何碧英，彭　明

(廣東省中山市中醫(yī)院檢驗(yàn)科　528400)

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·論著·

男性不育患者精漿中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶濃度對(duì)精子質(zhì)量的影響

何碧英，彭明

(廣東省中山市中醫(yī)院檢驗(yàn)科528400)

摘要:目的探討男性不育患者精子的質(zhì)量與精漿中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的相關(guān)性。方法檢測(cè)130例不育男性的中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶濃度，根據(jù)精液中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶濃度將研究對(duì)象分為三組，大于1 000 ng/mL為A組， 250～1 000 ng/mL為B組,小于250 ng/mL為C組，對(duì)各組精漿中的精液基本參數(shù)和生化指標(biāo)(酸性磷酸酶、枸櫞酸、鋅和果糖)進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果(1)A、B、C三組間，精液密度和精子活動(dòng)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶濃度與精液密度(r=-0.43)和精子活動(dòng)率(r=-0.37)，精液體積及正常精子形態(tài)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；(2)A、B、C三組間，酸性磷酸酶、檸檬酸和鋅濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的濃度與磷酸酶(r=-0.19)、檸檬酸(r=-0.17)和鋅(r=-0.23)的濃度呈顯著負(fù)相關(guān)，三組間果糖濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論精液中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的水平與精液密度、精子活動(dòng)率及生化指標(biāo)參數(shù)(酸性磷酸酶、檸檬酸和鋅)呈顯著負(fù)相關(guān)，提示精液中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶對(duì)精子的質(zhì)量有負(fù)面的影響，進(jìn)而影響男性的生育能力。

關(guān)鍵詞:男性不育；中性粒細(xì)胞；彈性蛋白酶；精液質(zhì)量

中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶屬于鋅離子和鈣離子依賴性基質(zhì)降解酶，其可降解細(xì)胞外基質(zhì)中的所有蛋白，在中性粒細(xì)胞內(nèi)，彈性蛋白酶的濃度很高，每10個(gè)細(xì)胞中含有中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的總量約為3 μg[1]。正常生理?xiàng)l件下，中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶有益于有害病菌的清除及受損組織的再生愈合，然而其高度活化則會(huì)對(duì)組織器官造成損傷?，F(xiàn)今發(fā)現(xiàn)，這類降解酶的活化與男性前列腺炎癥、生殖道的感染息息相關(guān)，精液中的中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶可破壞精液中的有益成分，如免疫球蛋白結(jié)合因子、內(nèi)氨酰氨基肽酶和膜聯(lián)蛋白Ⅰ等[2-3]。本文旨在探討男性不育患者精子的質(zhì)量(常規(guī)參數(shù)及酸性磷酸酶、檸檬酸、果糖和鋅等生化指標(biāo))與中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶之間的關(guān)系，進(jìn)而為中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶如何影響男性不育提供依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料130例男性不育患者均來(lái)自2013年10月至2014年12月本院泌尿男科，入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者年齡在23～50歲，以降低年齡因素對(duì)研究因素的影響；(2)婚后性生活正常，但1年以上不育，性功能無(wú)障礙，附睪、睪丸、輸精管等無(wú)異常，無(wú)家族性遺傳??；(3)患者未接受過(guò)正規(guī)的相關(guān)治療，以排除治療因素對(duì)研究因素的影響。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)無(wú)精子癥;(2)精液的體積小于1.8 mL,無(wú)法進(jìn)行相關(guān)精液的分析。

1.2方法

1.2.1精液標(biāo)本的收集禁欲3～5 d后手淫，在取精室收集精液于消毒杯內(nèi)，標(biāo)本置于37 ℃恒溫金屬浴中完全液化后，操作嚴(yán)格按照世界衛(wèi)生組織的標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2精漿中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶濃度檢測(cè)液化的精漿使用超濾柱(Ultrafree-0.5)除去蛋白質(zhì)，采用精漿彈性蛋白酶定量檢試劑盒(上海勝隆實(shí)業(yè)有限公司)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的濃度，于450 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)吸光度值[4]，具體操作按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)。

