楊　雪，石美森，袁　麗，魯　滌（1.司法文明協(xié)同創(chuàng)新中心，北京100088；2.中國(guó)政法大學(xué)證據(jù)科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100188）

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·技術(shù)與應(yīng)用·
多種遺傳標(biāo)記分析在1例半同胞鑒定中的綜合應(yīng)用

楊雪1，2，石美森1，2，袁麗1，2，魯滌1，2
（1.司法文明協(xié)同創(chuàng)新中心，北京100088；2.中國(guó)政法大學(xué)證據(jù)科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100188）

摘要：目的通過(guò)對(duì)1例半同胞親緣關(guān)系的檢驗(yàn)，探討多種遺傳標(biāo)記在同父異母半同胞關(guān)系鑒定中的應(yīng)用。方法分別使用39個(gè)常色體STR遺傳標(biāo)記、23個(gè)Y染色體STR遺傳標(biāo)記、12個(gè)X染色體STR遺傳標(biāo)記對(duì)趙3、趙4、趙5與趙1、趙2是否為半同胞親緣關(guān)系進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果依據(jù)常染色體、Y染色體及X染色體STR的分型結(jié)果，采用家系基因型重建的方法可以推斷出趙4（可疑半同胞）與趙1、趙2之間系無(wú)關(guān)個(gè)體，支持趙3（可疑半同胞）、趙5（可疑半同胞）與趙1、趙2為同父異母半同胞關(guān)系。結(jié)論對(duì)于同父異母的半同胞鑒定，綜合應(yīng)用多種遺傳標(biāo)記，并采用家系基因型重建的方法進(jìn)行分析可獲得較為可靠的鑒定意見(jiàn)，僅使用ITO法計(jì)算半同胞指數(shù)或判別函數(shù)法分析則難以提供可靠的鑒定意見(jiàn)。

關(guān)鍵詞：法醫(yī)遺傳學(xué)；親子關(guān)系；同胞關(guān)系；短串聯(lián)重復(fù)序列

半同胞關(guān)系包括同父異母和同母異父兩種血緣關(guān)系。鑒于撫養(yǎng)和繼承案件的訴訟多發(fā)生在男性公民死亡之后，故請(qǐng)求進(jìn)行同父異母半同胞關(guān)系鑒定的情況占大多數(shù)。若僅檢測(cè)目前常用的常染色體STR遺傳標(biāo)記，采用ITO法[1-3]或判別函數(shù)法[3-4]推測(cè)被鑒定人之間是否存在半同胞關(guān)系，往往難以得到可靠的判定依據(jù)。因此，鑒定半同胞關(guān)系時(shí)，除了增加常染色體STR遺傳標(biāo)記的檢測(cè)外，還會(huì)增加其他遺傳標(biāo)記的檢測(cè)以獲得更多的證據(jù)信息。隨著參與鑒定的半同胞人數(shù)的增多，采用家系基因型重建[1]的方法也是可行的。筆者在實(shí)際工作中受理一起同父異母半同胞鑒定案例，在進(jìn)行常染色體STR遺傳標(biāo)記檢測(cè)后，運(yùn)用家系基因型重建的方法，聯(lián)合Y染色體和X染色體STR遺傳標(biāo)記進(jìn)行分析，獲得了可靠的鑒定意見(jiàn)。

1材料與方法

1.1案例資料

江某與趙某婚后生有一兒（趙1）、一女（趙2）。2011年趙某猝死，2012年林某以其子趙3系死者親生子為由起訴江某等人，要求繼承趙某遺產(chǎn)。案件審理過(guò)程中，湯某也以其女趙4、其子趙5系趙某親生子為由請(qǐng)求繼承遺產(chǎn)。法院在確認(rèn)趙1、趙2為趙某親生子女的前提下，要求對(duì)趙1、趙2與趙3、趙4、趙5之間是否存在同父異母兄弟姊妹關(guān)系進(jìn)行檢驗(yàn)。根據(jù)鑒定需要，用FTA卡采集了江某與趙1和趙2、林某與趙3、湯某與趙4和趙5共8人的血液樣本進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.2方法

采用Chelex-100法提取DNA，采用AGCU EX22 STR試劑盒、AGCU 21+1 STR試劑盒（無(wú)錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司）擴(kuò)增常染色體STR基因座，PowerPlex?Y23試劑盒（美國(guó)Promega公司）擴(kuò)增Y染色體23個(gè)STR基因座，Investigator Argus?X-12試劑盒（德國(guó)QIAGEN公司）擴(kuò)增X染色體12個(gè)STR基因座，經(jīng)3130型遺傳分析儀（美國(guó)AB公司）毛細(xì)管電泳、GeneMapper ID v3.2軟件分析，得到基因分型。

