段廣勛 王軍花

摘要：目的： 建立乳泉顆粒中阿魏酸含量測定方法。方法： 采用lichrospher C18柱（5μm，4.6mm×250mm），流動相為甲醇-0.085%磷酸（28：72）；流速為1.0mL/min；檢測波長為321nm。結(jié)果： 阿魏酸在1.265×10-5～2.024×10-4mg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.9993，平均樣品加樣回收率為96.97%。結(jié)論： 該方法簡便可靠，重復(fù)性好，可用于乳泉顆粒的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：乳泉顆粒；高效液相色譜；阿魏酸；含量測定

乳泉顆粒是婦科用中成藥，其處方由王不留行、穿山甲（炙）、天花粉、當歸、漏蘆、甘草（炙）組成，具有通經(jīng)、活血、下乳的功效，適用中醫(yī)肝郁氣滯證型產(chǎn)后缺乳患者的治療[1-2]。其現(xiàn)行質(zhì)量標準為衛(wèi)生部《部頒標準》1993版，質(zhì)量控制項僅有理化鑒別，雖有乳泉顆粒中阿魏酸含量測定的報道[3-4]，但尚未收錄標準，本文為了更好地控制藥品質(zhì)量[5]，采用HPLC法對乳泉顆粒中阿魏酸含量測定方法進行研究并對不同廠家產(chǎn)品含量進行了測定。

1儀器與材料

1.1儀器 Agilent 1260（美國安捷倫）；電子分析天平（梅特勒一托利多儀器上海有限公司，型號：XP6）；

1.2材料和試劑 乳泉顆粒（南京中山制藥有限公司，批號：121201、121202、121203、130601、130602、130603；上海悅盛蕪湖藥業(yè)有限公司，批號：120704、130101、130102；河南天方藥業(yè)中藥有限公司，批號：130401、130402、130403；遼寧康博士制藥有限公司，批號：20130302、20130303、20130304）。陰性樣品（自制），阿魏酸對照品（中國藥品生物制品鑒定所，批號110773-200611），甲醇（HPLC），其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：lichrospher C18（5μm，4.6mm×250mm，江蘇漢邦）；流動相：甲醇-0.085%磷酸（28：72）；流速：1.0mL/min；檢測波長：321nm；柱溫35℃；進樣量10μL。理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不低于3500。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取阿魏酸對照品2.53mg，置100mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得，作對照品儲備液（避光操作）。

2.3供試品溶液的制備[3-4] 取本品15g，碾細，取2g，精密稱定，加稀鹽酸2.5mL潤濕，加水30mL，使溶解，用乙醚-乙醇（27：3）混合溶液萃取4次，每次20mL，合并萃取液，用無水硫酸鈉脫水，60℃蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5mL棕色容量瓶中，定容至刻度，即得（避光操作）。

2.4專屬性試驗 取缺當歸陰性樣品，照2.3項下方法得陰性對照溶液。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL，照2.1項下色譜條件，注入液相色譜儀測定。結(jié)果，見圖1。

該色譜條件下，色譜峰分離較好。陰性對照色譜圖中在待測成分保留時間處無雜質(zhì)峰出現(xiàn)，表明本法具有良好的專屬性。

2.5線性關(guān)系考察 精密吸取對照品儲備液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、8.0mL，分別置10mL容量瓶中，加甲醇定容，依次稀釋配制成1.265、2.53、5.06、7.59、10.12、12.65、20.24μg/mL的溶液，精密吸取10μL，照2.1項下色譜條件，注入液相色譜儀測定。以峰面積A為縱坐標，阿魏酸含量C為橫坐標，作標準曲線，線性方程為A=58.882C-14.422，r=0.9993。結(jié)果表明，阿魏酸在1.265×10-5～2.024×10-4mg間呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察中測定結(jié)果

2.6精密度試驗 吸取同一供試品溶液10μL，重復(fù)進樣6次，測定阿魏酸的峰面積。

2.7重復(fù)性試驗 取同一批號樣品平行制備6份樣品，照本文所述測定方法測定，計算阿魏酸平均含量為0.2698mg/袋，RSD=1.86%（M=6）。

2.8穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8h分別進樣，結(jié)果表明樣品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9加樣回收率實驗 取已知含量的供試品1g，精密稱定，置150mL磨口錐形瓶中，分別精密加入阿魏酸對照品溶液（5.06μg/mL）2.1、3.5、4.9mL，照2.3項下供試品溶液制備方法分別平行制備3份，照2.1項下色譜條件測定，計算加樣回收率。

2.2.10樣品測定 分別取不同廠家不同批號樣品，碾細后取2g，精密稱定，照2.1項下色譜條件，依法測定阿魏酸含量，結(jié)果見表2。

表2 不同廠家不同批號樣品含量測定結(jié)果

3討論

3.1通過二極管陣列檢測器對阿魏酸對照品及樣品峰進行全波長掃描， 在321nm波長處均有最大吸收，故將321nm作為檢測波長。

3.2文獻[6]對阿魏酸測定方法進行了探究，認為在測定過程中應(yīng)采用避光，控制溫度等進行操作，故本試驗均低溫、避光操作。

3.3在穩(wěn)定性考察8h時，RSD為1.66%；10h時， RSD為5.49%，說明阿魏酸在10h時有分解反應(yīng)，試驗結(jié)果表明阿魏酸在8h內(nèi)穩(wěn)定。

3.4 國內(nèi)有15家藥企擁有乳泉顆粒批準文號，目前市場收集到的只有4家藥企的產(chǎn)品，樣品顏色、阿魏酸含量差別較大，檢測結(jié)果表明，隨著顆粒顏色的加深，阿魏酸含量逐漸升高。顏色、含量差異較大主要因為該制劑尚無阿魏酸含測標準，無法進行定量分析，導(dǎo)致不同廠家阿魏酸含量差別較大，且與不同廠家原藥材、藥材轉(zhuǎn)移率、輔料差異等有關(guān)。故本試驗為提高乳泉顆粒產(chǎn)品質(zhì)量提供了參考依據(jù)。參考試驗結(jié)果，結(jié)合中國藥典中當歸含量測定項下標準[7]，通過折算每袋乳泉顆粒中所含當歸藥材的量，建議暫定本品每袋15g中含當歸以阿魏酸（C10H10O4）計不少于0.12mg。

3.5現(xiàn)行的乳泉顆粒標準尚無薄層鑒別，另其君藥為王不留行，應(yīng)當建立王不留行相關(guān)物質(zhì)含測方法，故該品種的質(zhì)量標準尚有待進一步研究。

參考文獻：

[1] 衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑[S].第7冊.1993：98.

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[3] 楊霞，李向陽，李振國.RP-HPLC法測定乳泉顆粒中阿魏酸的含量[J].中醫(yī)研究.2006，19（7）：21-23.

[4] 陳濤，郭韶莉.HPLC法測定乳泉顆粒中阿魏酸的含量[J].天津藥學(xué)，2008，20（1）：14-15.

[5] 國家藥典委員會.中國藥典，Ι部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社.2010：附錄130-131.

[6] 閔凡新，李文玉，王彥為，等.HPLC法測定當歸中阿魏酸的含量[J].中草藥，2004，35（3）：332-333.

[7] 國家藥典委員會.中國藥典，Ι部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社.2010：124.