孫 程, 盛新福, 張立東, 王玉杰, 賀繼強(qiáng)

(新疆醫(yī)科大學(xué)1第一附屬醫(yī)院泌尿外科， 2臨床醫(yī)學(xué)系， 烏魯木齊 830054)

局部外用類固醇是目前國外治療包莖的新療法，多使用低濃度倍他米松軟膏等藥物外用于包莖狹窄環(huán)處，早晚各1次，一般療程不超過1個(gè)月[1-2]。本課題組也曾開展了相關(guān)的臨床試驗(yàn)，對(duì)包莖狹窄環(huán)處組織和正常對(duì)照組織進(jìn)行了電鏡學(xué)超微結(jié)構(gòu)研究，發(fā)現(xiàn)包莖狹窄環(huán)處存在大量異常堆積的膠原纖維，而正常組及外用類固醇治療后痊愈組中未見膠原異常堆積[3]。包莖局部狹窄環(huán)中膠原纖維的分型研究對(duì)于進(jìn)一步揭示包莖外環(huán)口張力過高的原因以及類固醇治療包莖機(jī)理的研究有重要意義。本研究采用免疫組織化學(xué)法對(duì)包莖局部狹窄環(huán)組織膠原纖維進(jìn)行分型研究并分析導(dǎo)致包莖外環(huán)口張力過高的主要原因。

1 資料與方法

1.1臨床資料隨機(jī)選擇門診手術(shù)室要求行包皮環(huán)切術(shù)者16例，包莖組8例，正常對(duì)照組8例，年齡8～12歲。包莖組患兒均為包皮外環(huán)口狹窄導(dǎo)致包皮無法上翻者。門診手術(shù)均采取袖套樣包皮環(huán)切術(shù)以確保外環(huán)口組織完整。

1.2免疫組織化學(xué)法將手術(shù)環(huán)切標(biāo)本經(jīng)固定、石蠟組織包埋后切片。采用兩步法免疫組化檢測(cè)，經(jīng)脫蠟水化，抗原修復(fù)，加一抗及二抗顯色復(fù)染顯色液顯色復(fù)染后封片，顯微鏡觀察。所用Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅳ型膠原檢測(cè)試劑盒均由武漢博士德生物工程有限公司提供。

1.3結(jié)果判定在顯微鏡下，染色標(biāo)準(zhǔn)為：陽性染色面積占總面積<25%為(+/-)，25%～50%為(+)，51%～75%為(++)，>75%為(+++)，分別計(jì)分為1、2、3、4分。染色強(qiáng)度分別以(+/-)、 (+)、(++)表示，分別計(jì)分為1、2、3分。將二者計(jì)分乘積作為免疫組化結(jié)果，然后根據(jù)兩項(xiàng)記分之和判斷其結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用Mann-Whitney U秩和檢驗(yàn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

兩組Ⅰ型膠原的表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.009)，兩組Ⅲ型膠原表達(dá)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.007)，Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原之比也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.001),結(jié)果見表1。

表1 包莖組和正常對(duì)照組膠原表達(dá)比較

此外發(fā)現(xiàn)Ⅱ型膠原在包莖組個(gè)別標(biāo)本中有一定高表達(dá)，正常對(duì)照組中均為低表達(dá)。 Ⅳ型膠原在兩組中均為低表達(dá)，未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 討論

本研究采用了Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型膠原(CollagenⅠ～Ⅳ)檢測(cè)試劑對(duì)包莖局部狹窄環(huán)組織和正常對(duì)照組織進(jìn)行免疫組化研究。兩組標(biāo)本主要染色顯示的膠原纖維為Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原，但在包莖組與正常對(duì)照組中構(gòu)成比例不同。在包莖組中以Ⅰ型膠原為主，Ⅰ型膠原與Ⅲ型膠原的比值高于正常對(duì)照組。Ⅱ型膠原在包莖組個(gè)例中有表達(dá)，原因不明尚待進(jìn)一步研究。Ⅳ型膠原在兩組中均為低表達(dá)。

皮膚的張力主要由膠原纖維來決定，而其中Ⅰ型膠原多致密成網(wǎng)，具有高度的機(jī)械穩(wěn)定性[4]，是決定張力的主要因素。Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的比例與皮膚張力呈明顯正相關(guān)，胎兒及新生兒皮膚中Ⅲ型膠原較多，因而皮膚彈性相對(duì)較高[5]，隨著Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原比例的升高，皮膚張力增加而彈性降低。

在瘢痕組織中可發(fā)現(xiàn)Ⅰ型膠原的過度增生，Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的比值明顯升高[6]。對(duì)瘢痕的進(jìn)一步研究表明成纖維細(xì)胞活性的明顯增強(qiáng)可導(dǎo)致膠原纖維過度生成[7]，而基質(zhì)中膠原合成與降解的調(diào)節(jié)失衡是導(dǎo)致膠原過度堆積的主要原因[8-9]，甚至可出現(xiàn)Ⅰ型膠原取代Ⅲ型膠原而導(dǎo)致Ⅰ型膠原過度沉積[10-11]。Ⅰ型和Ⅲ型膠原的比例升高是導(dǎo)致皮膚瘢痕組織張力過高的主要原因[12-13]。Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的比例在心肌中增加也可造成左心室僵硬而影響其舒張功能[14]。

本研究發(fā)現(xiàn)包莖組Ⅰ型膠原表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組，Ⅲ型膠原則明顯低于正常對(duì)照組，Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的比例明顯高于正常對(duì)照組。認(rèn)為包莖局部狹窄環(huán)中Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的比例過高是導(dǎo)致包莖外環(huán)口張力過高的主要原因，提示局部類固醇治療包莖可能通過降解包莖狹窄環(huán)處過多的Ⅰ型膠原而達(dá)到治療效果。膠原作為重要的細(xì)胞外基質(zhì)，其合成和降解主要由基質(zhì)金屬蛋白酶系調(diào)控[15]。推測(cè)包莖局部狹窄環(huán)處膠原纖維異常與局部基質(zhì)金屬蛋白酶系失調(diào)有關(guān)。對(duì)相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶的研究將為進(jìn)一步揭示包莖局部狹窄環(huán)的形成原因以及開發(fā)更高效治療包莖的臨床藥物具有重要意義。

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