通過(guò)家系基因型重建法計(jì)算親權(quán)指數(shù)PI[1]、ITO法計(jì)算半同胞指數(shù)（HSI）[2]，以及判別函數(shù)法[3]進(jìn)行分析、判斷。

2結(jié)　果

2.1 DNA分型結(jié)果

8名被鑒定人常染色體STR分型結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 8名被鑒定人的常染色體STR分型

Y染色體STR檢測(cè)結(jié)果顯示，趙3、趙5與趙1 在23個(gè)Y－STR基因座上的分型表現(xiàn)一致，支持他們來(lái)自同一父系。

X染色體STR檢測(cè)結(jié)果顯示，趙4與趙2在DXS10134、DXS10101、DXS10135、DXS10146基因座上未發(fā)現(xiàn)有相同的等位基因，不支持二人存在同父姐妹關(guān)系。

2.2對(duì)半同胞關(guān)系的分析

2.2.1家系基因型重建法

根據(jù)表1中常染色體STR的分型結(jié)果，通過(guò)家系基因型重建，可以推導(dǎo)出趙1、趙2父親的基因型和趙3、趙4、趙5的生父基因，見(jiàn)表2。

這些基因座中，有10個(gè)基因座得到了趙1、趙2父親確定的基因型（即推導(dǎo)出一對(duì)等位基因），有3個(gè)基因座得到了相對(duì)確定的基因型（即父親的基因型或由這一對(duì)等位基因組成、或由那一對(duì)等位基因組成）。這13個(gè)基因座在本例中具有較高的排除假的同父異母關(guān)系的能力。

根據(jù)家系基因型重建的結(jié)果，在D3S1358、D2S1338、D12S391、D3S4529、D1GATA113和D2S1776基因座上，推導(dǎo)出的“父親”基因型的表現(xiàn)不具備提供給趙4生父基因的條件，趙4的生父基因不能在趙1、趙2父親的基因型中找到來(lái)源，故本例常染色體STR檢驗(yàn)結(jié)果也不支持趙4與趙1、趙2之間存在同父親緣關(guān)系。

家系基因型重建的結(jié)果中，未發(fā)現(xiàn)可以排除趙3、趙5與趙1、趙2有同父親緣關(guān)系的證據(jù)。Lee等[1]曾使用17個(gè)STR建立了父親基因型不全時(shí)利用親權(quán)指數(shù)（PI）判定親子關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)，即PI＜0.3309排除父權(quán)、PI＞5573支持父權(quán)。使用該文獻(xiàn)中的公式計(jì)算本例的PI值，結(jié)果見(jiàn)表3。按照Lee等[1]的判定標(biāo)準(zhǔn)，17個(gè)STR的檢驗(yàn)結(jié)果支持趙3、趙5與趙1、趙2之間存在半同胞關(guān)系，同時(shí)，增加基因座的檢測(cè)數(shù)量，PI值顯現(xiàn)出了大幅度的提升。

鑒于23個(gè)Y－STR和13個(gè)常染色體STR的排除能力以及親權(quán)指數(shù)的計(jì)算結(jié)果，可以給出支持趙3、趙5與趙1、趙2之間存在同父親緣關(guān)系的鑒定意見(jiàn)。

表3家系基因型重建法計(jì)算PI值

2.2.2 ITO法

采用文獻(xiàn)[2]中的方法計(jì)算各被鑒定人之間的半同胞指數(shù)（HSI），結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 ITO法計(jì)算半同胞指數(shù)（HSI）

根據(jù)陸惠玲等[3]采用Powerplex 16基因座檢測(cè)建立的判定規(guī)則，即以HSI≥19與HSI≤1分別作為半同胞和無(wú)關(guān)個(gè)體的判定標(biāo)準(zhǔn)，本例使用這15個(gè)STR基因座的結(jié)果分析，趙4與趙1、趙2傾向于無(wú)關(guān)個(gè)體，但難以對(duì)趙3、趙5與趙1、趙2的關(guān)系提供鑒定意見(jiàn)。

從表4中39個(gè)基因座的HSI值來(lái)看，本例增加檢測(cè)基因座數(shù)量并未能夠得到顯著改善HSI值的效果。

2.2.3判別函數(shù)法

采用文獻(xiàn)[3]中的方法，根據(jù)Powerplex 16基因座的檢驗(yàn)結(jié)果，分別計(jì)算各被鑒定人之間半同胞-無(wú)關(guān)個(gè)體的判別函數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表5。

以最大的D值所在的組別作為樣本所屬的組別，可以判斷趙3、趙5與趙1、趙2屬于半同胞，趙4與趙1、趙2屬于無(wú)關(guān)個(gè)體。

表5半同胞-無(wú)關(guān)個(gè)體的判別函數(shù)

