楊元十，岑國棟

(1.四川省資中縣人民醫(yī)院，四川 內(nèi)江 641200; 2.成都地奧制藥集團(tuán)藥物研究所，四川 成都 610041)

非諾貝特屬于第2代貝特酸類衍生物，可以降低血清甘油三酯和低密度脂蛋白膽固醇，升高高密度脂蛋白膽固醇，對(duì)酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝均有一定的治療作用[1－2]。但該類調(diào)脂藥物可能加重肝臟負(fù)擔(dān)，故筆者對(duì)非諾貝特的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了修飾，旨在增效和減毒，并研制出一種新的化合物。本試驗(yàn)中進(jìn)行了該新化合物防治大鼠脂肪肝的初步藥效學(xué)研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

LD2－5型醫(yī)用離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠);SHA－C恒溫振蕩器(常州國化電器有限公司);TMS－1024i型全自動(dòng)生化分析儀(日本國東京醫(yī)療公司);BP221型電子天平(Sartoriou公司)。SD大鼠，雌雄各半，體重230～250 g，由北京維通利華試驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，試驗(yàn)場(chǎng)地為成都地奧制藥集團(tuán)有限公司新藥部藥理試驗(yàn)室。

非諾貝特酯原料藥(成都地奧制藥集團(tuán)有限公司，批號(hào)為081223，純度大于98%)，根據(jù)前期的體外篩選試驗(yàn)，大鼠劑量設(shè)置為13.5mg/kg。陽性對(duì)照藥為多烯磷脂酰膽堿膠囊(商品名易善復(fù)，規(guī)格為228 mg/粒、24粒/盒，賽諾菲安萬特〈北京〉制藥有限公司，批號(hào)為D8139)，試驗(yàn)時(shí)先用適量吐溫研磨，再用0.5%的羧甲基纖維素鈉(CMC)按設(shè)計(jì)濃度配制溶液。膽固醇(分析純，批號(hào)為20071229)，吐溫－80(化學(xué)純，批號(hào)為20050402)，均為成都科龍化工試劑廠產(chǎn)品;膽酸鈉(上海Solarbio公司，批號(hào)為20060826);丙硫氧嘧啶片(上海復(fù)星朝暉藥業(yè)有限公司，批號(hào)為071105，規(guī)格為50mg/片、100片/瓶;1，2丙二醇(分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號(hào)為20051128);羧甲基纖維素鈉(上海三浦化工有限公司，批號(hào)為20010911)。

1.2 試驗(yàn)方法

取SD大鼠64只，雌雄各半，體重230～250 g，隨機(jī)分為4組，每組16只。將各組大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，每天上午按10 mL/kg灌胃給藥1次，空白對(duì)照組(A組)給予95%羧甲基纖維素鈉混懸液，模型對(duì)照組(B組)給予生理鹽水，非諾貝特酯組(C組)給予13.5 mg/kg非諾貝特酯溶液，陽性對(duì)照組(D組)給予125 mg/kg易善復(fù)溶液(均相當(dāng)于1倍成人臨床劑量。);除A組外，每天下午其余3組大鼠均按每100 g體重1 mL體積灌胃給予高脂乳液(20%豬油、8%膽固醇、1.2%膽酸鈉和0.6%丙硫氧嘧啶)。于第4周末次給藥后禁食16 h(不禁水)，眼眶取血，離心并分離血清，動(dòng)態(tài)測(cè)定給藥4周后的血清生化指標(biāo)。于第8周末次給藥后禁食16 h(不禁水)，稱取大鼠體重;股動(dòng)脈取血，離心并分離血清，－30℃低溫保存，測(cè)定血清生化指標(biāo);另摘取肝臟并稱重，觀察大體外觀后，在每只大鼠相同部位切下2 g肝組織，置預(yù)冷的生理鹽水中制成10%肝勻漿，4℃靜置48 h后，以10000 r/min速度，離心20 min，取上清液，用全自動(dòng)生化儀測(cè)定肝組織內(nèi)甘油三酯的含量;另取肝左葉1塊，置10%中性福爾馬林溶液中，作肝組織病理學(xué)檢查(固定后，石蠟包埋，切片作HE染色)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 常規(guī)觀察

試驗(yàn)期間，A組動(dòng)物活動(dòng)、飲食正常，皮毛光亮、整潔，體重持續(xù)增長(zhǎng);其余各組動(dòng)物在灌胃給予高脂乳液2周后逐漸出現(xiàn)不同程度的精神萎靡、活動(dòng)減少、體重緩慢增加、無力、蜷縮、飲食減少、皮毛凌亂、萎黃等現(xiàn)象。

2.2 體重及肝臟器系數(shù)測(cè)定

結(jié)果見表1?？梢姡辔附o予高脂乳液一定周期后，B組大鼠體重增加緩慢，與A組比較有顯著性差異(P＜0.01)，C組和D組大鼠體重增加緩慢但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;B組大鼠的肝臟器系數(shù)較A組明顯升高(P＜0.01)，C組和D組脂肪肝模型大鼠肝臟器系數(shù)均有降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 血清轉(zhuǎn)氨酶動(dòng)態(tài)測(cè)定

血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)動(dòng)態(tài)測(cè)定結(jié)果見表2?？梢?，在給予高脂乳液4周和8周后，B組大鼠血清中ALT的水平明顯較A組明顯升高(P＜0.01);與B組相比，C組和D組脂肪肝模型大鼠的ALT水平均明顯降低(P＜0.05)，表明非諾貝特酯具有一定的降轉(zhuǎn)氨酶作用。

