【中圖分類號】 R543 【文獻標識碼】 ADOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2024.0057

The Regulatory Role of Hexosamine Biosynthesis Pathway in Vascular Endothelial Inflammation

CHEN Yijing，XUQi，LIU Zhongdian，QIN Lingqiao，CHEN Shuping，TANG Weiting，ZHONG Qiuan* DepartmentofEpidemiology，SchoolofPublic Health，Guangxi MedicalUniversity，Nanning 53o021，China *Corresponding author：ZHONG Qiuan，Professor/Doctoral supervisor；E-mail：qazhong@gxmu.edu.cn

【Abstract】BackgroundAtherosclerosis（AS）is the main pathological basis of cardiovasculardisease and is characterizedbyvascularendothelialinflammation，tus targetinginflammation-relatedmechanismsis thekeytoprevetinand treatmentofAS.ObjectiveToinvestigate theefectof thehexosaminebiosynthesispathway（HBP）onadhesionmolecules anditsregulatoryroleinvascularendothelialinflammation.MethodsFromAugusttoDecemberO22，24SPFgradeC57BL/6 female mice were divided into control group，DON group，HFD group，HFD + DON group according to randomized block design methodusing body weight stratification.Serumandaortictissuefromthe mice werecollctedafter15 weeksofcorresponding intervention measures ineachgroupof mice.Thelipidlevelsof mice weredetectedusingbiochemical kitsbeforeandafter intervention，pathologicalchangesintheaorticrootweredetectedbyHEstaining，andtheexpresionlevelsofintercelular adhesion molecule-1（ICAM-1）and vascularcelladhesionmolecule-1（VCAM-1）were detectedbyimmunofluorescence staining，ELISAand Westernblot.ResultsAfter15weeksof intervention，compared withthecontrolgroup，thelevelsof LDL-C and TC were increased significantly in the HFD group，while HDL-C was reduced significantly（ Plt;0.05 ）；There was no change in the lipid levels between the HFD group and the HFD + DONgroup（ Pgt;0.05 ）.HE staining results showed that the vascular intimawasthickened，themorphologyofvascularsmooth musclewasabnormal，thestructurewasdisorganized，andalarge numberoffoamcellsweresen inHFDgroup.Tesmoth musclecelsofmice were neatlyaligned，theendothelilcel layer wascontinuous，the numberoffoamcells was reduced significantly，andthe cellgap was normalbasicallinthe HFD + DON group.The resultsofimmunofluorescence staining，ELISAand Western blotshowed that the expressonofICAM-1and VCAM1 was down-regulated inthe HFD+DON groupcompared with the HFD group.ConclusionInhibitionof HBPcan down-regulate theexpresson of ICAM-1 and VCAM-1，and playa role in improving vascular endothelial inflammation.

【Key Words】Vascular endothelial inflammation；Hexosamine biosynthetic pathway； Intercelular adhesion molecule-1；Vascular cell adhesion molecule-1；6-diazo-5-oxo-L-norleucine；Mice

隨著人口老齡化，我國心血管疾病的發(fā)病率快速上升，且致死率高居榜首[1]。在高血脂[2-3]、高血糖[4]高血壓[5]等多種危險因素的作用下，血管內(nèi)皮受損，從而提高了罹患動脈粥樣硬化性心血管疾病的風險。受損的內(nèi)皮細胞會分泌多種黏附分子，如細胞間黏附分子1（intercellular cell adhesionmolecule-1，ICAM-1）、血管細胞黏附分子1（vasccularcell adhesion molecule-1，VCAM-1）[6]，進而增強白細胞通透性，促進血管壁泡沫細胞堆積，最終導致動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）炎癥的發(fā)生、發(fā)展[7-8]。因此，調(diào)控黏附分子的表達可能是防治AS炎癥的關鍵。

