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(1 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬青島市婦女兒童醫(yī)院血液腎臟科，山東 青島 266034； 2 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院兒科學(xué)教研室)

白血病是一種起源于造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，主要表現(xiàn)為白血病細(xì)胞在骨髓及其他造血組織不受控制地克隆性增生，腫瘤細(xì)胞逃避人體免疫監(jiān)視可能是其過度增殖重要原因之一。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原-4(CTLA-4)是T細(xì)胞活化過程中一種重要的負(fù)性調(diào)節(jié)蛋白，可降低T細(xì)胞活化從而抑制人體抗腫瘤免疫反應(yīng)。sCTLA-4是CTLA-4的可溶性形式，它是CTLA-4基因轉(zhuǎn)錄生成的產(chǎn)物，其完整保留有結(jié)合B7分子的氨基酸殘基，體外實驗證實其可與B7分子結(jié)合，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[1]。本文通過檢測急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)病兒治療前后血清sCTLA-4水平的變化，探討ALL發(fā)病的可能免疫學(xué)機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2012年3—9月，選取青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血液兒科及青島市婦女兒童醫(yī)院血液腎臟科收治的、新發(fā)急性B淋巴細(xì)胞白血病病兒30例(ALL組),男18例，女12例；年齡1～14歲，平均(5.60±3.02)歲。所有病兒均進(jìn)行骨髓細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)及細(xì)胞遺傳學(xué)檢查，診斷及完全緩解判斷符合2006年兒童血液學(xué)組第3次修訂草案的標(biāo)準(zhǔn)[2]。行MIC分型及臨床危險度分型，不具備任何危險因素病兒(低危組)21例，余9例為高危組。排除其他惡性腫瘤性疾病、免疫性甲狀腺疾病等自身免疫性疾病，近半年無重大感染性疾病，無糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑用藥史。以同期健康體檢兒童32例作為對照組，男17例，女15例；年齡1.5～14.0歲，平均(6.30±2.76)歲。全部研究對象均無血緣關(guān)系。

1.2 血清sCTLA-4檢測方法

分別采集對照組、ALL組(治療前及完全緩解6個月后)空腹靜脈血2 mL，5 000 r/min離心收集血清，-70 ℃保存。應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)測定血清中sCTLA-4水平，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 兩組sCTLA-4水平比較

ALL治療前、獲得完全緩解后血清sCTLA-4分別為(34.27±18.39)、(189.59±111.04)ng/L，對照組為(193.73±105.37)ng/L。ALL病兒治療前sCTLA-4水平較對照組明顯降低，差異有顯著意義(t=5.236，P<0.01)；完全緩解后sCTLA-4水平升高，與治療前比較差異有顯著意義(t=6.604,P<0.01)，與對照組比較，差異無顯著性(P>0.05)。

2.2 不同性別及臨床危險度ALL病兒sCTLA-4水平比較

男性ALL病兒血清sCTLA-4水平為(30.37±19.13)ng/L，女性為(40.11±16.26)ng/L，兩組比較差異無顯著性(t=1.447,P>0.05)。低危組血清sCTLA-4水平為(31.22±16.99)ng/L，高危組為(39.82±21.34)ng/L，兩組比較差異無顯著性(t=1.087,P>0.05)。

