王 軍，王 艷，孫 云，李 磊

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肺炎支原體藥敏檢測培養(yǎng)與膠體金法聯(lián)合應(yīng)用的臨床價值

王 軍，王 艷，孫 云，李 磊

目的 對比肺炎支原體(MP)藥敏檢測培養(yǎng)法與膠體金法(GIA)在MP感染兒童檢測中的差異，探討其對早期診斷的價值。方法 對2 000例MP藥敏檢測培養(yǎng)、GIA檢測結(jié)果及治療效果進行比較。結(jié)果 MP藥敏檢測培養(yǎng)陽性率(33.6%)較GIA(23.4%)高(P<0.05)。MP藥敏檢測培養(yǎng)+GIA靈敏度85.21%、特異度99.84%、陽性似然比532.56%、陽性預測值99.54%、陰性預測值94.2%、一致率95.54%及正確指數(shù)0.851均高于單一檢測，同時陰性似然比0.15% 低于單一檢測。聯(lián)合檢測組10 d臨床治愈率、單藥治療有效率較GIA組高(P<0.05)，不良事件發(fā)生率較GIA組低(P<0.05)。結(jié)論 兩種方法聯(lián)合檢測MP更加靈敏、準確，是診斷MP感染的極好指標，其聯(lián)合檢測的應(yīng)用明顯縮短了病程，減少了廣譜抗生素使用及不良事件的發(fā)生，改善了預后。

肺炎支原體；支原體藥敏培養(yǎng)；膠體金法；臨床價值

肺炎支原體(MP)分布廣泛，主要由呼吸道飛沫傳播，有MP感染非流行年和流行年之別，呈現(xiàn)季節(jié)高峰(冬季為多)及年齡分布(學齡兒童為多)等特征，平時散發(fā)，在3～7年地區(qū)性流行一次[1]。MP感染偶可出現(xiàn)暴發(fā)流行，超過50%的易感人群被感染，多無癥狀或僅有輕度臨床癥狀，流行期內(nèi)可有高達40%及以上的社區(qū)獲得性肺炎(CAP)由MP感染所致[2]。近年來嬰幼兒及兒童感染發(fā)病率呈逐年遞增趨勢，并可引起多系統(tǒng)損害。MP感染性肺炎的檢測方向尚無明確的目標。本文采用MP藥敏檢測培養(yǎng)法與膠體法(GIA)對我院400例下呼吸道感染患兒進行聯(lián)合檢測，并對檢測結(jié)果進行簡要分析，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2012年8月-2015年11月在我院普兒科住院治療的下呼吸道感染患兒，符合MP感染癥狀、體征，起病至入院時間平均3 d(1～5 d)，共5 509例。在其中采用分層(就診年份及患兒年齡)隨機抽樣法抽取2 000例，3月齡～12歲，中位年齡4.87歲，于入院當天采集咽喉部分泌物行MP藥敏檢測培養(yǎng)，給予大環(huán)內(nèi)酯類(MP藥敏檢測培養(yǎng)陽性)或其他類(MP藥敏檢測培養(yǎng)陰性)藥物治療，并于病程第7～10天對MP藥敏檢測培養(yǎng)陽性的患兒采集靜脈血行GIA檢測；檢測陽性者繼續(xù)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療4～6周，陰性且前期大環(huán)內(nèi)酯類治療有效者繼續(xù)治療4～6周，陰性且前期大環(huán)內(nèi)酯類治療無效者停用，給予其他藥物治療至痊愈。對MP藥敏檢測培養(yǎng)陰性的患兒，于病程第7～10天行GIA檢測，陽性者給予大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療4～6周，陰性者排除MP感染，繼續(xù)其他類藥物治療直至痊愈。采用上述抽樣法抽取2 000例，年齡3月齡～12歲，中位年齡4.6歲作為對照組。入院后未行MP藥敏檢測培養(yǎng)法檢測MP，直接給予頭孢類/青霉素類抗生素治療，效果欠佳者，于病程7～10 d行GIA檢測，陽性者換用或聯(lián)合使用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療至痊愈。

1.2 MP肺炎診斷標準：①持續(xù)劇烈咳嗽，X線所見遠較體征為顯著；②白細胞數(shù)大多正?；蛏栽龈?，血沉多增快，Commbs試驗陽性；③青、鏈霉素及磺胺藥無效；④血清冷凝集素(屬IgM)大多滴度上升至1∶32或更高，陽性率50%～75%，病情越重陽性率越高；⑤.血清特異性抗體測定陽性等[1]。

1.3 不良事件：除呼吸系統(tǒng)外的其他系統(tǒng)損害，如Stevens-Johnson綜合征、溶血性貧血、肝功能損害、彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)、神經(jīng)系統(tǒng)損害及心血管系統(tǒng)損害等。

1.4 方法：MP藥敏檢測培養(yǎng)，MP藥敏檢測培養(yǎng)基由陜西瑞凱生物科技有限公司生產(chǎn)提供。無菌采集患兒咽拭子標本，置37.0 ℃孵育箱中培養(yǎng)24 h觀察結(jié)果，培養(yǎng)基顏色由原來的紅色變成黃色判別為陽性，培養(yǎng)基顏色保持不變?yōu)殛幮浴IA試劑盒由濰坊市康華生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)提供。采集患兒靜脈血2～3 mL于試管內(nèi)(未抗凝處理)，置于37.0 ℃水浴箱中孵育15～20 min，離心3 000 r/min，5～15 min，分離血清(有溶血、黃疸、高脂血的血清標本均為不合格標本)，按使用說明書嚴格操作。反應(yīng)板孔C端及T端均現(xiàn)紅色圓斑，即MP抗體陽性；反應(yīng)板孔C端現(xiàn)紅色圓斑，而T端不現(xiàn)則為MP抗體陰性；C端或兩端均不現(xiàn)紅色圓斑則提示試劑盒失效。

