谷仿麗，陳乃富，余茂耘，徐海軍

(1.皖西學院 生物與制藥工程學院，安徽 六安 237012；2.安徽省石斛產(chǎn)業(yè)化開發(fā)協(xié)同創(chuàng)新中心，安徽 六安 237012)

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霍山石斛多糖對肥胖小鼠氧化應激的影響

谷仿麗1，2，陳乃富1，2，余茂耘1，徐海軍1，2

(1.皖西學院 生物與制藥工程學院，安徽 六安 237012；2.安徽省石斛產(chǎn)業(yè)化開發(fā)協(xié)同創(chuàng)新中心，安徽 六安 237012)

為了探討霍山石斛多糖對肥胖小鼠氧化應激的影響，給予高脂飲食8周復制肥胖小鼠模型，給予霍山石斛多糖7周，檢測小鼠體重、Lee’s、體脂比、血清游離脂肪酸(FFA)、血清胰島素(INS)、空腹血糖(FBG)、肝谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px)、肝過氧化物歧化酶(SOD)、肝總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)。結(jié)果顯示：霍山石斛高劑量組顯著降低模型小鼠體重、Lee’s、體脂比、FFA、INS、和MDA，顯著提高GSH-Px、SOD、T-AOC水平 (P<0.05v模型組)，F(xiàn)BG有降低趨勢，但不顯著。因此，霍山石斛多糖具有降低肥胖小鼠氧化應激的作用。

霍山石斛；多糖；小鼠；氧化應激

石斛為蘭科石斛屬的常用名貴中藥材，具有滋陰清熱、益胃生津、潤肺止咳的功效；霍山石斛為石斛屬一種，主要分布于安徽霍山縣及鄰近地區(qū)[1]，以其味甘、粘質(zhì)厚成為石斛中的極品，備受歷代醫(yī)家推崇[2]。由于人們掠奪性的采挖野生霍山石斛，致使資源已近枯竭，市場供不應求；為此，本課題組進行霍山石斛組織快繁研究及原產(chǎn)地大規(guī)模種植研究，成功解決了資源緊缺的問題，為探討霍山石斛為石斛中“極品”的現(xiàn)代藥理學研究提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。

隨著我國經(jīng)濟的發(fā)展和人們生活水平的不斷提高，城鄉(xiāng)居民的膳食結(jié)構(gòu)發(fā)生了巨大的變化，表現(xiàn)為膳食結(jié)構(gòu)趨向高能量密集、脂肪和糖類攝入過多，體內(nèi)能量代謝旺盛，自由基增加從而誘發(fā)氧化應激。研究證明氧化應激是許多疾病發(fā)生發(fā)展過程的共同作用機制，這些疾病包括心血管疾病、胰島素抵抗性糖尿病、非酒精性脂肪肝、炎性腸病等[3-5]。目前，已有研究報道，應用抗氧化劑可清除自由基，從而防止或改善機體的氧化應激狀態(tài)[6]。

據(jù)報道[7-8]，霍山石斛多糖具有較好的抗氧化作用。因此，本課題組擬通過測定霍山石斛多糖對高脂膳食誘導的肥胖小鼠體重、Lee’s、體脂比、血清游離脂肪酸(Free fatty acids，F(xiàn)FA)、血清胰島素(Insulin,INS)、空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)、肝谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、肝過氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、肝總抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)和丙二醛(Malona-ldehyde,MDA)的影響相關(guān)數(shù)據(jù)，探討霍山石斛多糖對高脂膳食誘導的肥胖小鼠氧化應激的影響，為霍山石斛的進一步開發(fā)應用打下基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 實驗動物

健康清潔級C57BL/6J小鼠，雄性，體重18～22 g，購自南京醫(yī)科大學動物實驗中心，許可證號：SCXK(蘇) 2002—0031。

1.2 藥品及試劑

霍山石斛多糖：霍山石斛，安徽省石斛產(chǎn)業(yè)化開發(fā)協(xié)同創(chuàng)新中心提供；普羅布考：由頸復康藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：H10960161；GSH-Px、SOD、T-AOC、MDA檢測試劑盒，購自南京建成生物工程研究所；熊去氧膽酸片：上海中西三維藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：H31021950；丙基硫氧嘧啶：上海朝暉藥業(yè)有限公司，批號:H31021082；豬油等。