1.2.3分組參照已有文獻(xiàn)[1-5]及根據(jù)130例精漿標(biāo)本中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶濃度檢測(cè)結(jié)果，將檢測(cè)標(biāo)本分成3組：>1 000 ng/mL為A組，250～1 000 ng/mL為B組,<250 ng/mL為C組。各組之間具有可比性。

1.2.4各組精漿基本參數(shù)及生化指標(biāo)的測(cè)定在SFA-500精液分析系統(tǒng)上進(jìn)行精子密度、精子活動(dòng)率和形態(tài)等參數(shù)的分析，根據(jù)世界衛(wèi)生組織分析標(biāo)準(zhǔn)，精子密度大于或等于20×106/mL,a、b級(jí)精子活動(dòng)率大于或等于50%，正常形態(tài)精子大于或等于15%為正常。采用精漿檸檬酸測(cè)定試劑盒、精漿果糖測(cè)定試劑盒和精漿鋅定量檢測(cè)試劑盒(深圳華康生物醫(yī)學(xué)工程有限公司)測(cè)定精液中檸檬酸、果糖和鋅的濃度，精漿酸性磷酸酶的測(cè)定采用精漿酸性磷酸酶檢測(cè)試劑盒(南京欣迪生物醫(yī)藥工程有限責(zé)任公司)，具體操作按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)。

2結(jié)果

2.1中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的濃度A組不育患者49例，彈性蛋白酶濃度(1 900±985)ng/mL;B組不育患者40例，彈性蛋白酶濃度(498±146)ng/mL；C組不育患者41例，彈性蛋白酶濃度(140±95)ng/mL。

2.2精液參數(shù)分析3組的精液體積進(jìn)行比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.308 7),即不育患者精液體積與彈性蛋白的濃度無(wú)相關(guān)。3組的正常精子形態(tài)進(jìn)行比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.706 3)。3組的精子密度進(jìn)行比較，結(jié)果顯示,精子密度與彈性蛋白濃度呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.43,P=0.003)。3組的精子活動(dòng)率進(jìn)行比較,結(jié)果表明,精子活動(dòng)率與彈性蛋白濃度呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.37,P=0.02)，見(jiàn)表1。

表1　精液參數(shù)分析

2.3各組生化指標(biāo)的測(cè)量結(jié)果3組的酸性磷酸酶的濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.005),相關(guān)性的分析結(jié)果顯示，中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的濃度與酸性磷酸酶的濃度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.19)。3組的檸檬酸濃度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.023)，相關(guān)性的分析結(jié)果表明，中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的濃度與檸檬酸濃度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.17)。3組鋅濃度進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.015),相關(guān)性的分析結(jié)果顯示，中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的濃度與鋅濃度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.23)。3組果糖濃度進(jìn)行比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.15)。見(jiàn)表2。

表2　各組精液生化指標(biāo)的濃度±s)

