張　欣　劉明軍　楊寄渝　吳　萌　李　亞　尚　坤

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林　長(zhǎng)春　130117)

?

背部保健推拿對(duì)亞急性衰老家兔免疫功能的調(diào)節(jié)作用

張欣劉明軍楊寄渝吳萌李亞尚坤

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長(zhǎng)春130117)

摘要〔〕目的探討在亞急性衰老家兔模型足太陽(yáng)膀胱經(jīng)背部循行部位上開(kāi)展保健推拿對(duì)其胸腺指數(shù)、血清NGF含量和局部皮膚CD80表達(dá)的影響。方法將18只家兔隨機(jī)平均分為空白組、模型組和推拿組，采用腹腔注射D-半乳糖的方法造模，觀(guān)察各組動(dòng)物胸腺指數(shù)、血清NGF含量和局部皮膚CD80表達(dá)的變化。結(jié)果模型組與空白組比較，實(shí)驗(yàn)家兔的胸腺指數(shù)、血清NGF含量均有顯著差異(P<0.01，P<0.05)，推拿局部皮膚CD80表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和表達(dá)強(qiáng)度均較低(P<0.05；P<0.01)。推拿組與模型組比較，實(shí)驗(yàn)家兔的胸腺指數(shù)有所提高(P<0.05)，血清NGF含量呈現(xiàn)顯著差異(P<0.01)，推拿局部皮膚CD80表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和表達(dá)強(qiáng)度均有所提高(P<0.05，P<0.01)。結(jié)論腹腔注射D-半乳糖的方法能夠制造亞急性衰老家兔模型；在足太陽(yáng)膀胱經(jīng)背部循行部位上開(kāi)展保健推拿能夠有效提高亞急性衰老家兔的免疫功能。

關(guān)鍵詞〔〕推拿；衰老；免疫調(diào)節(jié)

第一作者：張欣(1976-)，男，博士，在站博士后，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)手法治未病的臨床與機(jī)制研究。

推拿療法是中醫(yī)傳統(tǒng)養(yǎng)生保健與治療疾病的方法之一，具有疏通經(jīng)絡(luò)、平衡陰陽(yáng)、激發(fā)衛(wèi)氣、溫陽(yáng)補(bǔ)虛等作用。課題組以保健推拿為主要干預(yù)手段，探討推拿療法對(duì)亞急性衰老家兔免疫功能的調(diào)節(jié)作用與機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組純種新西蘭大耳家兔18只，兔齡4個(gè)月，體重(1 940±190)g，均由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。按照隨機(jī)數(shù)字表法平均分為空白組、模型組、推拿組。

1.2實(shí)驗(yàn)藥品與儀器D-半乳糖(成都溶海生物技術(shù)有限公司)；CD80一抗(武漢博士德生物工程有限公司)；推拿手法測(cè)定儀(TAP-Ⅱ型，上海益聯(lián)醫(yī)學(xué)發(fā)展有限公司)；光學(xué)顯微鏡及圖像分析系統(tǒng)(德國(guó)Leica公司)。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1動(dòng)物模型的制備以0.9%的生理鹽水配制1.25%的D-半乳糖溶液，按照50 mg·kg-1·d-1的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算相應(yīng)的D-半乳糖注射劑量，1次/d，連續(xù)腹腔注射6 w〔1〕。空白組注射等量生理鹽水。

1.3.2動(dòng)物模型的處理模型組、推拿組家兔每天給予腹腔注射造模，空白組家兔每天給予腹腔注射等量生理鹽水，各組不做其他處理。推拿組家兔造模結(jié)束后第2天開(kāi)始推拿治療，推拿時(shí)家兔不固定以避免驚嚇。

