李秀梅，楊 堃，許凱羿，蘭玉坤

(重慶市食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 401121)

蜂膠具有抗菌、抗病毒、抗氧、清除自由基、提高免疫力、抗?jié)?、抗腫瘤等多種功效[1]，近年來受到了越來越多的重視。蜂膠軟膠囊常使用大豆油等作為溶劑，酸價(jià)是衡量含油脂類保健食品是否酸敗的重要指標(biāo)，通常需加以控制。目前，保健食品企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中酸價(jià)測定方法基本上采用國家標(biāo)準(zhǔn)《食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》[2]中的酸價(jià)測定法，即用乙醚－乙醇(2∶1)為溶劑，以酚酞作指示劑，以KOH標(biāo)準(zhǔn)溶液作滴定液，進(jìn)行酸堿中和滴定，測定樣品中游離的脂肪酸。該方法適用于顏色較淺的油脂等樣品。而蜂膠軟膠囊顏色較深，天然蜂膠一般呈棕黃、棕紅、棕褐色，部分甚至為近黑色，且因蜂膠中的萜類物質(zhì)對光較敏感，常加入氧化鐵棕作為遮光劑，使得在酸價(jià)測定時(shí)，很難準(zhǔn)確地觀察滴定終點(diǎn)。本試驗(yàn)中綜合參考文獻(xiàn)[3－9]，對國家標(biāo)準(zhǔn)的酸價(jià)測定法進(jìn)行了改良，可以順利、準(zhǔn)確地進(jìn)行終點(diǎn)觀察?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1．1 儀器與試藥

MSU224S－100－DU型電子天平(德國Startorius公司);320型酸度計(jì)(Mettler Toledo公司);PXS－5型數(shù)字離子酸度計(jì)電位滴定儀(成都儀器廠公司)。KOH滴定液0．100 5 mol/mL(自制);酚酞指示液;飽和氯化鈉溶液(自配);乙醚－乙醇溶液(2∶1)，乙醇、乙醚均由重慶川東化工有限公司生產(chǎn);酸價(jià)快速測試盒(廈門斯坦道科學(xué)儀器股份有限公司，批號不詳)。取編號為T，X，M 3個(gè)廠家的蜂膠軟膠囊進(jìn)行試驗(yàn)，T廠樣品(批號為20120903，20120902，20120705，20111207)，X 廠樣品(批號為 JB1207001)，M廠樣品(批號為20120403)，其中X及M廠的樣品能較明顯地觀察滴定終點(diǎn)，T廠樣品不便于觀察滴定終點(diǎn)，故重點(diǎn)對T廠樣品(批號為20120903)進(jìn)行試驗(yàn)。

1．2 方法

1．2．1 樣品前處理方法

直接溶解法(GB/T5009．37方法):取樣品適量，經(jīng)乙醚－乙醇(2∶1)溶液溶解后，滴定。

活性炭吸附法[7]:取樣品適量，經(jīng)乙醚－乙醇(2∶1)溶液溶解后，加入適量活性炭脫色，過濾，得到淺黃色樣品溶液。

石油醚提取法[4]:取本品適量，用30 mL石油醚溶解，在40℃水浴揮干石油醚，殘留物用50 mL的乙醚－乙醇(2∶1)溶液溶解并轉(zhuǎn)移入錐形瓶中，得到淺黃色供試品溶液，與直接溶解法所得溶液相比，顏色稍淺。

1．2．2 滴定法及終點(diǎn)指示方法比較

采用酚酞指示液，以變?yōu)槲⒎凵?或者明顯的顏色突躍)作為滴定終點(diǎn);采用pH計(jì)指示法，以空白溶劑發(fā)生顏色突變時(shí)的pH作終點(diǎn)[5];以電位滴定進(jìn)行終點(diǎn)判定;滴定時(shí)加入飽和氯化鈉溶液[8]，以酚酞指示液作終點(diǎn)判定;用快速酸價(jià)試劑盒進(jìn)行滴定。

2 結(jié)果

2．1 溶劑及樣品溶液pH考察

測得乙醚－乙醇(2∶1)溶液的 pH為9．54。加入酚酞指示劑，用KOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴至微粉色時(shí)，測得pH為11．25。不同蜂膠軟膠囊經(jīng)乙醚－乙醇(2∶1)溶解后對比pH(未滴定前)，結(jié)果見表1。

