劉東芳　王曉紅　劉春秋　趙洪煥　張曉斌　楊俊泉　張成俠

王建功　汪宏斌　趙　凱

作者單位:063000 河北省唐山市人民醫(yī)院

p53蛋白在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)及與其臨床特征、同步放化療療效的關(guān)系分析

劉東芳王曉紅劉春秋趙洪煥張曉斌楊俊泉張成俠

王建功汪宏斌趙凱

作者單位:063000 河北省唐山市人民醫(yī)院

【摘要】目的檢測(cè)p53蛋白在非小細(xì)胞肺癌患者中的表達(dá)水平，并探討其表達(dá)與臨床特征的相關(guān)性及同步放化療療效的關(guān)系。方法采用免疫組化方法，檢測(cè)100例非小細(xì)胞肺癌組織中p53表達(dá)水平，結(jié)合顯微圖像分析儀測(cè)定p53免疫組化強(qiáng)度，以陽(yáng)性單位為定量分析單位。分析p53表達(dá)水平與患者臨床病理特征及同步放化療療效的關(guān)系。結(jié)果p53蛋白在非小細(xì)胞肺癌中陽(yáng)性表達(dá)率為48%；p53表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移和TNM分期均無顯著相關(guān)性；非小細(xì)胞肺癌p53蛋白表達(dá)者放化療效果顯著低于p53蛋白表達(dá)陰性患者，且p53蛋白表達(dá)與患者生存期呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論p53表達(dá)與否影響非小細(xì)胞肺癌患者化療效果，與生存期直接相關(guān)，臨床治療時(shí)可考慮將其作為治療靶點(diǎn)。

【關(guān)鍵詞】非小細(xì)胞肺癌；p53；同步化療

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:026～028)

肺癌已成為世界范圍內(nèi)威脅人類生存的一大殺手，其中非小細(xì)胞肺癌所占比例為70%～80%[1-2]。本文對(duì)我院近幾年收集的100例同步放化療非小細(xì)胞肺癌患者p53表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，并分析其與患者臨床參數(shù)和生存期的相關(guān)性，探討p53蛋白表達(dá)與同步放化療療效的關(guān)系。

1材料與方法

1.1　一般資料

選取我院2009年9月-2014年9月收治的非小細(xì)胞肺癌患者石蠟標(biāo)本100例，均有明確的病理學(xué)診斷，病理組織分型根據(jù)WHO/IASLC肺和胸膜腫瘤組織學(xué)分類(1999)標(biāo)準(zhǔn)，按2009年國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)肺癌TNM分期第7版標(biāo)準(zhǔn)對(duì)臨床分期進(jìn)行分類，所有患者均采用手術(shù)和放療聯(lián)合治療手段，所有患者均無化療禁忌癥。

1.2治療方法

為便于醫(yī)生制定后期治療方案，治療前所有患者均行常規(guī)臨床分期檢查，主要包括胸部、顱腦CT或MR，腹部CT或B超，對(duì)所有患者進(jìn)行全身核素掃描；所有患者行常規(guī)心電圖、血常規(guī)、尿常規(guī)、生化常規(guī)等檢查。

放療：所有患者均先行放射治療，均采取平臥式，雙手抱頭，先用熱縮體膜進(jìn)行固定，然后對(duì)體表進(jìn)行定點(diǎn)標(biāo)記。采用6-MV直線加速器常規(guī)分割三維適形放療，放射劑量為2 Gy/次，1周5次，達(dá)到總劑量為60~70 Gy/6~7周。

化療：放療的第1天即開始同步化療，方案為第1~5天、第29~33天使用依托泊苷(劑量為50 mg/m2)，第1、8、29、36天使用順鉑(劑量為50 mg/m2)。為防止患者出現(xiàn)惡心、嘔吐等副作用，常規(guī)使用5-羥色胺受體阻斷劑等藥物。

1.3　療效評(píng)價(jià)

記錄所有患者放療結(jié)束1個(gè)月后臨床恢復(fù)情況，并囑咐患者每3個(gè)月進(jìn)行1次復(fù)查。采用實(shí)體瘤客觀評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(RECIST)對(duì)患者治療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，共分為4個(gè)等級(jí)：完全緩解(complete response，CR)指目標(biāo)病灶全部消失達(dá)4周以上；部分緩解(partial response，PR)指基線病灶最大徑之和至少減少30%達(dá)4周以上；疾病進(jìn)展(progression disease，PD)指基線病灶最大徑之和至少增加20%或出現(xiàn)新病灶；病變穩(wěn)定(stable disease，SD)指基線病灶最大徑之和減少但并未達(dá)到PR或有增加但未達(dá)PD。此外，治療客觀有效率(objective response rate，ORR)為CR+PR兩種情況，疾病控制率(disease control rate，DCR)指CR+PR+SD?？偵嫫?overall survival，OS)指從治療首日至死亡日或統(tǒng)計(jì)日，隨訪截止2014年9月，以月為單位計(jì)算。