黏附分子ICAM-1和VCAM-1均屬于免疫球蛋白超家族的跨膜蛋白，需要高度糖基化修飾后才可執(zhí)行促炎功能[9-10]。在已糖胺生物合成通路（hexosaminebiosynthesispathway，HBP）關鍵酶的作用下，催化果糖-6-磷酸和谷氨酰胺形成葡糖胺-6-磷酸，最終生成糖基化主要原料供體即尿苷二磷酸-N-乙酰葡糖胺（UDP-GlcNAc）［11-13]。當能量需求激增時，HBP受到過度激活導致UDP-GlcNAc水平上升，從而增強糖基化效應[14-16]。此外，糖基化效應增強可上調(diào)ICAM-1、VCAM-1表達，促進炎癥的發(fā)生、發(fā)展[17-18]。提示HBP調(diào)控黏附分子糖基化修飾可能對改善血管內(nèi)皮炎癥具有重要意義。

6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸（6-diazo-5-oxo-L-norleucine，DON）是一種谷氨酰胺拮抗劑，可競爭性結合HBP上的谷氨酰胺位點，降低UDP-GlcNAc水平[19-21]。體外實驗證明，通過 DON靶向谷氨酰胺代謝，抑制HBP可下調(diào)系膜細胞中VCAM-1的轉錄水平，改善血管內(nèi)皮細胞炎癥[22]。然而，體內(nèi)實驗驗證HBP對血管內(nèi)皮炎癥的作用研究，迄今尚未見報道。因此，本研究擬從動物水平進一步探討HBP對黏附分子的影響及其在血管內(nèi)皮炎癥中的調(diào)控作用，旨在為防治AS炎癥提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1實驗時間2022年8—12月。

1.2實驗材料

1.2.1實驗動物與飼料：SPF級7周齡雌性C57BL/6小鼠24只，體質量 14.3～17.9g ，小鼠（合格證號：SYXK桂2020-0004）購于廣西醫(yī)科大學實驗動物中心，飼養(yǎng)于廣西醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院動物飼養(yǎng)室，飼養(yǎng)室溫度控制在 20～26% ，相對濕度為 40%～70% ， 12h 光照交替，喂養(yǎng)于獨立通風籠具、自由采食飲水。高脂飼料（飼料配方： 15% 脂肪 +1.25% 膽固醇 +0.5% 膽鹽 +83.25% 基礎飼料）購于南通特洛菲飼料科技有限公司。實驗通過廣西醫(yī)科大學實驗動物倫理委員會審查（動物倫理審批號：202201191）。

1.2.2主要試劑與儀器：DON（GLPBIO，貨號：GC41224）；低密度脂蛋白膽固醇（lowdensitylipoproteincholesterol，LDL-C）、總膽固醇（totalcholesterol，TC）、高密度脂蛋白膽固醇（highdensitylipoproteincholesterol，HDL-C）試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號分別為A113-1-1、A111-1-1、A112-1-1）；ICAM-1、VCAM-1酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（上海愛萌優(yōu)寧生物技術有限公司，貨號分別為LV30245M、LV30555M）；二喹啉甲酸（bicinchoninicacid，BCA）蛋白濃度測定試劑盒、十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠快速配制試劑盒、放射免疫沉淀 法（radio immunoprecipitation assay，RIPA）裂解液（Beyotime，貨號分別為：PO010、PO012AC、P0013B）；蘇木素-伊紅（HE）染料（Servicebio，貨號：G1003）。ICAM-1抗體、VCAM-1抗體（Abcam，貨號分別為ab171123、ab134047）； β -actin（CST，貨號：4970S）。

多功能酶標儀（ThermoFisher，型號：MultiskanGO）；石蠟切片機（Leica，型號：RM2016）；熒光顯微鏡（Nikon，型號：EclipseC1）；智能凝膠成像系統(tǒng)（ThermoFisher，型號：iBrightFL1OOO）；高速低溫組織研磨儀（Servicebio，型號：KZ-II-F）。