表1 非諾貝特酯對(duì)脂肪肝大鼠體重及肝臟器系數(shù)的影響()

表1 非諾貝特酯對(duì)脂肪肝大鼠體重及肝臟器系數(shù)的影響()

注:與 B 組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01(下表同)。

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表2 各組大鼠血清轉(zhuǎn)氨酶和組織內(nèi)甘油三酯測(cè)定結(jié)果()

表2 各組大鼠血清轉(zhuǎn)氨酶和組織內(nèi)甘油三酯測(cè)定結(jié)果()

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2.4 肝臟肉眼大體外觀變化

A組大鼠肝臟肉眼觀呈鮮紅色，邊緣銳利，表面光滑;B組大鼠肝臟肉眼觀體積增大，邊緣變鈍，顏色呈奶黃色，切面油膩狀，有明顯脂肪顆粒，提示病變基礎(chǔ)是肝細(xì)胞脂肪積聚;C組和D組大鼠肝臟肉眼觀有部分呈鮮紅色。

2.5 肝組織內(nèi)甘油三酯的含量測(cè)定

脂肪肝主要是甘油三酯大量堆積于肝臟所致的一種病理改變，因此測(cè)定肝組織中甘油三酯的含量尤為重要。結(jié)果見表2?？梢夿組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量明顯升高，與A組比較，差異有高度顯著性(P＜0.01);C組和D組大鼠肝組織內(nèi)甘油三酯含量均顯著降低(P＜0.05)，表明非諾貝特酯具有減輕大鼠肝脂肪變性的作用。

2.6 肝組織病理學(xué)分析

結(jié)果見表3至表5?？梢?，與A組比較，B組大鼠出現(xiàn)了明顯的肝細(xì)胞脂肪變性(P＜0.01)，表明造模成功;與B組比較，C組和D組大鼠肝細(xì)胞脂肪變性程度均顯著降低(P＜0.05)，表明非諾貝特酯具有一定的減輕大鼠肝脂肪變性的作用。

表3 肝組織病理損傷判斷標(biāo)準(zhǔn)(HE染色，100×)

表4 各組大鼠肝臟病理分級(jí)統(tǒng)計(jì)結(jié)果(動(dòng)物只數(shù))

表5 各組大鼠肝臟病理學(xué)改變(平均記分值)

3 討論

脂肪肝系指肝內(nèi)脂肪含量超過肝濕重的5%，或肝活檢1/3以上肝細(xì)胞有脂肪變性且彌漫分布于全肝。其對(duì)應(yīng)的臨床概念是脂肪性肝病，系指病變主體在肝小葉，以彌漫性肝細(xì)胞脂肪變(多為大泡性脂肪變)為病理特征的臨床綜合征。目前，根據(jù)相關(guān)專業(yè)委員會(huì)的疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)共識(shí)，可以明確的是:脂肪性肝病在臨床上根據(jù)患者有無過量飲酒史，分為酒精性脂肪性肝病(酒精性脂肪肝)和非酒精性脂肪性肝病;酒精性肝病臨床診斷通常分為輕癥酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化和酒精性肝硬化;非酒精性脂肪性肝病一般在病理上分為單純性脂肪肝以及由其演變的脂肪性肝炎和肝硬化3種類型。

本研究旨在通過高脂乳液灌胃大鼠，造成大鼠非酒精性單純性脂肪肝模型，考察非諾貝特酯藥對(duì)大鼠非酒精性單純性脂肪肝的防治作用。結(jié)果表明，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠肝臟器系數(shù)、ALT活性、肝組織內(nèi)甘油三酯含量均顯著升高，同時(shí)肝病理也顯示出現(xiàn)了一定的脂肪變性，說明造模成功;與模型對(duì)照組比較，非諾貝特酯組大鼠ALT活性及肝組織甘油三酯含量顯著降低，且肝脂肪變性程度也顯著減輕。

ALT主要存在于肝細(xì)胞漿內(nèi)，在肝內(nèi)的活性比血清高100倍，是最敏感的肝功能指標(biāo)之一。AST在心肌中含量最高，肝臟其次，主要分布于肝細(xì)胞的線粒體中，在發(fā)生肝損傷時(shí)漏出量較ALT低。對(duì)于急性肝炎、慢性肝炎和輕型肝炎，雖有肝細(xì)胞損傷，但線粒體仍保持完整，釋放入血的只有存在于肝細(xì)胞漿內(nèi)的ALT，故ALT升高明顯;對(duì)于重型肝炎和慢性肝炎的中型和重型，肝細(xì)胞的線粒體也遭到了嚴(yán)重破壞，AST從線粒體和胞漿內(nèi)釋出，故AST也明顯升高。但本試驗(yàn)中，脂肪肝模型大鼠血清中AST未明顯升高，原因可能為與通過高脂乳液造成的非酒精性脂肪肝模型有關(guān)，該模型病變程度較輕，肝細(xì)胞的線粒體未遭到嚴(yán)重破壞。

綜上所述，非諾貝特酯(試制品)具有一定的抗非酒精性單純性大鼠脂肪肝的作用。但因樣品量較少，僅做了一個(gè)劑量的試驗(yàn)，下一步應(yīng)加強(qiáng)對(duì)量效關(guān)系及其使用機(jī)制的研究。

[1]賈晨光，宋建亭.脂肪肝及其藥物治療[J].中國醫(yī)藥，2007，2(6):382－384.

[2]鐘 嵐，范建高，王國良.非酒精性脂肪性肝炎動(dòng)物模型的建立[J].中華實(shí)用醫(yī)學(xué)，2000，2(1):3－6.