1.4　p53表達(dá)檢測(cè)

應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)p53在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)水平，病理科負(fù)責(zé)切取石蠟標(biāo)本組織，厚度為4 μm，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，首先采用高溫高壓對(duì)抗原進(jìn)行修復(fù)，然后自然冷卻至室溫，紗布將殘留修復(fù)液小心擦去，然后滴加二抗，孵育過夜，嚴(yán)格按照說明書并根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的一抗?jié)舛龋渭右豢?，?duì)照組采用磷酸鹽緩沖液(PBS)進(jìn)行替代。采用萊卡顯微鏡對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡(×400)視野并計(jì)算平均數(shù)進(jìn)行陰陽(yáng)性結(jié)果判定，其中陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞定義為細(xì)胞核染為棕黃色，且陽(yáng)性細(xì)胞比例≥10%；而陰性表達(dá)細(xì)胞指細(xì)胞核內(nèi)未見棕黃色染色顆粒或陽(yáng)性細(xì)胞比例<10%。

1.5　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用Ave±SED表達(dá)，均記錄在Excel表格，應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。采用Spearman檢驗(yàn)是否存在相關(guān)性，Log-rank分析Kaplan-Meier曲線，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1　p53蛋白表達(dá)陽(yáng)性率及與臨床參數(shù)相關(guān)性分析

p53為胞內(nèi)蛋白，染色顆粒位于細(xì)胞核內(nèi)，免疫組化結(jié)果顯示，p53在部分非小細(xì)胞肺癌組織中呈陽(yáng)性表達(dá)；統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，100例癌組織中48例p53表達(dá)陽(yáng)性，其陽(yáng)性率為48%(48/100)，p53陰性52例，陰性率為52%(52/100)。p53陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移和TNM分期均無相關(guān)性(表1)，且差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。

表1　p53蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系/例

2.2　放化療短期療效客觀分析

放療結(jié)束1個(gè)月之后，對(duì)患者進(jìn)行客觀療效分析，結(jié)果顯示，CR 34例，PR 32例，SD 30例，PD 4例，ORR為66%(66/100)，DCR為96%(96/100)；按照p53是否表達(dá)，將患者分為p53陽(yáng)性組和p53陰性組，其中陽(yáng)性組ORR為54.1%(26/48)，陰性組ORR為73.1%(38/52)，對(duì)兩組ORR進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示，p53陰性組ORR顯著高于陽(yáng)性組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0215)。

2.3　p53蛋白表達(dá)對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者總體生存率影響

將100例患者按照是否表達(dá)p53分為陽(yáng)性組和陰性組，并對(duì)其生存期進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，p53陽(yáng)性表達(dá)組患者中位生存期為16個(gè)月，p53陰性表達(dá)組患者中位生存期為41個(gè)月；p53陽(yáng)性表達(dá)組患者和陰性表達(dá)組患者平均生存期分別為20個(gè)月和42個(gè)月，對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，p53陰性表達(dá)組患者生存期明顯長(zhǎng)于陽(yáng)性表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖1)。

圖1　非小細(xì)胞肺癌患者生存曲線分析

3　討論

非小細(xì)胞肺癌已逐漸成為威脅男性和女性健康生存的一大殺手，盡管隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和對(duì)其致病機(jī)制的深入研究，其治療已取得較大進(jìn)展，但臨床部分患者對(duì)放化療不敏感，降低了患者治療效果。作為最早發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因，p53編碼的p53蛋白在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和抑制細(xì)胞癌變過程中發(fā)揮重要作用。然而，p53發(fā)生突變后不僅喪失了抑癌基因功能，反而還獲得了促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的癌基因功能。Mayo 等研究結(jié)果顯示，p53表達(dá)異常與癌癥發(fā)生及進(jìn)展密切相關(guān)，且對(duì)患者放化療效果產(chǎn)生較大影響，可能作為預(yù)測(cè)患者預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)[3]。

本研究中，我們就p53在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)進(jìn)行蛋白水平的檢測(cè)，結(jié)果顯示，100例癌組織中p53蛋白在48例中均有不同程度的表達(dá)，其陽(yáng)性表達(dá)率為48%，張洪蘭等曾報(bào)道，p53蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)陽(yáng)性率為44.3%[4]，這與我們的報(bào)道結(jié)果相類似。這一結(jié)果提示，p53蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)呈現(xiàn)群體性差異，該種差異可能直接影響患者臨床療效。我們對(duì)p53蛋白表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者臨床參數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，p53蛋白患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分析和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移均無顯著相關(guān)，這與趙君等人研究報(bào)道結(jié)果相一致[5]。

