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        萬寧廣藿香青枯病菌生物變種和生理小種調查*

        2011-07-28 05:25:48楊春雨魏建和馮錦東甘炳春
        中國藥業(yè) 2011年22期
        關鍵詞:枯菌小種變種

        楊春雨 ,魏建和 ,,張 爭 ,馮錦東 ,甘炳春

        (1.中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所海南分所·海南省南藥資源保護與開發(fā)重點實驗室,海南 萬寧 571533;2.中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所,北京 100193)

        廣藿香是重要的南藥之一,是唇形科植物廣藿香 Pogostemon cablin(Blanco)Benth.,以葉、梗入藥,味辛,性微溫,歸脾、胃、肺經,功能芳香化濕、和胃止吐、祛暑解表,主治濕阻中焦之脘腹痞悶、食欲不振、嘔吐、泄瀉,外感暑濕之寒熱頭痛,濕溫初起的發(fā)熱身困、胸悶惡心,鼻淵,手足癬[1]。青枯病是廣藿香的毀滅性病害。為更好地防治廣藿香青枯病,我所對該病原菌的生物變種和生理小種分布進行了深入的調查研究,現(xiàn)報道如下。

        1 材料

        廣藿香青枯病原菌為青枯(茄)假單胞桿菌 Pseudomonas solanacearum(Smith)Smith.[2],海南省萬寧市廣藿香種植區(qū)采樣(表1),分離培養(yǎng)、鑒定獲得。樣本采集1~3級的新鮮病株,常規(guī)處理樣本。病株的分級標準:病害葉片少于10%為1級,11% ~20%為 2級,21% ~50%為3級,51% ~80%為4級,大于81%(至死亡)為5級。實驗苗木有芭蕉(二倍體香蕉)、貢蕉(三倍體香蕉)、煙葉、茄子、番茄、馬鈴薯、廣藿香等,育苗獲得。實驗室設備為常規(guī)設備。

        表1 病原菌編號及采樣點(海南省萬寧市)

        2 方法與結果

        2.1 生物變種鑒定

        廣藿香青枯病原菌生物變種鑒定方法參考文獻[3]進行。如果接種菌株能利用“三糖三醇”,產酸時菌種培養(yǎng)液顏色比對照淺,產堿時菌種培養(yǎng)液顏色比對照深;如果接種菌株不能利用“三糖三醇”,則菌種培養(yǎng)液顏色與對照相同。生物變種鑒定表見表2。參考文獻[3],配制Ayers培養(yǎng)基;分別加入乳糖、麥芽糖、纖維二糖、甘露醇、山梨醇、衛(wèi)茅醇,消毒;加入按要求配制的菌液,裝管,培養(yǎng)3~4周。將不接種的培養(yǎng)液設為對照。結果編號為1-8的每支試管菌種培養(yǎng)液顏色都比對照管淺,表明廣藿香青枯病原菌8個菌株都能利用“三糖三醇”產酸,都屬于青枯菌生物變種Ⅲ。

        表2 青枯菌生物變種鑒定表[3]

        2.2 生理小種鑒定

        青枯菌生理小種鑒定表[2-4]:見表3。

        致病性鑒定[2-3]:采用輸液接種法,將在KBA培養(yǎng)基上培養(yǎng)24~48 h的菌苔稀釋為1×107~1×108個/mL的菌種懸浮液,用0.55×20型靜脈輸液針頭導入植物體內。寄主為廣藿香、二倍體香蕉(芭蕉)、三倍體香蕉(貢蕉)、煙葉、茄子、番茄、馬鈴薯;茄子、番茄、馬鈴薯、廣藿香等苗木均為10~15 cm,二倍體香蕉和三倍體香蕉主干20~25 cm。田間溫度30~32℃,相對濕度85% ~90%,土壤相對濕度15% ~18%。1~2周后觀察結果。以無菌水代替菌種懸浮液,設為對照。結果見表4。可見,編號1-8的菌株對廣藿香、番茄、茄子、煙葉、馬鈴薯等致病力較強,但對二倍體香蕉和三倍體香蕉無致病力,表明8個菌株都是青枯菌生理小種1。

        表3 青枯菌生理小種鑒定表

        表4 廣藿香青枯病原菌生理小種寄主致病性鑒定結果

        煙葉過敏試驗:采用1×107~1×108個/mL的菌種懸浮液,以注射針頭注入煙葉的支葉脈,每點間距0.01~0.03 cm,1~2周后觀察結果。結果編號1-8的菌株對煙葉都有較強的致病力,接種點都出現(xiàn)壞死斑,表明8個菌株都是青枯菌生理小種1。

        黑色素反應檢測:將 L-酪氨酸培養(yǎng)基鋪成平板后,分別接種各菌株,1周后觀察結果。結果培養(yǎng)1周后,盡管編號1-8的菌株產生黑色素的多少略有差異,出現(xiàn)時間遲早也略有不同,但總體上都能產生大量黑色素,故8個菌株都鑒定為生理小種1。

        3 討論

        在海南省萬寧市各種植區(qū),廣藿香青枯病原菌都為青枯(茄)假單胞桿菌 Pseudomonas solanacearum(Smith)Smith.生物變種Ⅲ、生理小種1;廣藿香青枯病原菌生物變種和生理小種的種類單一,可能與各種植區(qū)的苗木來源相同有關。本研究采用的是隨機采樣法。該法自有其合理性,但與全面采樣法相比仍存在差異。

        [1]中醫(yī)藥管理局《中華本草》編輯委員會.中華本草(7冊)[M].上海:上??茖W技術出版社,1999:130-134.

        [2]文衍堂,鄭小波.海南島廣藿香、沙姜青枯病病原鑒定[J].熱帶作物學報,1984(2):113-120.

        [3]任欣正.植物病原細菌的分類和鑒定[M].北京:中國農業(yè)出版社,1999:16-17,142-143.

        [4]鄒 陽,肖崇剛.重慶地區(qū)煙草青枯病菌生理小種的初步鑒定[J].煙草科技,2008(5):60-64.

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