衛(wèi)龍興　王福泉

摘要介紹了動(dòng)物疫苗中的滅活劑和佐劑的種類及其作用,以期為滅活劑和佐劑的推廣應(yīng)用提供參考。

關(guān)鍵詞動(dòng)物疫苗;滅活劑;佐劑;種類;作用

中圖分類號(hào)R967文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼B文章編號(hào) 1007-5739(2009)19-0321-01

動(dòng)物疫苗種類包括弱毒苗和滅活疫苗,在滅活疫苗生產(chǎn)過程中,必然涉及滅活劑和佐劑,二者的安全性和效力也決定了疫苗的質(zhì)量和推廣應(yīng)用效果。

1疫苗滅活劑

滅活是指破壞病原體的生物學(xué)特性,但盡可能避免影響其免疫原性或破壞血清中補(bǔ)體活性的過程。常用的滅活劑有甲醛、β-丙內(nèi)酯(BPL)或其他有效滅活劑。

1.1甲醛

甲醛是一種有強(qiáng)烈刺激性的致癌物質(zhì),其既可作用于病毒含氨基的核苷酸堿基(如A,G,U),又可作用于病毒殼蛋白。作用于病毒殼蛋白時(shí),易使蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)或病毒顆粒聚集,不能再作用于殼蛋白內(nèi)的核酸。這樣,病原體蛋白的抗原性會(huì)遭到嚴(yán)重破壞,并可能有病原體存活。用甲醛滅活時(shí)間長,一般需要在37～39℃處理24h以上或更長時(shí)間,使用濃度一般為0.1%。其滅活的效果易受溫度、pH值、濃度、是否存在有機(jī)物、病原體的種類和含氮量等因素影響,殘留的游離甲醛若隨疫苗注入機(jī)體后,會(huì)產(chǎn)生制激性反應(yīng)。

1.2β-丙內(nèi)酯

β-丙內(nèi)酯(Beta-Propiolactone,BPL)在國外已廣泛用于各種疫苗的滅活,是一種雜環(huán)類化合物,沸點(diǎn)155℃,常溫下是無色粘稠狀液體,對(duì)病毒具有很強(qiáng)的滅活作用。能作用于病原體DNA或RNA,改變病毒核酸結(jié)構(gòu)達(dá)到滅活目的,而不直接作用于蛋白,不破壞病原體的免疫原性。大劑量β-丙內(nèi)酯(BPL)雖是一種致癌物,但極易水解,在37℃水浴水解2h后消失,其水解為無毒性的人體脂肪代謝產(chǎn)物β-羥基丙酸。另外,由于其能在疫苗液體中完全水解,不必考慮在成品疫苗中的殘留,接種反應(yīng)也輕微。同時(shí),β-丙內(nèi)酯滅活病原時(shí)間短,從而顯著地縮短了疫苗生產(chǎn)周期,提高了經(jīng)濟(jì)效益。但與甲醛相比,價(jià)格明顯昂貴,不適用于發(fā)展中國家或經(jīng)濟(jì)落后國家。

2免疫佐劑

免疫佐劑是指與抗原同時(shí)或預(yù)先應(yīng)用、能增強(qiáng)機(jī)體針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答能力、或改變免疫反應(yīng)類型的物質(zhì)。佐劑按有無免疫原性可分為2種:一種本身具有免疫原性,如百日咳桿菌、抗酸桿菌(結(jié)核分枝桿菌)以及革蘭陰性桿菌等;另一種本身無免疫原性,如氫氧化鋁、磷酸鈣、礦物油乳劑、表面活性劑等。目前常用的佐劑主要包括礦物質(zhì)佐劑、油類佐劑和微生物佐劑等。

