,1.29mg/L,2.93mg/L and 3.92mg/L respectively.

        purine;yellow ricew ine;high performance liquid chromatography

        TS262.4;TS261.7

        A

        1001-9286(2017)04-0100-03

        10.13746/j.njkj.2016347

        2016-11-23

        劉鎮(zhèn)(1986-),女,工程師,博士,主要從事食品檢測(cè)。

        優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間:2017-01-25;地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20170125.0851.008.htm l。

        猜你喜歡
        鳥嘌呤次黃嘌呤黃嘌呤
        枯草芽孢桿菌產(chǎn)腺苷補(bǔ)料發(fā)酵工藝的研究
        8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶與支氣管哮喘關(guān)系的研究進(jìn)展
        藥用植物中黃嘌呤氧化酶抑制劑的研究進(jìn)展
        中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:14
        銀杏酸單體對(duì)黃嘌呤氧化酶的體外抑制活性研究
        冷藏期間豬肌肉中肌苷酸沉積規(guī)律研究
        2-氨基-6-氯鳥嘌呤的合成工藝改進(jìn)研究
        8-羥鳥嘌呤可促進(jìn)小鼠骨骼肌成肌細(xì)胞的增殖和分化
        添加次黃嘌呤對(duì)環(huán)磷酸腺苷發(fā)酵產(chǎn)苷的影響
        鳥嘌呤在聚L-甲硫氨酸/石墨烯修飾電極上的電化學(xué)行為及測(cè)定
        黃嘌呤和尿酸在修飾電極上的電化學(xué)行為及測(cè)定研究
        国产精品久久婷婷六月丁香| 日韩高清毛片| 国产一区二区欧美丝袜| 日本在线无乱码中文字幕| 午夜天堂av天堂久久久| 日日澡夜夜澡人人高潮| 久久精品国产免费观看99| 免费人成网在线观看品观网| 久久精品国产av一级二级三级| 免费人妻无码不卡中文字幕18禁 | 亚洲av熟妇高潮30p| 国产aⅴ丝袜旗袍无码麻豆| 青青草手机免费播放视频| 中国老熟妇506070| 精品国产a∨无码一区二区三区 | 大又大粗又爽又黄少妇毛片| 日韩AV无码免费二三区| 亚洲国产精品成人av| 青春草免费在线观看视频| 久久久精品456亚洲影院| 精品久久久久久蜜臂a∨| 亚洲av极品尤物不卡在线观看| 亚洲欧美日韩综合一区二区| 疯狂做受xxxx高潮欧美日本| 日本韩国三级aⅴ在线观看| 日韩中文字幕不卡在线| 97精品久久久久中文字幕 | 国产精品麻豆一区二区三区| 成人网站在线进入爽爽爽| a在线观看免费网站大全| 激情五月婷婷久久综合| 在线观看国产视频你懂得| 亚洲综合色区另类av| 久久久久久久妓女精品免费影院| 国产精品第一区亚洲精品| 精品人妻大屁股白浆无码| 精品熟女少妇av免费观看| 91国产超碰在线观看| 久久精品中文少妇内射| 女厕厕露p撒尿八个少妇| 亚洲色四在线视频观看|