1.3.3推拿方法(1)推拿部位：選擇家兔足太陽(yáng)膀胱經(jīng)的背部循行路線(xiàn)，從肺俞穴至腎俞穴(穴位選取按《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》〔2〕定位)。(2)推拿方法：①按揉法：操作者以雙手拇指指腹為著力點(diǎn)，在家兔背部脊柱兩側(cè)由頭頸部至尾部施以按揉法，手法力量經(jīng)推拿手法測(cè)試儀測(cè)定約為0.5 kg，操作時(shí)間5 min；②推法：操作者以雙手拇指指腹為著力點(diǎn)，在家兔背部脊柱兩側(cè)由頭頸部至尾部施以推法，手法力量經(jīng)推拿手法測(cè)試儀測(cè)定約為0.5 kg，操作時(shí)間5 min；③捏脊法：操作者以雙手拇指、食指指端夾持家兔背部皮毛及皮下組織，由尾部至頭頸部施以捏脊法，反復(fù)操作10次。以上操作1次/d，15 min/次，連續(xù)3 w。

1.3.4觀(guān)察指標(biāo)(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胸腺指數(shù)；(2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清中神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)含量；(3)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物局部皮膚CD80表達(dá)含量。

1.3.5檢測(cè)方法(1)推拿治療結(jié)束后第2天，將各組家兔處死，剝離胸腺并稱(chēng)量濕重，按以下公式計(jì)算胸腺指數(shù)〔3〕：胸腺指數(shù)=胸腺重量(mg)/體重(g)。(2)推拿治療結(jié)束后第2天，將各組家兔處死，取耳緣靜脈血5 ml，室溫凝固2 h，離心1 500 r/min×15 min，收集血清，以ELISE法測(cè)定NGF含量。(3)推拿治療結(jié)束后第2天，將各組家兔處死，取背部施術(shù)部位皮膚，切片染色，置于40倍物鏡下觀(guān)察，拍照，采用Leica計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)對(duì)染色陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)和灰度值進(jìn)行定量分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.0軟件行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1各組胸腺指數(shù)和血清NGF含量的比較見(jiàn)表1。

2.2各組局部皮膚CD80表達(dá)的比較見(jiàn)表2。

組別胸腺指數(shù)(mg/g)血清NGF(pg/ml)空白組3.23±0.535.42±1.77模型組2.12±0.511)6.74±1.921)推拿組2.90±0.812)5.39±1.332)

與空白組比較：1)P<0.01；與模型組比較：2)P<0.05

組別陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(個(gè))灰度值空白組88.57±6.12171.36±3.74模型組61.68±6.742)180.28±4.461)推拿組82.27±6.554)176.44±6.423)

與空白組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與模型組比較：3)P<0.05，4)P<0.01

3討論

機(jī)體衰老的重要標(biāo)志之一是機(jī)體免疫功能的下降，從而容易罹患各種疾病〔4〕。推拿療法是中醫(yī)傳統(tǒng)養(yǎng)生保健方法之一，現(xiàn)代大量的臨床研究均有所證明〔5～8〕。胸腺是機(jī)體重要免疫器官，是淋巴細(xì)胞分化、成熟和產(chǎn)生免疫應(yīng)答的場(chǎng)所，在免疫功能低下時(shí)胸腺萎縮，體積變小。因此胸腺系數(shù)是衡量機(jī)體免疫功能的重要指標(biāo)〔9,10〕。血清NGF原本是神經(jīng)系統(tǒng)最重要的生物活性因子之一，但是近年來(lái)的研究表明，血清NGF還具有調(diào)節(jié)免疫及炎癥網(wǎng)絡(luò)方面的作用，并被認(rèn)為是連接免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的紐帶〔11〕。CD80是在B細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞(DC)等發(fā)現(xiàn)的抗原分子，屬于免疫球蛋白超家族成員，在自身免疫監(jiān)控、體液免疫應(yīng)答及移植反應(yīng)中發(fā)揮重要作用〔12〕。

這些研究指標(biāo)均能夠有效反映機(jī)體免疫功能的變化狀況。本研究結(jié)果表明推拿療法能夠有效提高亞急性衰老家兔的免疫功能。

參考文獻(xiàn)4

1Advenier C,Devillier P.Neuxokinins and the skin〔J〕.Allerg Immunol，1993；25(7)：280-2，5.

