尚　坤　伍穎慧　農(nóng)云鳳　申　靜　張　野　于馨博　包楠楠　楊寄渝　吳　萌　李　亞　張　欣

(長春中醫(yī)藥大學，吉林　長春　130117)

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背部推拿療法對機體不同組織免疫網(wǎng)絡介質(zhì)β-內(nèi)啡肽含量的影響

尚坤伍穎慧農(nóng)云鳳申靜張野于馨博包楠楠楊寄渝吳萌李亞張欣

(長春中醫(yī)藥大學，吉林長春130117)

摘要〔〕目的觀察在免疫抑制家兔背部開展推拿療法對機體不同組織免疫網(wǎng)絡介質(zhì)β-內(nèi)啡肽(EP)含量的影響。方法將21只家兔隨機平均分為空白組、模型組和推拿組，采用腹腔注射環(huán)磷酰胺的方法造模，觀察各組動物下丘腦、血漿、淋巴組織β-EP含量的變化。結(jié)果模型組、推拿組下丘腦組織β-EP的含量增加，與空白組比較差異顯著(P<0.05，P<0.01)；與模型組比較，推拿組下丘腦組織β-EP的含量增加(P<0.05)。模型組、推拿組血漿β-EP的含量降低，與空白組比較差異顯著(P<0.05，P<0.01)；推拿組與模型組比較，血漿β-EP的含量降低(P<0.05)。模型組、推拿組淋巴組織β-EP的含量降低，與空白組比較差異顯著(P<0.05，P<0.01)；推拿組與模型組比較，淋巴組織β-EP的含量增加(P<0.01)。結(jié)論背部推拿療法提高機體免疫功能的可能機制之一是能夠有效促進機體免疫網(wǎng)絡介導物質(zhì)β-EP的合成、分泌與分布，從而發(fā)揮其預防疾病、保健身體的作用。

關(guān)鍵詞〔〕推拿；免疫介質(zhì)；β-EP

第一作者：尚坤(1978-)，女，副教授，碩士生導師，主要從事中醫(yī)藥治療心腦血管疾病的臨床與機制研究。

本課題組前期的實驗研究表明，背部推拿療法對免疫抑制家兔的局部免疫功能具有良好的調(diào)節(jié)作用，能夠有效提高實驗動物的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和局部MHC-Ⅱ、白介素(IL)-12含量〔1〕。然而，背部推拿療法改善機體免疫功能的作用途徑與調(diào)控機制尚不明確。本課題組從神經(jīng)肽β-內(nèi)啡肽(β-EP)在免疫應答中的功能入手，立足于“β-EP是機體神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡介質(zhì)”的理論，提出了“推拿療法能夠增強機體合成β-EP并促進其分布至外周免疫組織從而發(fā)揮免疫功能”的假說，并以免疫力低下的亞急性衰老家兔模型為實驗對象，以推拿手法刺激背部足太陽膀胱經(jīng)等為主要干預手段，觀察家兔下丘腦組織、血漿以及外周淋巴組織β-EP含量的變化情況，對此假說進行初步的論證。

1材料與方法

1.1動物、實驗藥品與儀器由長春中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供純種新西蘭大耳家兔21只，兔齡4個月，體重(1 948±230)g。按隨機數(shù)字表法分為空白組、模型組、推拿組，每組7只。環(huán)磷酰胺注射液(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)、推拿手法測定儀(TAP-Ⅱ型，上海益聯(lián)醫(yī)學發(fā)展有限公司)、超凈工作臺(蘇州凈化設備廠)、電熱恒溫水浴箱(北京市醫(yī)療設備廠)以及低溫離心機(北京時代北利離心機有限公司)。

1.2方法

1.2.1實驗動物的處理模型組、推拿組的動物采用腹腔注射環(huán)磷酰胺的方法造模。以29.6 mg·kg-1·d-1的標準計算每日的注射量，連續(xù)腹腔注射4次，隔日1次?？瞻捉M動物腹腔注射等量生理鹽水，連續(xù)開展腹腔注射4次，隔日1次。推拿組動物造模結(jié)束后第二天開始每天進行推拿手法刺激，推拿時家兔不做固定處理?？瞻捉M動物每天抓取1次，不做其他處理。