3 討 論

目前研究認(rèn)為，白血病的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸與人體免疫功能的改變有密切關(guān)系。已有研究表明，白血病病人常伴有T淋巴細(xì)胞亞群的改變(包括數(shù)量、比例)及功能的損害[3]。王艷榮等[4]研究顯示，白血病病人外周血CD3細(xì)胞、CD4細(xì)胞、CD8細(xì)胞計數(shù)及CD4/CD8比值顯著降低，而在緩解后恢復(fù)正常。T淋巴細(xì)胞發(fā)揮正常的免疫監(jiān)視功能除細(xì)胞數(shù)量正常外，還要求其正?；罨?。T細(xì)胞活化需要雙信號，一是T細(xì)胞抗原識別受體(TCR)與抗原肽MHC分子的結(jié)合即抗原識別過程；二是共刺激信號，由抗原提呈細(xì)胞(APC)和T細(xì)胞表面的協(xié)同刺激分子提供。共刺激信號決定著受到抗原刺激的T細(xì)胞是分化、增殖為效應(yīng)細(xì)胞，還是進(jìn)入無反應(yīng)狀態(tài)[5]。缺乏第二信號的輔助，T細(xì)胞處于克隆無能或無應(yīng)答狀態(tài)。位于T細(xì)胞上的CD28/CTLA-4與APC上的B7(B7-1、B7-2)是起主要作用的協(xié)同刺激分子。CTLA-4和CD28競爭與B7結(jié)合，發(fā)揮抑制T細(xì)胞活化的作用。已有研究顯示，白血病細(xì)胞CD28表達(dá)降低[6]；而關(guān)于CTLA-4研究方面，動物實驗證實阻斷CTLA-4與腫瘤疫苗聯(lián)用可以治愈荷瘤小鼠[7]。CTLA-4已經(jīng)被視為人體內(nèi)抑制抗腫瘤免疫的重要調(diào)節(jié)因子。

sCTLA-4于1999年由MAGISTRELLI等[8]首次報道，與一些黏附分子的可溶性形式產(chǎn)生的方式[9]有所不同,它是由CTLA-4 mRNA發(fā)生選擇性剪接，造成框移，CTLA-4穿膜部分缺失而產(chǎn)生的天然可溶性蛋白。成熟的CTLA-4分子由膜外功能區(qū)、跨膜區(qū)和胞漿區(qū)組成，sCTLA-4缺少跨膜區(qū)，與CD40L的可溶性形式[10]相似,其與配體結(jié)合的氨基酸殘基仍然完整，保留了與B7結(jié)合的功能。OAKS等[1]認(rèn)為，sCTLA-4可能有雙重作用，其與B7的結(jié)合一方面影響傳遞活化信號的CD28/B7協(xié)同刺激信號，另一方面影響CTLA-4/B7的相互作用，阻斷T細(xì)胞活化的負(fù)性調(diào)節(jié)信號。但因CTLA-4與B7結(jié)合的能力較CD28強(qiáng)很多倍，故推測sCTLA-4主要通過干擾膜表面CTLA-4與B7的結(jié)合而發(fā)揮功能。有研究顯示，sCTLA-4水平與免疫性甲狀腺疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、1型糖尿病等自身免疫性疾病相關(guān)[11]，但其與腫瘤性疾病關(guān)系鮮有報道。本文研究結(jié)果顯示，ALL病兒治療前血清sCTLA-4水平較對照組明顯下降，提示sCTLA-4對膜表面的CTLA-4競爭性抑制作用減弱，從而相應(yīng)地加強(qiáng)了CTLA-4的功能，抑制T細(xì)胞的正?；罨?，削弱了人體抗腫瘤免疫。這說明ALL病兒體內(nèi)免疫力呈抑制性優(yōu)勢，ALL病兒存在免疫功能的紊亂，這與白血病的發(fā)病互為因果，且在一定程度上影響著疾病的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸。

目前，兒童白血病的治療方法主要是化療，隨著化療藥物的應(yīng)用，大部分腫瘤細(xì)胞得以清除，然而化療藥物的毒性限制使其無法完全殺滅白血病細(xì)胞，即存在著微小殘留病(MRD)，MRD的最終清除依賴于自身免疫系統(tǒng)的重建。本文的研究結(jié)果顯示，ALL病兒獲得完全緩解后sCTLA-4水平與正常對照組差異無顯著性,說明隨著疾病的緩解,人體免疫功能得以重建,升高的sCTLA-4競爭性抑制膜表面CTLA-4的功能，減弱了活化抑制信號，T細(xì)胞得以正?；罨?，從而發(fā)揮正常的免疫監(jiān)視功能，殺滅殘存腫瘤細(xì)胞。因此，sCTLA-4的水平可以作為反映人體免疫狀態(tài)的一個輔助指標(biāo)，對判斷化療效果、預(yù)測預(yù)后等有重要意義。該研究結(jié)果同時提示我們，在臨床白血病治療過程中，應(yīng)該更為重視免疫治療及免疫指標(biāo)的檢測，從而達(dá)到減少復(fù)發(fā)、提高白血病病兒治愈率的目的。

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