本研究中，我們將患者分為p53陽(yáng)性表達(dá)組和p53陰性表達(dá)組，并分析放化療效果以研究其表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌同步放化療療效關(guān)系，結(jié)果顯示，放療結(jié)束1個(gè)月之后，100例患者中，CR為34例，PR為32例，SD為30例，PD為4例，而ORR為66%(66/100)，DCR為96%(96/100)；其中p53陽(yáng)性組ORR為54.1%(26/48)，p53陰性組ORR為73.1(38/52)，p53陰性組ORR顯著高于陽(yáng)性組，這與汪宏斌等人以局部晚期非小細(xì)胞肺癌患者為研究對(duì)象揭示的p53蛋白表達(dá)患者療效較差結(jié)果相一致[6]。這提示著p53蛋白表達(dá)可能與非小細(xì)胞肺癌患者生存期相關(guān)，因此，接下來我們統(tǒng)計(jì)分析100例非小細(xì)胞肺癌患者生存期，結(jié)果顯示，p53陽(yáng)性表達(dá)組患者中位生存期為16個(gè)月，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于p53陰性表達(dá)組患者41個(gè)月中位生存期；p53陽(yáng)性表達(dá)組患者和陰性表達(dá)組患者平均生存期分別為20個(gè)月和42個(gè)月，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，p53陰性表達(dá)組患者生存期明顯長(zhǎng)于陽(yáng)性表達(dá)患者，這與余輝等報(bào)道的結(jié)果相一致[7]。

綜上所述，p53蛋白在非小細(xì)胞肺癌患者中的陽(yáng)性表達(dá)率為48%，雖然p53蛋白表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分析和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移均無顯著相關(guān)，但是p53蛋白表達(dá)直接影響患者放化療療效，且陽(yáng)性表達(dá)患者生存期顯著低于陰性表達(dá)患者，因此，臨床治療非小細(xì)胞肺癌患者時(shí)，應(yīng)該探尋以p53為靶點(diǎn)的輔助治療手段以提高臨床療效。

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[3]Mayo LD,Dixon JE,Durden DL,et al.PTEN protects p53 from Mdm2 and sensitizes cancer cells to chemotherapy〔J〕.J Biol Chem,2002,277(7):5484-5489.

[4]張洪蘭，舒紅，姜衛(wèi)國(guó).PTEN、p53和P-gp在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及和預(yù)后的關(guān)系〔J〕.中國(guó)肺癌雜志,2009,12(11):1213-1216.

[5]趙君，丁衛(wèi)忠，劉景義，等.SKP2、p53蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2009,17(3):473-476.

[6]汪宏斌，楊俊泉.局部晚期非小細(xì)胞肺癌p53蛋白表達(dá)與同步放化療療效的關(guān)系研究〔J〕.中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2014,17(3):282-285.

[7]余輝，吳一龍，戎鐵華，等.非小細(xì)胞肺癌組織中p53蛋白的表達(dá)對(duì)預(yù)后及術(shù)后放療療效的影響〔J〕.腫瘤研究與臨床,2006,18(1):16-18.

(編輯：吳小紅)

The Correlations between p53 Expression and Clinical Characteristics and

Chemo-radiotherapy Efficacy in Non-small Cell Lung Cancer

LIUDongfang，WANGXiaohong，LIUChunqiu，etal.Tangshanpeople'shospital，Tanshan，063000

【Abstract】ObjectiveTo investigate p53 expression in non-small cell lung cancer,and its relationships with clinical characteristics and chemoradiotherapy efficacy.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expression of p53 in 100 cases of non-small cell lung cancer tissues,and the expression strength was detected using micro image analyzer.The relationships between p53 expression and clinical characteristics and chemo-radiotherapy efficacy were analyzed.ResultsThe positive rate of p53 in non-small cell lung cancer was 48%;there were no correlations among p53 expression and lymph node metastasis,distant metastasis or TNM stage;NSCLC patients with p53 expression had worse chemo-radiotherapy effect than those without p53 expression,and p53 expression was negatively associated with patients' survival time.ConclusionThe status of p53 expression have effect on synchronous chemotherapy in patients with non-small cell lung cancer,and is directly related with the survival time.p53 may be represented as a promising target for non-small cell lung cancer.

【Key words】Non-small cell lung cancer； p53；Synchronous chemotherapy

中圖分類號(hào)：R734.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-5930(2016)01-0026-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.01.008

收稿日期(2015-01-20修回日期 2015-06-11)