2余曙光，郭義.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)〔M〕.上海：上?？萍汲霭嫔纾?014：563.

3王鳳云，劉果，張引強(qiáng)，等.清利活血健脾中藥復(fù)方對(duì)慢性免疫性肝損傷模型小鼠細(xì)胞免疫功能的影響〔J〕.中華中醫(yī)藥雜志，2013；28(7)：2129-31.

4李嶄，劉仁慧，康學(xué)，等.腎虛衰老模型的建立及其與D-半乳糖衰老模型的比較研究〔J〕.中國(guó)中藥雜志，2012；37(16)：2435-7.

5于娟.推拿腎俞穴治療老年腎虛腰痛免疫機(jī)制研究〔J〕.山東中醫(yī)雜志，2004；23(4)：214-6.

6徐昭，王金貴，孫慶.腹部推拿對(duì)慢性疲勞綜合征患者免疫水平的影響〔A〕.中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)推拿年會(huì)論文集，2006.

7詹強(qiáng).足部反射區(qū)推拿對(duì)白細(xì)胞介素-1β水平的影響〔J〕.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2004；14(3)：138-42.

8連寶領(lǐng)，陳斌，朱鼎成，等.背腰部保健推拿對(duì)老年人免疫功能的影響〔J〕.按摩與導(dǎo)引，2002；18(6)：8-11.

9王麗君，姜虹.龍牙楤木多糖抗腫瘤活性及對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響〔J〕.中國(guó)免疫學(xué)雜志，2011；27(2)：130-4.

10何清湖，楊華偉，李天禹，等.天蠶壯陽(yáng)散對(duì)腎陽(yáng)虛雄性亞健康大鼠免疫功能的影響〔J〕.中華中醫(yī)藥雜志，2012；27(5)：1298-301.

11焦蓉，黃星原.神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體在免疫系統(tǒng)中的作用〔J〕.國(guó)際兒科學(xué)雜志，2006；33(5)：321-3.

12Van de Ven R，Lindenberg JJ，Oosterhoff D，etal.Selective transduction of mature DC in human skin and lymph nodes by CD80/CD86-targeted fiber-modified adenovirus-5/3〔J〕.J Immunother，2009；32(9)：895-906.

〔2014-12-19修回〕

(編輯袁左鳴)

The regulation effects of back Tuina on the immune functions of sub-acutly aging rabbit

ZHANG Xin,LIU Ming-Jun,YANG Ji-Yu,etal.

Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117,Jilin,China

【Abstract】ObjectiveTo observe the regulation effects of back Tuina on the immune functions of sub-acutly aging rabbit.Methods18 rabbits were randomly divided into control,model and Tuina groups．The indexes of thymus,the expressions of NGF and CD80 were observed．ResultsThe indexes of thymus and content of NGF had significant differences between model and control groups(P<0.05),the expression of CD80 of model group was lower than that of control group(P<0.05).The indexes of thymus and content of NGF had significant differences between Tuina and model groups(P<0.05),the expression of CD80 of Tuina group was higher than that of model group(P<0.05).ConclusionsBack Tuina therapy along bladder meridian of foot Taiyang could promote the immune function of sub-acutly aging rabbit.

【Key words】Tuina;Aging;Immune

通訊作者：尚坤(1978-)，女，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)藥治療心腦血管疾病的臨床與機(jī)制研究。

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81273867)；吉林省科技廳基金項(xiàng)目(20130101137JC)；吉林省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)計(jì)劃項(xiàng)目(201310199024)

中圖分類(lèi)號(hào)〔〕R244.1〔

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

文章編號(hào)〕1005-9202(2015)24-6969-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.24.002