徐云++馬淑芬++茍小軍

摘要：目的建立H PLC法測(cè)定養(yǎng)血顆粒中阿魏酸的含量。方法采用C18（5 μm，4.6×250 mm）為色譜柱，以乙腈-1%冰醋酸（20：80）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為322 nm，流速為1.0 mL/min。結(jié)果阿魏酸在11～55 μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，r=0.9997，平均加樣回收率為99.15%，RSD=1.16%。結(jié)論本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可作為養(yǎng)血顆粒的質(zhì)量控制方法。

關(guān)鍵詞：養(yǎng)血顆粒；HPLC；阿魏酸

中圖分類(lèi)號(hào)：R284文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2016）11-0074-02

養(yǎng)血顆粒為臨床經(jīng)驗(yàn)方，由當(dāng)歸、桃仁、太子參、玄參等l0味中藥組成的復(fù)方中藥制劑，具有滋陰清熱、養(yǎng)陰安神的功效，臨床上廣泛用于入睡困難，多夢(mèng)易醒，醒后不眠等失眠癥。方中當(dāng)歸為主藥，具有降氣止咳平喘，潤(rùn)腸通便的功效[1]，阿魏酸是當(dāng)歸的主要活性成分之一，具有多方面的生物活性[2]，當(dāng)歸生藥及其制劑常選用阿魏酸的含量作為其質(zhì)量控制指標(biāo)，因此，為了有效控制養(yǎng)血顆粒質(zhì)量，保證養(yǎng)血顆粒的臨床療效，本研究中以方中主藥當(dāng)歸的有效成分阿魏酸作為指標(biāo)成分，采用高效液相色譜（HPLC）法直接測(cè)定阿魏酸的含量，該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)便準(zhǔn)確、重復(fù)性好，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1儀器與試藥

Agilent高效液相色譜儀（四元泵，DAD檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器），Agilent1200工作站；BP211D型電子分析天平（德國(guó)Sartoius）。阿魏酸對(duì)照品（購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110773-200611）；養(yǎng)血顆粒（系自制）；水為超純水，乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純。

2方法

2.1色譜條件色譜柱：Agilent C18柱（250 mm x 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-1%冰醋酸（22-80）；流速：1.0 mL/min；柱溫：3 0℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：322 nm；進(jìn)樣量10 μL。在此條件下，阿魏酸與其他色譜峰分離良好，理論板數(shù)以阿魏酸計(jì)算，應(yīng)不低于3000.

2.2對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品，精密稱(chēng)取阿魏酸2.215 mg，置1000 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液（2.2 μg/mL）.

2.3供試品溶液的制備取養(yǎng)血顆粒劑適量，研細(xì)，取2 g，精密稱(chēng)定，加水10 mL，攪拌，完全溶解，加乙酸乙酯振搖，萃取4次，每次 15 mL，合并乙酸乙酯萃取液，置水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解，并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，定容，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得供試品溶液[3-4]。

2.4陰性對(duì)照試驗(yàn)按處方取缺當(dāng)歸的陰性對(duì)照藥，按供試品溶液制備方法，制得陰性對(duì)照溶液，進(jìn)樣，依法測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照液在相同位置處無(wú)與阿魏酸相對(duì)應(yīng)的色譜峰，表明處方中其它藥材和輔料不干擾阿魏酸的測(cè)定。

2.5線性關(guān)系的考察分別精密吸取對(duì)照品溶液5，10，15，20，25 μL進(jìn)樣，以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X）進(jìn)行回歸，阿魏酸的回歸方程為Y=632.7X+6.85，r=0.9997，表明進(jìn)樣量在11～55 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.6精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μL，按照上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定阿魏酸峰面積值，計(jì)算阿魏酸RSD為0.98%，結(jié)果表明精密度良好。

2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別于0，2，4，8，24 h測(cè)定，記錄阿魏酸峰面積，結(jié)果RSD為1.34%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱(chēng)取同一批次的樣品6份，按照供試品溶液制備方法得到供試品溶液，依上述色譜條件測(cè)定阿魏酸的含量，計(jì)算阿魏酸RSD為1.45%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.9加樣回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法測(cè)定，取已知含量的樣品（批號(hào)：140311）研細(xì)，取約1.0 g，精密稱(chēng)定，精密加入阿魏酸對(duì)照品適量，制成各自的供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

3討論

當(dāng)歸藥材中阿魏酸的法定測(cè)定方法是用70%的甲醇，加熱回流提取，以乙腈-0.085%磷酸為流動(dòng)相[5]，本研究中，采用乙酸乙酯萃取來(lái)提取阿魏酸，采用的流動(dòng)相是乙腈-1%冰醋酸（20：80），在此色譜條件下，可使阿魏酸分離良好，峰形較好，理論板數(shù)高。對(duì)于測(cè)定波長(zhǎng)的選定，我們通過(guò)用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行掃描，對(duì)照品和供試品的甲醇溶液均在322 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇322 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)[4]。試驗(yàn)中采用曾考察了乙酸乙酯萃取1次，萃取2次，萃取3次，萃取4次，萃取5次，結(jié)果表明，萃取4次，與乙酸乙酯萃取5次，效果相當(dāng)，為了節(jié)省資源，簡(jiǎn)單方便，選擇乙酸乙酯萃取4次，同時(shí)對(duì)乙酸乙酯每次萃取用量做了比較，分別每次10 mL，每次15 mL，每次20 mL，每次25 mL，結(jié)果表明，每次15 mL，后含量不再增加，故選擇乙酸乙酯萃取，每次15 mL。參考文獻(xiàn)：

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