3討論

在傳統(tǒng)的男性不育診斷中，精液中精子的密度、能動(dòng)性及其形態(tài)都作為預(yù)測(cè)男性生育能力的基本參數(shù)，但是其他癥狀或者隱形的因素也會(huì)對(duì)精漿中的成分造成影響，進(jìn)而影響精子功能的發(fā)揮。中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶來(lái)源于中性粒細(xì)胞，在正常生理?xiàng)l件下，中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶對(duì)宿主起保護(hù)的作用，它與其蛋白酶抑制劑保持平衡的狀態(tài)，在疾病狀態(tài)下，蛋白酶抑制劑對(duì)中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的調(diào)節(jié)失控，使其高度活化，進(jìn)而侵入其他組織和器官，造成損失或者引起功能的發(fā)揮障礙。關(guān)于中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶對(duì)泌尿生殖系統(tǒng)的影響一直以來(lái)備受關(guān)注，尤其是在不育癥的診斷方面[6-9]。酸性磷酸酶、檸檬酸、果糖和鋅是精漿中的重要成分，酸性磷酸酶、檸檬酸和鋅的水平能反映前列腺的分泌功能狀態(tài)[10-12]。本研究結(jié)果表明，彈性蛋白酶顯著影響精子的密度及精子的能動(dòng)性，但對(duì)精液的體積及其形態(tài)無(wú)明顯影響。中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶與酸性磷酸酶、檸檬酸和鋅的濃度呈顯著的負(fù)相關(guān)，說(shuō)明中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶會(huì)引起前列腺部分分泌成分的變化，精漿作為一種介質(zhì)把精子輸送到女性生殖道內(nèi)，為精子提供營(yíng)養(yǎng)及能量，約有30%的精漿為前列腺液，即前列腺分泌成分與精子的質(zhì)量息息相關(guān)?，F(xiàn)有的報(bào)道認(rèn)為，精液中中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶濃度的增加會(huì)引起不穩(wěn)定的分子活性氧的產(chǎn)生，造成組織的氧化損傷[13-16]。本研究結(jié)果提示，中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶濃度的增加會(huì)對(duì)前列腺組織器官造成不利影響，影響其分泌功能，進(jìn)而影響精子質(zhì)量。果糖由精囊分泌，是精子能量代謝的重要來(lái)源[17]，約有60%的精漿由精囊分泌。本研究結(jié)果顯示，中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的濃度對(duì)果糖的濃度無(wú)明顯影響，提示中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的濃度(140～1 900 ng/mL)對(duì)精囊分泌的果糖無(wú)影響，但對(duì)精囊分泌的其他成分還有待進(jìn)一步研究，即中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶是否有可能通過(guò)影響精囊進(jìn)而影響精子的質(zhì)量仍需探討。本研究結(jié)果顯示，精液中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的濃度與生化指標(biāo)參數(shù)(酸性磷酸酶、檸檬酸和鋅)、精子密度及精子能動(dòng)性呈顯著負(fù)相關(guān)，即中性彈性蛋白酶與精子的質(zhì)量密切相關(guān)，對(duì)男性生育能力存在潛在的負(fù)面影響。

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作者簡(jiǎn)介：何碧英，男，主管技師，主要從事臨床檢驗(yàn)方面研究。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.022

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)13-1804-03

(收稿日期：2016-01-07修回日期：2016-03-20)

Influence of neurtophil elastase on sperm quality in male infertile patients

HEBiying,PENGMing

(DepartmentofClinicalLaboratory,ZhongshanMunicipalHospitalofTraditionalChineseMedicine,Zhongshan,Guangdong528400,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the relationship between sperm quality and neurtophil elastase (NE) in male infertile patients.Methodsthe NE concentration was detected in1 30 male infertile patients,the research subjects were classified into 3 groups based on the neurtophil elastase concentration:neurtophil elastase concentration more than 1 000 ng/mL (group A ),250-1 000 ng/mL (group B) less than 250 ng/mL (group C).Then sperm basic parameters and biochemical markers (phosphatase,citrate,zinc and fructose) were detected.Results(1) The sperm density and motility showed statistically significant differences among the group A,B and C(P<0.05)moreover neutrophil elastase concentration was negatively correlated with sperm density (r=-0.43) and sperm motility(r=-0.37).Sperm volume and morphology showed no statistically significant differences among three groups(P>0.05).(2) There were statistically significant differences in the levels of phosphatase,citrate and zinc among three groups(P<0.05),moreover the neutrophil elastase concentration had significantly negative correlation with the concentrations of phosphatase,citrate and zinc(r=-0.19,r=-0.17,r=-0.23),while the fructose concentration had no statistical difference among three groups(P>0.05).ConclusionThe NE level in semen has significant reverse correlation with sperm density,sperm motility and biochemical markers (phosphatase,citrate and zinc),implying that semen NE has significantly negative effect on the sperm quality,thus affecting male fertility ability.

Key words:male infertility;neurtophil;elastase;sperm quality