2.1鋁鹽佐劑

鋁鹽佐劑是傳統(tǒng)佐劑中的一類,包括氫氧化鋁膠和磷酸鋁等。鋁鹽佐劑使用方便,成本低廉,安全無毒,是至今唯一被FDA批準(zhǔn)用于人用疫苗的佐劑,一直廣泛用于人用和獸用疫苗的制備。鋁鹽佐劑主要誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答,抗體以IgG1類為主,刺激產(chǎn)生Th 2型反應(yīng),可刺激機(jī)體迅速產(chǎn)生持久的高抗體水平,比較安全,對(duì)于胞外繁殖的細(xì)菌及寄生蟲抗原是良好的疫苗佐劑。但也存在缺點(diǎn),皮下注射時(shí)常有腫脹或結(jié)塊等炎癥反應(yīng),抗原免疫原性弱時(shí),不足以提高其免疫原性,激發(fā)細(xì)胞免疫應(yīng)答能力差,不能誘導(dǎo)足夠的抗病毒免疫應(yīng)答,特別是保護(hù)性免疫機(jī)制要求T 細(xì)胞活性介導(dǎo)的免疫參加時(shí),應(yīng)使用其他佐劑。鋁鹽佐劑制作簡單,如氫氧化鋁佐劑配制時(shí),取5%硫酸鋁溶液250mL,在強(qiáng)烈攪拌下加入5%氫氧化鈉溶液100mL,用生理鹽水離心洗滌沉淀2次,再懸入生理鹽水中使總量達(dá)250mL。免疫接種時(shí),取適量氫氧化鋁佐劑加等體積抗原即可免疫。

2.2 油類佐劑

主要有弗氏佐劑和可降解的油類佐劑。弗氏佐劑(freunds adjuvant,FA)是免疫學(xué)上廣泛應(yīng)用的油類佐劑,并應(yīng)用于很多獸醫(yī)疫苗研發(fā)過程中,根據(jù)是否添加分枝桿菌分為弗氏完全佐劑(FCA)和弗氏不完全佐劑(FIA)2種,不完全弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成,組分比為1～5∶1,可根據(jù)需要而定,通常為2∶1;不完全佐劑中加卡介苗(最終濃度為2～20mg/mL)或死的結(jié)核分枝桿菌,即為完全弗氏佐劑。弗氏佐劑的佐劑效能很高,廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究工作中,但可引起機(jī)體發(fā)熱、注射部位的膿腫、肉芽增生、長時(shí)間的組織損傷等劇烈副作用,限制了它們?cè)谂R床上的應(yīng)用。

2.3微生物佐劑與其他佐劑

微生物佐劑主要有脂多糖、分枝桿菌等。分枝桿菌在獸醫(yī)中廣泛地應(yīng)用于疫苗,如牛分枝桿菌卡介苗是早期應(yīng)用成功的一種。蜂膠是一種天然的免疫增強(qiáng)劑和刺激劑,具有增進(jìn)機(jī)體免疫功能和促進(jìn)組織再生的作用。據(jù)報(bào)道,應(yīng)用蜂膠配合抗原能增強(qiáng)免疫功能以及補(bǔ)體和吞噬細(xì)胞活力,增加白細(xì)胞的產(chǎn)生和抗體產(chǎn)量,并使特異性凝集素的產(chǎn)生大大增加。山東濱州獸醫(yī)研究所開發(fā)了系列蜂膠作為佐劑的禽類疫苗,應(yīng)用效果良好。

2.4新型佐劑

理想的佐劑應(yīng)當(dāng)是以最小的免疫刺激可引起適當(dāng)?shù)拿庖叽龠M(jìn)作用,且無不良反應(yīng)。但目前使用的傳統(tǒng)佐劑或多或少存在著一定的缺陷,因此,開發(fā)研究安全、高效、無毒副作用的新型佐劑應(yīng)當(dāng)是以后佐劑研究的重點(diǎn)。新型疫苗佐劑的組成形式多樣,來源也不同,主要包括油/水乳劑型、顆粒型、微生物衍生物型佐劑等。油/水乳劑型佐劑以MF59、AS02、Montani-de ISA-51和ISA-720為代表,是一類油包水或水包油型乳化劑。顆粒型佐劑是將抗原輸送系統(tǒng)與疫苗抗原復(fù)配或融合后形成顆粒狀物質(zhì),主要包括病毒顆粒、聚乙交酯微粒、免疫刺激復(fù)合體及脂質(zhì)等。微生物衍生物型佐劑可分為來自微生物的核酸類和非核酸類佐劑,包括CpG 寡脫氧核苷酸、單磷脂A、不耐熱腸毒素(LT)及其突變體等。當(dāng)然,新型疫苗佐劑的安全性能和臨床使用效果有待以后進(jìn)一步的研究和評(píng)估。

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