1.3實驗方法

1.3.1動物分組及給藥：小鼠適應性飼養(yǎng)后，采用隨機區(qū)組設計方法按體質量分為對照組、DON組、高脂飲食（HFD）組、 HFD+DON 組，每組6只。對照組予以普通飼料、腹腔注射磷酸鹽緩沖液（phosphatebuffersolution，PBS）（ 1mg/kg ，3次/周）；DON組予以普通飼料、腹腔注射DON溶液（ 1mg/kg ，3次/周）；HFD 組予以高脂飼料、腹腔注射PBS 溶液（ 1mg/kg ，3次/周）； HFD+DON 組予以高脂飼料、腹腔注射DON溶液（ 1mg/kg ，3次/周）。干預15周后，采用阿佛丁麻醉后眼球取血，將血液靜置 ^2h 后， 3000r/min 離心10min ， -20% 保存。采血結束后處死小鼠，用預冷的PBS及多聚甲醛進行全身灌流，直至肝臟由紅色轉為白色后即為灌洗完畢。各組取出3只小鼠主動脈組織放入多聚甲醛中固定 ^48h 備用，另3只小鼠主動脈組織置于無菌凍存管內(nèi)， -20% 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2血清脂質水平測定：干預前與干預15周后，隔夜禁食不禁水，均采用頜下靜脈采血法收集血液，取血液靜置 ^2h 后， 3000r/min 離心 10min ，收集血清，檢測LDL-C、TC及HDL-C的水平。

1.3.3HE染色：將 4% 多聚甲醛固定后的主動脈（3只）制作石蠟切片，切片依次放入二甲苯 I20min 、二甲苯Ⅱ 20min 、無水乙醇 I5min 、無水乙醇 ！ 75% 乙醇 5min ，沖洗。在脫蠟后，使用蘇木素染液染色3～5min ，沖洗，分化液分化，沖洗，返藍液返藍，沖洗。隨后將切片依次入 85% 、 95% 乙醇中脫水各 5min 再放入伊紅染液中染色 5min 。伊紅染色后，將切片依次放人無水乙醇 I5min 、無水乙醇 I5min 、無水乙醇I5min 、二甲苯 I5min 、二甲苯 ，中性樹膠進行封片處理。顯微鏡下鏡檢并采集圖像。

1.3.4免疫熒光染色和觀察：將包埋好的標本用切片機切成石蠟切片，切片脫蠟至水后，進行抗原修復，隨后自然冷卻。為確保洗滌效果，將玻片置于PBS（ pH=7.4 ）中并于脫色搖床上晃動洗滌3次， 5min/ 次。將切片甩干并使用組化筆在組織周圍精準畫出輪廓，滴加牛血清白蛋白進行封閉處理，封閉時間為 30min 。隨后，加入預先配置的一抗，將切片平穩(wěn)放置于濕盒內(nèi)，于 4^°C 環(huán)境中孵育過夜。一抗孵育結束后，洗滌玻片。加對應的二抗，在避光室溫條件下孵育 50min 。二抗孵育后，玻片洗滌，方法同上。隨后加 4^′ ， ^6- 二基-2-苯基吲哚染液，于避光室溫下孵育 10min 。染色結束后，玻片再次洗滌，方法同上。加自發(fā)熒光淬滅劑B液，作用時間為 5min ，沖洗 10min 并使用抗熒光淬滅封片劑進行封片處理。在避光環(huán)境下，熒光顯微鏡觀察并采集圖像。