表1 各廠家樣品溶液的pH比較

2．2 不同方法酸價(jià)測定結(jié)果

A法:直接用乙醚－乙醇(2∶1)溶液溶解樣品后，通過pH指示終點(diǎn);同法做空白試驗(yàn)，觀察顏色變化，計(jì)算結(jié)果。

B法:樣品經(jīng)乙醚－乙醇(2∶1)溶液溶解后，加入適量活性炭脫色，過濾，濾液中加入酚酞指示劑，滴定。

C法:樣品經(jīng)石油醚提取后，通過pH指示終點(diǎn)，進(jìn)行測定。

表2 不同方法酸價(jià)測定結(jié)果

D法:樣品用乙醚－乙醇(2∶1)溶液溶解后，加入飽和氯化鈉溶液[8]，加入酚酞指示液，進(jìn)行滴定。

E法:樣品經(jīng)石油醚提取后，加乙醚－乙醇(2∶1)溶液溶解后，加入飽和氯化鈉溶液[8]，加入酚酞指示液，進(jìn)行滴定。

F法:樣品直接用乙醚－乙醇(2∶1)溶液溶解后，用酸價(jià)快速測試盒測定。取樣量約0．4 g，用10 mL乙醚－乙醇(2∶1)溶液溶解、混勻，依法測定結(jié)果樣品酸價(jià)為6．6。

G法:采用電位滴定法測定，同時(shí)觀察現(xiàn)象并記錄pH。不同方法的滴定現(xiàn)象和結(jié)果見表2。

2．3 方法確定及驗(yàn)證

上述各測定方法試驗(yàn)結(jié)果表明:T廠的樣品顏色深，用GB/T5009．37的方法進(jìn)行酸價(jià)測定時(shí)，不易觀察判定終點(diǎn);用電位滴定法的電位突躍不明顯，不便指示終點(diǎn);采用pH計(jì)指示法，結(jié)果的穩(wěn)定性不佳。比較后認(rèn)為，采用改良方法進(jìn)行蜂膠軟膠囊的酸價(jià)測定最理想，即經(jīng)石油醚提取后，加乙醚－乙醇(2∶1)溶液溶解后，加入飽和氯化鈉溶液，以酚酞作指示劑，進(jìn)行滴定。

為考察該方法的適用性，進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn):選取T廠的其他批次樣品，用改良方法測定酸價(jià)，結(jié)果見表3?？梢?，對于本身顏色深、干擾大的蜂膠軟膠囊，直接采用GB/T5009．37的方法測定酸價(jià)，不易觀察到滴定終點(diǎn)，但改良方法能方便、準(zhǔn)確地觀察終點(diǎn)。對不同廠家的蜂膠軟膠囊，同時(shí)用GB/T5009．37的方法以及改良方法同時(shí)測定酸價(jià)并比較。結(jié)果見表4。可見，對于本身顏色無干擾的樣品，兩種方法測得的酸價(jià)無明顯差異。

3 討論

乙醚－乙醇(2∶1)溶液的pH為9．54，但加入酚酞指示液后不顯粉紅色，使該混合溶液顯粉紅色時(shí)的pH約為11．25，可能是由于乙醚－乙醇混合溶劑的極性小、電離度小、H+的活度小。因此，改良方法若要采用pH計(jì)指示法，則必須同法做空白試驗(yàn)進(jìn)行校正。用活性炭吸附能較好地去除樣品本身的顏色，但同時(shí)可能會損失一些樣品[7]。采用石油醚溶解法，簡便可行，制得的供試品溶液顏色更淺，便于滴定終點(diǎn)的觀察。

表3 T廠其他樣品改良方法酸價(jià)測定結(jié)果

表4 改良前后兩種方法的測定結(jié)果比較

在供試品液中加入飽和氯化鈉溶液后，形成兩相滴定。水相顏色淺，游離脂肪酸在水相中的溶解度更大，利用飽和鹽水的破乳作用及對微量堿的競爭優(yōu)勢[8]，滴定時(shí)能較好地觀察到終點(diǎn)的微粉色。

[1]喻建輝，高蔭榆．蜂膠軟膠囊調(diào)節(jié)血脂作用研究[J]．食品科學(xué)，2010，31(7):260 －262．

[2]GB/T5009．37—2003，食用植物油的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)分析方法[S]．

[3]GB/T5530—2005，動植物油脂酸值和酸度測定[S]．

[4]GB/T5009．56—2003，糕點(diǎn)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法[S]．

[5]GB/T12456—2008，食品中總酸的測定[S]．

[6]王竹天．食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法[M]．北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008:522－525．

[7]陳慧芬，黃曉唐．活性炭吸附色素測定辣椒油中的酸價(jià)[J]．中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，22(1):33 －34．

[8]李蘭芳，欒玉明，潘 翊，等．辣椒油中酸價(jià)測定方法的探討分析[J]．中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，20(4):746 －747．

[9]華紅慧，林燕奎，韓瑞陽，等．油脂中酸值測定方法的比較[J]．中國油脂，2006，31(9):56－58．