1.5 檢測指標：評價真實性的指標，包括靈敏度(Sen)、特異度(Spe) 、陽性似然比(+LR)、陰性似然比(-LR)、陽性預測值(PPV)、陰性預測值(NPV)、正確指數(shù)及一致率共8項。

1.6 統(tǒng)計學方法：采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測結(jié)果比較：2 000例患兒MP藥敏檢測培養(yǎng)陽性率33.6%(672/2 000)，GIA檢測陽性率23.4%(468/2 000)。MP藥敏檢測培養(yǎng)的陽性率高于GIA，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=51.06，P<0.05)，見表1。

表1 兩種檢驗方法檢驗結(jié)果的比較[n(%)]

2.2 兩種MP檢測方法的檢測結(jié)果評價比較：MP藥敏檢測培養(yǎng)優(yōu)于GIA，聯(lián)合檢測優(yōu)于單一檢測，且其串聯(lián)實驗的靈敏度63.25%、特異度99.85%，并聯(lián)實驗的靈敏度89.02%、特異度92.56%，見表2。

表2 血清學檢測方法評價指標的比較(%)

2.3 治療結(jié)果：MP藥敏檢測培養(yǎng)聯(lián)合GIA檢測診斷支原體感染患兒434例，大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療4～6周治愈427例(98.4%)，聯(lián)合其他類抗生素治愈7例(1.6%)，10 d臨床治愈408例(94.0%)，不良事件發(fā)生1例(0.2%)。對照組資料采用GIA法診斷MP感染患兒750例，大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療4～6周治愈232例(30.9%)，聯(lián)合其他類抗生素治愈87例(11.6%)，10 d臨床治愈411例(62.0%)，不良事件發(fā)生47例(6.3%)。聯(lián)合檢測組治療效果優(yōu)于GIA組，單藥治療有效率較GIA組高，不良事件發(fā)生率較GIA組低，見表3。

表3 2組治療結(jié)果的比較[n(%)]

3 討論

MP為無細胞壁的原核生物，是引起社區(qū)獲得性肺炎的主要病原體[3-5]，同時也是原發(fā)性非典型肺炎與其他呼吸道感染的共同病原體[6-7]，它可以引起一系列呼吸道癥狀，如陣發(fā)性刺激性咳嗽，咽喉痛，痰液黏稠與(或)膿痰和各種并發(fā)癥，如支氣管哮喘、急性呼吸窘迫綜合征、格林-巴利綜合征、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、冠狀動脈疾病、心肌炎、心包炎、腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、腎炎等[8-10]，以此，早期靈敏、特異的檢測診斷尤為重要。目前常見檢測MP的幾種方法，包括藥敏培養(yǎng)、血清學檢測及實時熒光定量PCR技術(shù)[11-13]。陸權(quán)[14]等的研究結(jié)果顯示，MP感染是繼細菌、病毒之后兒童呼吸道感染的又一重要致病原，在兒童中的感染率為18.5%[5]。MP-IgM在患者感染MP后3 d升高，病后2周消失76.5%[15]，因其在較長時間內(nèi)均可檢出，故MP-IgM的血清學檢驗較為常用。本檢測結(jié)果顯示，呼吸道感染患兒MP藥敏檢測培養(yǎng)陽性檢出率為33.6%，較宋世軍等[16]的研究檢出率43.6%低；GIA檢測的陽性檢出率為23.4%，較國內(nèi)研究者[17]的研究檢出率25.8%低，考慮結(jié)果受樣本采集地區(qū)自然(氣候、地理等)及社會(衛(wèi)生習慣、醫(yī)療衛(wèi)生狀況)因素等多種因素的影響。但無論如何，如此高的感染率應(yīng)引起重視。

MP感染在臨床較常見，對2 000例符合支原體感染相關(guān)臨床特點的患兒進行MP藥敏檢測培養(yǎng)和GIA聯(lián)合檢測，結(jié)果顯示MP藥敏檢測培養(yǎng)的陽性率高于GIA；評價真實性的指標對比表明，聯(lián)合試驗(檢測)Sen、Spe 、+ LR、PPV、NPV、一致率及正確指數(shù)均高于MP藥敏檢測培養(yǎng)及GIA單一檢測，同時-LR低于單一檢測。聯(lián)合檢測優(yōu)于單一檢測，MP藥敏檢測培養(yǎng)優(yōu)于GIA，串聯(lián)試驗進一步提高了檢查的特異度(99.85%)，并聯(lián)試驗提高了敏感度(89.02%)，從而增加了收益(收獲量)，使得更多的患者在早期得到明確診斷；及時給予大環(huán)內(nèi)酯類抗生素單藥治療4～6周，治愈率(98.4%)較GIA組(30.9%)高，不良事件發(fā)生率(0.2%)較GIA組(6.3%)低。因此，我們認為MP藥敏檢測培養(yǎng)與GIA聯(lián)合應(yīng)用明顯縮短病程，減少了抗生素使用及不良事件的發(fā)生，從而改善了預后。MP藥敏檢測培養(yǎng)與GIA檢測聯(lián)合應(yīng)用對于MP的檢測敏感、快速、特異，對于早期診斷具有明顯優(yōu)勢，在臨床的優(yōu)越性高于任意其一，如條件有限可單用MP藥敏檢測培養(yǎng)或GIA檢測，仍可達到較為準確的檢測結(jié)果。因此，此兩者均是MP感染早期診斷的重要手段，且易于廣泛推廣。

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10.13621/j.1001-5949.2017.02.0173

寧夏銀川市婦幼保健院普兒科，寧夏 銀川 750001

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2016-08-19 [責任編輯]李 潔