1.3.5ELISA檢測：收集小鼠血清樣本，使用ELISA法檢測小鼠血清ICAM-1和VCAM-1水平。實驗步驟嚴格按照說明書進行操作。

1.3.6Westernblotting檢測：收集小鼠主動脈組織樣本（3只），經(jīng)研磨后，加入RIPA裂解液提取組織蛋白，采用BCA法檢測蛋白質的濃度。加入蛋白上樣緩沖液，電泳，轉膜，隨后將聚偏氟乙烯膜置于 5% 脫脂奶粉的封閉液中室溫封閉 2h 。加入一抗ICAM-1、VCAM-1和 β-actin ，于 4^qC 環(huán)境中孵育過夜，使用三羥甲基氨基甲烷緩沖液洗膜3次， 10min/ 次。加人了相應的二抗，并在室溫下的搖床上孵育 ^1h ，充分洗滌去多余二抗。使用智能凝膠成像系統(tǒng)對膜進行掃描，ImageJ軟件分析條帶的灰度值，目的蛋白均用 β -actin作為內(nèi)參進行標準化處理。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用Stata17.0、SPSS25.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以（ ）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，同組干預前后比較采用配對樣本 χ_t 檢驗。以 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.14組小鼠血脂水平測定

干預前，4組小鼠血清LDL-C、TC、HDL-C水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（ Pgt;0.05 ）。干預15周后，4組小鼠血清LDL-C、TC、HDL-C水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05 ）；其中HFD組與 HFD+DON 組小鼠血清LDL-C、TC水平均高于對照組和DON組，HDL-C水平低于對照組和DON組，差異有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05 ）。與干預前相比，4組小鼠干預15周后血清LDL-C、TC水平均升高，對照組、HFD組、 HFD+DON 組小鼠干預15周后血清HDL-C水平均降低，差異有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05 ），見表1。

2.24組小鼠主動脈根部橫截面HE染色結果

HE染色結果顯示，對照組與DON組小鼠主動脈平滑肌形態(tài)正常，排列整齊，內(nèi)皮結構完整，未產(chǎn)生炎癥（圖1A、1B）。HFD組小鼠血管內(nèi)膜增厚，血管平滑肌形態(tài)異常，排列散亂，結構紊亂，可見大量泡沫細胞（圖1C）。 HFD+DON 組小鼠平滑肌細胞排列尚整齊，內(nèi)皮細胞層連續(xù)，泡沫細胞數(shù)量明顯減少，細胞間隙基本正常（圖1D）。

2.34組小鼠主動脈根部橫截面免疫熒光染色結果

免疫熒光染色結果顯示，與對照組相比，DON組小鼠主動脈根部橫截面ICAM-1、VCAM-1表達無明顯變化，HFD組小鼠主動脈根部橫截面ICAM-1、VCAM-1表達明顯增多；與HFD組相比， HFD+DON 組小鼠主動脈根部橫截面ICAM-1、VCAM-1表達有所減少，見圖2、3。

2.44組小鼠血清黏附分子ICAM-1、VCAM-1水平比較

4組小鼠血清黏附分子ICAM-1、VCAM-1水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05 ）；其中， HFD+DON 組小鼠血清ICAM-1水平低于對照組、DON組和HFD組，HFD組小鼠血清ICAM-1水平高于DON組，差異有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05 ）； HFD+DON 組小鼠血清VCAM-1水平低于DON組和HFD組，HFD組小鼠血清VCAM-1水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05 ），見表2。

2.54組小鼠主動脈組織ICAM-1、VCAM-1蛋白表達比較

4組小鼠主動脈組織ICAM-1蛋白表達比較，差異無統(tǒng)計學意義（ Pgt;0.05 ）。4組小鼠主動脈組織VCAM-1蛋白表達比較，差異有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05 ）；其中，HFD組小鼠主動脈VCAM-1蛋白表達高于對照組、DON組和 HFD+DON 組，差異均有統(tǒng)計學意義（ Plt;0.05 ），見表3、圖4。