1.3 儀器

TU-1901紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；超聲波清洗器，離心機等。

2 方法

2.1 霍山石斛多糖制備

新鮮霍山石斛，洗凈，50 ℃烘干，粉碎過40目篩，烘干至恒重，乙醇脫脂、脫色，烘干，根據(jù)文獻[9]方法提取霍山石斛多糖，采用硫酸-苯酚法測定霍山石斛多糖含量。

2.2 高脂乳劑的配制

按文獻[10]方法，以豬油∶膽固醇∶熊去氧膽酸∶丙基硫氧嘧啶=100∶20∶1∶2的比例制備高脂乳，添加至小鼠飼料中。

2.3 動物分組及處理

選取健康雄性小鼠72只，隨機分為6組，分別為正常對照組(12只)、高脂模型組，分別給予普通飼料、高脂飼料，喂養(yǎng)1周后，開始干預實驗。每組動物均自由取食、飲水。

2.4 干預用藥

在該例句中，“junk food”形容生活中不健康的食品，譯語和源語都存在類似的意象，可以在譯文中把源概念域“junk food”直譯出來對應于目的概念域“垃圾食品”。

于給予高脂膳食1 w后，將高脂模型組小鼠隨機分為模型組、霍山石斛多糖(高、中、低)劑量組、陽性藥組(普羅布考)，分別給予純凈水20 ml·kg-1·d-1、高、中、低劑量霍山石斛多糖(0.2 g·kg-1·d-1, 0.1 g·kg-1·d-1, 0.05 g·kg-1·d-1)，普羅布考0.2 g·kg-1·d-1，正常組給予純凈水20 ml·kg-1·d-1、每天1次，連續(xù)干預7 w。

2.5 指標測定

2.5.1 肥胖測量指標

分別于實驗初、終測體重(g)，于末次藥后測Lee’s指數(shù)(%)、體脂比(%)。測量方法如下：Lee’s指數(shù)(%)=體重1/3/體長×1000,[體重(g)，體長(cm)為腹側(cè)鼻尖到肛門]；體脂比(%)=內(nèi)臟脂肪(睪周脂肪重+腎周脂肪重)/空腹體重×1 00,[重量(g)]。

2.5.2 樣本采集

禁食12 h，麻醉后摘眼球取血，檢測血清游離脂肪酸、血清胰島素、血糖等指標；迅速解剖腹腔取新鮮肝組織，生理鹽水洗去殘留血液后，濾紙拭干，液氮保存，測前低溫狀態(tài)下制成1%肝勻漿，測肝谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、肝過氧化物歧化酶(SOD)、肝總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)。

2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

3 結(jié)果

3.1 對高脂膳食誘導的肥胖小鼠體重、Lee’s、體脂比的影響

高脂膳食飼喂及用藥期間，小鼠活動正常，精神尚可，模型組及普羅布考組由于灌胃不當死亡3只。隨飼喂時間的延長，模型組小鼠終體重、Lee’s、體脂比顯著升高(P<0.05,P<0.01對比正常組)；而霍山石斛高劑量組、普羅布考組小鼠終體重、Lee’s、體脂比顯著下降(P<0.05,P<0.01對比模型組)。見表1。

表1 霍山石斛多糖對高脂膳食誘導的肥胖小鼠體重、Lee’s、體脂比的影響

注：ΔP<0.05 ΔΔP<0.01與正常組比較；*P<0.05與模型組比較

3.2 對高脂膳食誘導的肥胖小鼠游離脂肪酸、胰島素、血糖的影響

如表2。與正常組比較，模型組血清游離脂肪酸、胰島素顯著升高(P<0.01)，空腹血糖有升高趨勢，但不明顯。與模型組比較，霍山石斛高劑量組、普羅布考組小鼠游離脂肪酸、胰島素顯著下降(P<0.05)，空腹血糖有下降趨勢，但不顯著。

表2 霍山石斛多糖對高脂膳食誘導的肥胖小鼠游離脂肪酸、胰島素、血糖的影響

注：ΔΔP<0.01對比正常組；*P<0.05， **P<0.01對比模型組

3.3 對高脂膳食誘導的肥胖小鼠肝組織氧化應激的影響

如表3。模型組小鼠肝組織GSH-Px、SOD、T-AOC顯著降低，MDA顯著升高(P<0.05,P<0.01對比正常組)?；羯绞邉┝拷M、普羅布考組小鼠肝組織GSH-Px、SOD、T-AOC顯著升高，MDA顯著下降(P<0.05對比模型組)。