3討　論

近年來(lái)，隨著司法實(shí)踐中撫養(yǎng)、繼承糾紛案件的增多，對(duì)半同胞關(guān)系鑒定的需求日漸增長(zhǎng)。由于此類(lèi)案件多涉及大宗財(cái)產(chǎn)歸屬的裁判，對(duì)半同胞親緣關(guān)系是否存在這一重要的案件事實(shí)，法庭往往希望鑒定人能夠提供明確的鑒定意見(jiàn)（即認(rèn)定與否定意見(jiàn)），即便是傾向性的意見(jiàn)，在某些同時(shí)具有其他證據(jù)的案件中，也會(huì)對(duì)法庭裁判有很大的幫助。

目前的現(xiàn)狀是，多數(shù)情況下，對(duì)半同胞的鑒定難以得出明確的鑒定意見(jiàn)。一方面原因在于檢測(cè)手段的限制，但隨著Y-STR、X-STR商品化試劑盒的日漸豐富，更主要的問(wèn)題是難以獲得大量的半同胞樣本進(jìn)行研究，以至于缺乏可靠的結(jié)果分析手段和判定標(biāo)準(zhǔn)。常染色體STR檢驗(yàn)作為主要的技術(shù)手段，雖然在本例的檢測(cè)中獲得了39個(gè)基因座的分型結(jié)果，但由于沒(méi)有建立這一檢測(cè)體系對(duì)半同胞的判定標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)論是使用家系基因型重建法，還是ITO或判別函數(shù)法，判斷時(shí)都未能充分利用獲得的遺傳信息。在這一背景下，采用多種技術(shù)手段對(duì)被鑒定人進(jìn)行檢測(cè)、綜合分析判斷就顯得尤為重要[5]。

檢測(cè)體系的有效性首先取決于其排除能力。YSTR在男性同父異母半同胞檢驗(yàn)中、X-STR在女性同父異母半同胞的檢驗(yàn)中、mtDNA在同母異父半同胞檢驗(yàn)中具有排除能力，在沒(méi)有其他親屬參與的情況下，可以作為首選。常染色體STR和X-STR在有其他親屬參與的情況下，有可能實(shí)現(xiàn)家系基因型重建[6-7]，不僅使檢測(cè)具有排除能力，而更重要的是增加了半同胞認(rèn)定的能力。本例中趙3、趙5半同胞的認(rèn)定就是得益于常染色體STR家系基因型重建與Y-STR檢測(cè)結(jié)合在一起的高排除能力。單獨(dú)使用ITO法或判別函數(shù)法對(duì)半同胞的判斷，由于其錯(cuò)判的風(fēng)險(xiǎn)偏大[4]，且缺乏相應(yīng)的判定標(biāo)準(zhǔn)作為參考依據(jù)，往往難以通過(guò)法庭質(zhì)證的審查。

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（本文編輯：李成濤）

Application of Multiple Genetic Markers in a Case of Determination of Half Sibling

YANG Xue1,2, SHI Mei-sen1,2, YUAN Li1,2, LU Di1,2
（1. Collaborative Innovation Center of Judicial Civilization, Beijing 100088, China; 2. Key Laboratory of Evidence Science, China University of Political Science and Law, Ministry of Education, Beijing 100188, China）

Abstract：Objective A case of half sibling was determined with multiple genetic markers, which could be potentially applied for determination of half sibling relationship from same father. Methods Half sibling relationship was detected by 39 autosomal STR genetic markers, 23 Y-chromosomal STR genetic markers and 12 X-chromosomal STR genetic markers among ZHAO-1, ZHAO-2, ZHAO-3, ZHAO-4, and ZHAO-5. Results According to autosomal STR, Y-STR and X-STR genotyping results, it was determined that ZHAO-4（alleged half sibling）was unrelated with ZHAO-1 and ZHAO-2; however, ZHAO-3 （alleged half sibling）, ZHAO-5（alleged half sibling）shared same genetic profile with ZHAO-1, and ZHAO-2 from same father. Conclusion It is reliable to use multiple genetic markers and family gene reconstruction to determine half sibling relationship from same father, but it is difficult to determination by calculating half sibling index with ITO and discriminant functions.

Key words：forensic genetics; parent-child relations; sibling relations; short tandem repeat sequences

收稿日期：（2014-07-11）

通信作者：魯滌，女，主任法醫(yī)師，教授，主要從事法醫(yī)物證鑒定及研究；E-mail：dil@cupl.edu.cn

作者簡(jiǎn)介：楊雪（1981—），女，主要從事法醫(yī)物證檢驗(yàn)；E-mail：she_love_pink@126.com

基金項(xiàng)目：教育部人文社會(huì)科學(xué)研究規(guī)劃基金資助項(xiàng)目（13YJA 820031）

文章編號(hào)：1004-5619（2016）01-0045-04

中圖分類(lèi)號(hào)：DF795.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

doi：10.3969/j.issn.1004-5619.2016.01.010