3討論

HBP作為代謝通量的傳感器，是糖基化修飾的前體[23-24]。糖基化終產(chǎn)物與其受體相互作用可觸發(fā)細胞活化［25］。血管內(nèi)皮細胞一旦被激活，可誘導黏附分子ICAM-1、VCAM-1表達增加，使免疫細胞黏附并引起組織炎癥「26]。因此，深入探討HBP對血管內(nèi)皮炎癥的調(diào)控作用至關重要。有研究表明，肥胖癥中脂肪細胞的注：A為對照組，B為DON組，C為HFD組，D為 HFD+DON 組；紅色高亮為ICAM-1染色陽性。

肥大導致了谷氨酰胺水平的降低，進而改變了能量代謝和HBP活性，糖基化修飾水平上調(diào)，最終提高促炎基因的轉錄活性[27]。LIN等［28]發(fā)現(xiàn)在DON處理人肺腺癌細胞下，抑制HBP可降低細胞內(nèi)UDP-GlcNAc水平，降低糖基化效應。而JAMES等[2]進一步從細胞層面證明，抑制HBP關鍵酶活性可下調(diào)系膜細胞中VCAM-1的轉錄水平，改善細胞炎癥。本研究以動物實驗為基礎，結果顯示，HFD誘導小鼠血管內(nèi)膜發(fā)生炎癥反應，抑制HBP可下調(diào)黏附分子ICAM-1、VCAM-1的表達，表明HBP在改善血管內(nèi)皮炎癥方面發(fā)揮重要作用。

脂質代謝失調(diào)與血管內(nèi)皮炎癥并不相互獨立，均可加速 AS的進展[29-31]。血清TC、LDL-C 和HDL-C水平是反映機體脂質代謝的主要指標[32]。YU等[33]的研究表明，HFD誘導脂質代謝失衡導致血清LDL-C和

TC水平升高，HDL-C水平降低，增強小鼠氧化應激及炎癥損傷。本研究結果顯示，干預15周后，HFD組、HFD+DON 組的LDL-C和TC均高于對照組和DON組，HFD組、 HFD+DON 組的HDL-C均低于對照組和DON組，即高脂狀態(tài)已形成，這與WANG等[34]研究結果一致，均說明HFD可誘導小鼠發(fā)生脂質代謝水平紊亂及炎癥反應。同時，結果顯示DON不改變血脂水平，說明抑制HBP抗血管內(nèi)皮炎癥的作用與改變血脂水平無關。

巨噬細胞中過度積聚膽固醇形成的泡沫細胞是AS的病理標志［35-36]。本研究結果發(fā)現(xiàn)，對照組與DON組平滑肌形態(tài)正常，結構完整，排列整齊，內(nèi)皮結構完整，未見炎癥。HFD組血管內(nèi)膜增厚，平滑肌細胞形態(tài)異常，結構紊亂，排列散亂，可見大量的泡沫細胞，存在炎性細胞的浸潤。本研究與VIKRAM等［37]的研究結果大致吻合，均提示HFD能激活血管內(nèi)膜炎癥反應。HFD+DON 組小鼠主動脈異常結構改善，內(nèi)皮細胞層連續(xù)，泡沫細胞明顯減少。表明在正常狀態(tài)下，抑制HBP不會改變血管形態(tài)，而當HFD誘導血管內(nèi)膜發(fā)生炎癥反應時，抑制HBP可發(fā)揮改善血管內(nèi)皮炎癥的作用。

