朱友林 邰順章

1.江蘇省鹽城市婦幼保健院，江蘇 鹽城 224007；2.江蘇省鹽城市藥品檢驗所，江蘇 鹽城 224002

克洛己新干混懸劑是頭孢克洛和鹽酸溴己新組成的混合制劑，適用于因敏感菌引起的呼吸道感染伴有黏稠痰液不易咳出的治療?，F(xiàn)行質量標準采用兩個色譜系統(tǒng)分別測定頭孢克洛和鹽酸溴己新的含量[1]，《中國藥典》2010年版收載的頭孢克洛干混懸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑及鹽酸溴己新片，都采用HPLC法測定其含量[2]，文獻亦有報道采用高效毛細管電泳法、膠束電動毛細管色譜法等方法測定頭孢克洛含量[3-7]，采用反相離子對高效液相色譜法等方法測定鹽酸溴己新含量[8-10]。本實驗采用雙波長在一個色譜系統(tǒng)中同時測定克洛己新干混劑中兩種組分的含量，方法簡便、準確、重復性好，可用于本品的質量控制，現(xiàn)報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-20A高效液相色譜儀，CTO-20A柱溫箱，SPD-20A紫外檢測器，LC-20AB真空脫氣機，SIL-20A自動進樣器，島津LC-20A色譜工作站（日本島津公司），BP211D電子天平（德國Sartorius），CQ-250型超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司），6171型pH/mV測試器。

1.2 試藥

頭孢克洛對照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號：130481-200503，含量：93.2%），鹽酸溴己新對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100427-200301），克洛己新干混懸劑（江蘇正大清江制藥有限公司，規(guī)格：每袋含頭孢克洛250 mg，鹽酸溴己新 8 mg，批號：110207、110215、110406），甲醇（色譜純，德國Merck公司），水（娃哈哈純凈水），其他化學試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

以 CAPCELL PAK C18MGⅡ （5μm，4.6 mm×250 mm）為色譜柱，0.005 mol/L四丁基氫氧化銨溶液（用磷酸調節(jié)pH至3.2）-甲醇（45∶55）為流動相；用雙波長同時檢測，波長為254、249nm；流速為1.0mL/min；柱溫為30℃；進樣量為20μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸溴己新對照品40.12 mg，置20 mL的量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，作為鹽酸溴己新對照品濃溶液。另精密稱取頭孢克洛對照品42.98 mg，置50 mL的量瓶中，同時精密量取上述鹽酸溴己新對照品濃溶液1 mL置該量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲備液。

2.3 樣品溶液的制備

取本品10袋的內(nèi)容物，研細，混勻，精密稱取適量（約相當于鹽酸溴己新8.77 mg），置50 mL量瓶中，加甲醇使溶解，超聲處理15 min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置，取上清液5 mL置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液的制備

按處方不加頭孢克洛和鹽酸溴己新，參照“2.2”項下方法操作，即得。

2.5 干擾試驗

分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下條件測定。結果表明，陰性樣品中在與頭孢克洛和鹽酸溴己新對照品保留時間相應的位置無色譜峰，說明處方中其他組分對測定無干擾。色譜見圖1。

2.6 線性關系的考察

在“2.1”項色譜條件下，精密量取上述儲備液 2、5、8、10、12、15、18、20 μL，分別進樣，以進樣量對峰面積進行線性回歸，得頭孢克洛的回歸方程為：Y=6025403.785X-1338205.098，相關系數(shù)r=0.9961，鹽酸溴己新的回歸方程為：Y=13157845X+118 116.31，相關系數(shù)r=0.999 2。結果表明，頭孢克洛進樣量在1.602～16.020μg范圍內(nèi)， 鹽酸溴己新在 0.08024～0.80240μg范圍內(nèi)，進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.7 檢出限及定量限測定

精密量取1 mL對照品溶液置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，進樣 1 μL，確定檢出限（S/N=3），頭孢克洛為 0.016 02μg，鹽酸溴己新為 0.000 802 4μg；進樣 5 μL，連續(xù)進樣5次，測定峰面積，計算得RSD頭孢克洛為1.2%，鹽酸溴己新為1.6%；確定定量限 （S/N=10），頭孢克洛為0.080 11μg，鹽酸溴己新為 0.004 012μg。

2.8 儀器精密度試驗

精密量取對照品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，計算得頭孢克洛和鹽酸溴己新的RSD分別為0.34%和0.62%，表明精密度良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗

圖1 高效液相色譜圖

按“2.3”項下制備的樣品溶液，分別在 0、2、4、8、16、24 h進樣10 μL分析，測定頭孢克洛和鹽酸溴己新的峰面積并計算其RSD，頭孢克洛為0.72%，鹽酸溴己新為0.86%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 加樣回收試驗

精密稱取批號為110207的樣品2.735 2、2.876 1、2.785 1、2.767 9、2.803 1、2.791 8、2.784 2、2.808 5 g， 置 50 mL 量瓶中，以第1、2份平行測定，以確定樣品含量。在其余6份中各精密加入對照品溶液5 mL，按“2.3”項下方法制備溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，按“2.6”項下回歸方程計算。測得平均回收率（n=6）頭孢克洛為97.6%，RSD為0.80%；鹽酸溴己新為99.0%，RSD為1.40%。結果見表1。

2.11 樣品測定

對3批樣品進行測定，按“2.3”項下方法制備溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，按“2.6”項下回歸方程計算供試品的含量。每批樣品稱2份，每份溶液進樣2次。3批樣品的含量測定結果見表2。

3 討論

3.1 供試品溶液制備方法選擇

預試時比較了直接溶解和超聲等不同的方法，結果超聲有利于供試液的制備，對測定結果無顯著差異?？疾炝思状己土鲃酉嘧鳛槿軇┮约安煌某晻r間，結果以先用甲醇溶解，超聲處理15 min，再用流動相稀釋溶解效果最佳。

表2 樣品含量測定結果

3.2 色譜條件

分別考察了磷酸二氫鉀溶液-乙腈、四丁基氫氧化銨溶液-甲醇兩個系統(tǒng)的流動相，結果后者的峰形明顯改善，故本實驗采用了0.005 mol/L四丁基氫氧化銨溶液 （用磷酸調節(jié)pH3.2）-甲醇（45∶55）作為流動相。檢測波長的選擇，主要依據(jù)對頭孢克洛和鹽酸溴己新對照品進行全波長掃描，發(fā)現(xiàn)頭孢克洛和鹽酸溴己新在249 nm處都有吸收，頭孢克洛在254 nm的波長處吸收值大于249 nm波長處，線性關系也優(yōu)于249 nm波長處，說明其在254 nm波長處更穩(wěn)定，而鹽酸溴己新在254 nm的波長處幾乎無吸收，因此在254 nm的波長處檢測頭孢克洛，在249 nm處檢測鹽酸溴己新。兩組分同時檢測簡化，省時。

[1]國家食品藥品監(jiān)督管理局.國家食品藥品監(jiān)督管理局標準（試行）[S].19號.2005.YBH15322005.

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