1.2.2推拿方法(1)操作部位：實驗動物背部脊柱兩側(cè)足太陽膀胱經(jīng)的循行路線，從肺俞穴至腎俞穴之間段(穴位選取按《實驗針灸學》〔2〕定位)。(2)操作方法：①按揉法：以拇指指腹為著力點，在家兔相應操作部位上由頭頸部至尾部施以按揉法，手法力量經(jīng)推拿手法測試儀測定約為0.5 kg，操作時間5 min；②推法：以拇指指腹為著力點，在家兔相應操作部位由頭頸部至尾部施以推法，手法力量經(jīng)推拿手法測試儀測定約為0.5 kg，操作時間5 min；③捏脊法：以雙手拇指、食指指端夾持家兔背部相應操作部位的皮毛及皮下組織，由尾部至頭頸部施以捏脊法，反復操作10遍。上述推拿方法每天操作1次，每次15 min，連續(xù)操作21 d。

1.2.3樣本處理及檢測指標最后一次推拿結(jié)束后第二天，于超凈工作臺處置實驗動物。將各組動物固定后，抽取靜脈血，注入加有抗凝劑、抑肽酶的試管中，離心低溫保存?zhèn)溆?；然后將實驗動物斷頭，迅速開顱，無菌摘取實驗動物顱內(nèi)下丘腦組織；同時摘取實驗動物外周淋巴組織，迅速用錫紙包裹投入液氮罐保存?zhèn)溆?。檢測各組實驗動物下丘腦、血漿及外周淋巴組織β-EP含量。

1.3統(tǒng)計學處理采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件包進行單因素方差分析(OneWay-ANOVA)、Q檢驗(Newan-keuls法)。

2結(jié)果

模型組〔(25.96±2.38)pg/mg〕、推拿組〔(29.54±6.13)pg/ml〕與空白組〔(22.32±4.15)pg/mg〕比較，實驗動物下丘腦組織β-EP的含量增加(P<0.05，P<0.01)；推拿組與模型組比較，實驗動物下丘腦組織β-EP的含量增加(P<0.05)。模型組〔(92.46±26.47)pg/ml〕、推拿組〔(66.88±16.37)pg/ml〕與空白組〔(154.54±41.28)pg/ml〕比較，實驗動物血漿β-EP的含量降低(P<0.05，P<0.01)；推拿組與模型組比較，實驗動物血漿β-EP的含量降低(P<0.05)。模型組〔(6.36±3.65)pg/ml〕、推拿組〔(17.61±7.7)pg/ml〕與空白組〔(23.80±8.11)pg/ml〕比較，實驗動物淋巴組織β-EP的含量降低(P<0.05，P<0.01)；推拿組與模型組比較，實驗動物淋巴組織β-EP的含量增加(P<0.01)。

3討論

大量的臨床與實驗研究均表明，推拿療法能夠有效調(diào)整機體的免疫功能〔3～5〕。足太陽膀胱經(jīng)在人體十二經(jīng)脈中分布最長最廣，是人體的藩籬。中醫(yī)理論認為，太陽為諸陽之首，在三陽經(jīng)中陽氣最盛；同時，足太陽膀胱經(jīng)背部循行路線上分布著肺俞、心俞、肝俞、脾俞、腎俞等背俞穴，是五臟六腑之氣輸注于體表的位置，具有良好的調(diào)節(jié)五臟功能、改善正氣盛衰的作用。