AS的早期發(fā)展階段與血管內(nèi)皮細胞的炎癥變化密切相關，當內(nèi)皮細胞受損時，ICAM-1、VCAM-1和E- 選擇素等黏附分子被釋放，誘導淋巴細胞和單核細胞浸潤動脈壁進而促進炎癥的發(fā)展［38-39]。此外，在早期AS斑塊形成的過程中，糖基化修飾對黏附分子的識別和細胞間的相互作用具有重要影響「40]。研究表明，通過DON靶向谷氨酰胺代謝，抑制HBP可降低細胞內(nèi)UDP-GlcNAc水平，進而影響細胞內(nèi)的蛋白質糖基化修飾過程［41-42]。PARK等[43]研究也發(fā)現(xiàn)，DON可抑制生長因子刺激血管平滑肌細胞的增殖和遷移，改善AS再狹窄。本研究發(fā)現(xiàn)，血管內(nèi)皮在正常狀態(tài)下，DON干預沒有改變黏附分子ICAM-1、VCAM-1表達。但是，在HFD誘導小鼠血管內(nèi)膜發(fā)生炎癥反應及上調(diào)黏附分子表達時，DON干預后，小鼠血清中的ICAM-1、VCAM-1表達明顯降低，動脈組織中的ICAM-1、VCAM-1蛋白表達低于HFD組，同時，主動脈根部橫截面免疫熒光染色法檢測到ICAM-1、VCAM-1的陽性表達亦低于HFD組。以上結果提示在炎癥狀態(tài)下，抑制HBP可改善HFD誘導的小鼠血管內(nèi)皮炎癥。

綜上所述，本研究從內(nèi)皮促炎的內(nèi)因，即HBP可調(diào)控黏附分子ICAM-1與VCAM-1的跨膜表達角度，運用體內(nèi)實驗驗證HBP在改善血管內(nèi)皮炎癥中的調(diào)控作用，為防治心血管疾病早期病理進展提供新思路。然而，本研究未對與HBP關聯(lián)的黏附分子糖基化代謝產(chǎn)物進行測定，因此，HBP的調(diào)控作用是否與蛋白糖基化修飾有關，這需要在后續(xù)的工作中進一步研究。

作者貢獻：陳伊靜提出主要研究目標，負責研究的構思與設計，研究的實施，撰寫論文；許琪、劉忠典進行數(shù)據(jù)的收集與整理，統(tǒng)計學處理，圖、表的繪制與展示；陳伊靜、陳淑萍負責實驗指標的檢測；覃玲巧、唐薇婷進行論文的修訂；鐘秋安負責文章的質量控制與審查，對文章整體負責，監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。

陳伊靜D https：//orcid.org/0009-0004-3019-7585

參考文獻

［1］《中國心血管健康與疾病報告2022》編寫組．《中國心血管健 康與疾病報告2022》要點解讀［J］.中國心血管雜志，2023， 28（4）：297-312.D01： 10.3969/j.issn.1007-5410.2023.04.001.

[2]YAO T，LONGQ，LIJ，et al.Small dense low-density lipoprotein cholesterol is stronglyassociated with NIHSS score andintracranialarterialcalcificationinacuteischemicstroke subjects[J].SciRep，2020，10（1）：7645.DOI：10.1038/ s41598-020-64715-9.

[3］高麗君，齊曉勇，王秀萍，等.瑞舒伐他汀對頸動脈粥樣硬化 患者血脂和頸動脈斑塊的影響［J］.中國全科醫(yī)學，2011， 14（36）：4153-4156.D0I： 10.3969/j.issn.1007-9572.2011.36.012.

[4]DURRERC，LEWISN，WANZX，etal.Short-termlowcarbohydrate high-fat dietin healthy young males renders the endothelium susceptible to hyperglycemia-induced damage，an exploratory analysis［J].Nutrients，2019，11（3）：489.DOI： 10.3390/nu11030489.

[5]ZHANGNJ，ZHANGY，WUBQ，etal.Role ofWWdomain E3ubiquitin protein ligase2in modulatingubiquitination and Degradation of Septin 4 in oxidative stress endothelial injury[J]. Redox Biol，2020，30：101419.D0I：10.1016/j.redox.2019.101419.

[6］蘇敏，鐘翠平.動脈粥樣硬化病變中黏附分子ICAM-1、 VCAM-1及E-selectin的表達［J］.第三軍醫(yī)大學學報，2009， 31（11）：1066-1068.D0I： 10.3321/j.issn：1000-5404.2009.11.020.