表3 霍山石斛多糖對高脂膳食誘導的肥胖小鼠肝組織氧化應激的影響

注： ΔP<0.05 ΔΔP<0.01對比正常組；*P<0.05 對比模型組

4 討論

C57BL/6J小鼠經(jīng)高脂飼料喂食4周即可形成肥胖模型，具有造模周期短、指標穩(wěn)定、肥胖特征明顯等特點[11]。本實驗選C57BL/6J小鼠復制肥胖模型，經(jīng)喂食8周高脂飼料后，模型小鼠終體重、Lee’s、體脂比顯著升高，表明肥胖模型成功。

當機體攝入大量脂肪，脂肪分解增加使體內(nèi)血清FFA升高，刺激活性氧產(chǎn)生[12]，導致氧化應激，損傷肝、胰腺、心肌、血管等靶器官[13]。

正常情況下，肝組織抗氧化酶GSH-Px、SOD能將有毒的過氧化物轉(zhuǎn)化為無毒物質(zhì)，保護肝細胞；T-AOC的高低能反應機體總的抗氧化能力強弱；MDA是膜脂質(zhì)過氧化反應最重要的產(chǎn)物之一，反應機體過氧化反應的強弱；當GSH-Px、SOD、T-AOC降低，MDA升高，表明肝組織受到了氧化應激損失。高脂飲食小鼠FFA升高，使肝臟產(chǎn)生氧化應激反應，引起模型小鼠肝GSH-Px、SOD、T-AOC顯著降低，MDA顯著升高；給予高劑量霍山石斛多糖干預7W后，小鼠肝GSH-Px、SOD、T-AOC顯著升高，MDA顯著降低，表明霍山石斛多糖具有良好抗高脂飲食誘導的肥胖小鼠氧化應激的功效。

胰腺產(chǎn)生氧化應激損傷，引起胰島素分泌升高，導致胰島素抵抗，長期致使機體血糖升高[12]。本實驗中，模型小鼠血清FFA、胰島素顯著升高，血糖升高但不顯著，可能小鼠剛產(chǎn)生胰島素抵抗，還未引起血糖的顯著升高；經(jīng)霍山石斛多糖干預小鼠血清FFA、胰島素顯著降低，血糖有所降低，表明霍山石斛多糖減輕了高脂膳食對小鼠胰腺引起的氧化應激損傷。

綜上所述，霍山石斛多糖可降低肥胖模型小鼠體重、Lee’s、體脂比、FFA、INS、FBG、MDA，升高GSH-Px、SOD、T-AOC，表明霍山石斛多糖可改善高脂飲食誘導的肥胖小鼠氧化應激反應。

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Effects of Oxidative Stress of Polysaccharides from Dendrobidium Huoshanness on Obese Mice

GU Fangli1,2, CHEN Naifu1,2, YU Maoyun1, XU Haijun1,2

(1.DepartmentofBiologicalandPharmaceuticalEngineering,WestAnhuiUniversity,Lu’an237012,China； 2.SynergeticInnovationCenterofDendmbiaIndustrializationDevelopmentinAnhuiProvince,Lu’an237012,China)

Objective: To study on oxidative stress of polysaccharides fromDendrobiumhuoshanenseon obese mice. Methods: The polysaccharides fromDendrobiumhuoshanensewas ingested to mice whose obese models were given high fat diet with 8 weeks. These thymus indexes, detection of mouse body weight, Lee’s, body fat ratio, serum of free fatty acid(FFA), insulin, fasting blood glucose (FBG), glutathione peroxidase (GSH-Px), superoxide dismutase (SOD), total antioxidant capacity (T-AOC) and malondialdehyde (MDA), were measured to observe the effect of polysaccharides fromDendrobiumhuoshanense. Results: The high dose of polysaccharides fromDendrobiumhuoshanensegroup significantly decreased mice model of body weight, Lee’s, body fat ratio, FFA and INS, and the content of MDA, and improve the GSH-Px, SOD and T-AOC levels (P<0.05v model group), FBG has a decreasing trend, but not significant. Conclusion: The polysaccharides fromDendrobiumhuoshanensecan reduce the effect of oxidative stress in obese mice.

Dendrobiumhuoshanense; polysaccharide; mice; oxidative stress

2016-06-16

安徽省高等學校省級自然科學基金項目(KL2012B214)；安徽省高等學校省級自然科學基金重大項目(KL2015ZD43)。

谷仿麗(1980-)，女，安徽蕭縣人，副教授，碩士，研究方向：天然產(chǎn)物研究與開發(fā)。

R284

A

1009-9735(2016)05-0004-04