β-EP是機體免疫網(wǎng)絡共同的介導物質(zhì)之一，是已被公認為具有較強免疫調(diào)節(jié)作用的活性肽之一，參與機體的細胞免疫，在免疫學學研究中是一個有價值的指標〔6〕。β-EP主要在機體的下丘腦弓狀核和腦垂體中葉合成分泌，并通過血液循環(huán)系統(tǒng)運輸〔7〕。本研究采用腹腔注射環(huán)磷酰胺的方法制造免疫功能低下的動物模型，對于實驗動物而言屬于一種劣性應激，在使實驗動物免疫功能低下的同時，也會激活其交感神經(jīng)系統(tǒng)和下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸，導致其下丘腦組織中β-EP含量有所增加，這正解釋了模型組動物下丘腦組織β-EP含量反而高于空白組的原因。背部推拿療法能夠有效刺激實驗動物下丘腦組織合成β-EP，使其含量增加，并分泌進入血液循環(huán)系統(tǒng)。但本研究模型組、推拿組實驗動物血漿β-EP含量反而降低，而空白組和推拿組實驗動物淋巴組織中β-EP含量增加，這說明背部推拿療法不但能夠促進機體β-EP的合成，還能夠有效調(diào)節(jié)機體β-EP的分布，促進血漿中β-EP進入機體淋巴組織盡快發(fā)揮免疫作用，這與部分報道的實驗研究結(jié)果相吻合〔8〕。

本研究結(jié)果表明，背部推拿療法提高機體免疫功能的可能機制之一是能夠有效促進機體免疫網(wǎng)絡介導物質(zhì)β-EP的合成、分泌與分布，從而發(fā)揮其預防疾病、保健身體的作用。

參考文獻4

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3于娟.推拿腎俞穴治療老年腎虛腰痛免疫機制研究〔J〕.山東中醫(yī)雜志,2004;23(4)：214-6.

4詹強.足部反射區(qū)推拿對白細胞介素-1β水平的影響〔J〕.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,2004;14(3)：138-42.

5連寶領(lǐng),陳斌,朱鼎成,等.背腰部保健推拿對老年人免疫功能的影響〔J〕.按摩與導引,2002;18(6)：8-11.

6李焰,楊小燕,黃其春,等.銀杏葉復方對脾虛證小鼠細胞因子、免疫球蛋白和血漿內(nèi)幾種神經(jīng)肽含量的影響〔J〕.東北農(nóng)業(yè)大學學報,2012;43(6)：82-5.

7張纓.β-內(nèi)啡肽的免疫調(diào)節(jié)作用與運動〔J〕.中國運動醫(yī)學雜志,2003;22(6)：597-9.

8王霞,周江睿,蔣春雷.神經(jīng)肽的免疫調(diào)節(jié)作用〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學進展,2012;26(12)：5189-91.

〔2014-11-19修回〕

(編輯李相軍)

The influence of Tuina therapy on the content of β-EP in different body tissues

SHANG Kun, WU Ying-Hui, NONG Yun-Feng,etal.

Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117, Jilin, China

【Abstract】ObjectiveTo observe the influence of Tuina therapy on the back to the content ofβ-EP in different body tissues of immune suppression rabbits.Methods21 rabbits were randomly divided into blank, model and tuina groups. The peritoneal injection of cyclophosphamide was used to prepare the immunosuppressive rabbit．The contents of β-EP in the hypothalamus, plasma and lymphoid tissue were observed．ResultsThe contents ofβ-EP in the hypothalamus of model and tuina groups were higher than those of control group(P<0.05，P<0.01). The content ofβ-EP in the hypothalamus of tuina group was higher than that of model group(P<0.05); The contents of β-EP in plasma of model and tuina groups were lower than those of control group(P<0.05，P<0.01),the content of β-EP in plasma of tuina group was lower than that of model group(P<0.05); The contents of β-EP in lymphoid tissue of model and tuina groups were lower than those of control group(P<0.05，P<0.01),the content of β-EP in lymphoid tissue of tuina group was higher than that of model group(P<0.05).ConclusionsTuina therapy could promote the synthesis, secretion and distribution of β-EP to play the role of physical health and disease prevention.

【Key words】Tuina; Immune medium; β-EP

通訊作者：張欣(1976-)，男，副教授，博士，在站博士后，碩士生導師，主要從事中醫(yī)手法治未病的臨床與機制研究。

基金項目：國家自然科學基金項目(No.81273867);吉林省科技廳基金項目(No.20130101137JC);長春中醫(yī)藥大學SRT計劃項目(No.2013-14)

中圖分類號〔〕R2〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)23-6683-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.23.017