[7]WALLEZ Y，HUBER P.Endothelial adherens and tight junctions in vascular homeostasis，inflammation and angiogenesis［J].Biochim BiophysActa，2008，1778（3）：794-809.D01：10.1016/ j.bbamem.2007.09.003.

[8]ROMS，ZULUAGA-RAMIREZV，DYKSTRAH，etal.Poly （ADP-ribose）polymerase-1 inhibition in brain endothelium protects the blood-brain barrier under physiologic and neuroinflammatory conditions[J].JCereb Blood Flow Metab， 2015，35（1）：28-36.DOI：10.1038/jcbfm.2014.167.

[9]YANGJH，WANG T，JIN XX，et al.Roles of crosstalk between astrocytes and microglia in triggering neuroinflammation and brain edema formation in1，2-dichloroethane-intoxicated mice[J]. Cells，2021，10（10）：2647.D0I：10.3390/cells10102647.

[10]HE P，SRIKRISHNA G，F(xiàn)REEZE HH.N-glycosylation deficiency reduces ICAM-1 induction and impairs inflammatory response [J]. Glycobiology，2014，24（4）：392-398.D0I：10.1093/glycob/ cwu006.

[11]NARVAEZCJ，GREBENCD，BALINTHS，et al.VitaminD regulation of HAS2，hyaluronan synthesis and metabolism in triple negative breast cancer cells［J].J Steroid Biochem Mol Biol， 2020，201：105688. DO1：10.1016/j.jsbmb.2020.105688.

[12]OIKARI S，MAKKONEN K， DEEN A J， et al. Hexosamine biosynthesis in keratinocytes：roles of GFAT and GNPDA enzymes in the maintenance of UDP-GlcNAc content and hyaluronan synthesis[J].Glycobiology，2016，26（7）：710-722.DOI： 10.1093/glycob/cww019.

[13]LUCENA M C，CARVALHO-CRUZ P，DONADIO J L，et al. Epithelial mesenchymal transition induces aberrant glycosylation through hexosaminebiosyntheticpathwayactivation［J].JBiol Chem，2016，291（25）：12917-12929.D01：10.1074/jbc. M116.729236.

[14]MARSHALL S， NADEAU O， YAMASAKI K. Dynamic actions of glucose and glucosamine on hexosamine biosynthesis in isolated adipocytes：differential effcts on glucosamine 6-phosphate，UDPN-acetylglucosamine，and ATP levels[J].JBiol Chem，2004， 279（34）：35313-35319.D0I：10.1074/jbc.M404133200.

[15]TAPARRAK，WANGHL，MALEKR，etal. O-GlcNAcylation is required for mutant KRAS-induced lung tumorigenesis [J] . J Clin Invest，2018，128（11）：4924-4937.DOI：10.1172/JCI94844.

[16］PANEQUE A，F(xiàn)ORTUS H，ZHENG JL，et al. The hexosamine biosynthesis pathway：regulation and function [J]. Genes， 2023，14（4）：933.DOI：10.3390/genes14040933.

[17]SCOTT D W，PATEL RP.Endothelial heterogeneityand adhesion molecules N-glycosylation： implications in leukocyte trafficking in inflammation[J].Glycobiology，2013，23（6）：622-633. DOI：10.1093/glycob/cwt014.

[18]SCOTT D W，DUNN T S，BALLESTAS M E，et al. Identification of a high-mannose ICAM-1 glycoform：effects of ICAM-1 hypoglycosylation on monocyte adhesion and outside in signaling[J].Am JPhysiol CellPhysiol，2013， 305（2）： C228-237. DOI：10.1152/ajpcell.00116.2013.

[19]GUTIERREZ-AGUILARR，GRAYSON BE，KIM D H，et al. CNS GNPDA2 does not control appetite，but regulates glucose homeostasis[J].Front Nutr，2021，8（29）：787470.DOI： 10.3389/fnut.2021.787470.

[20] VAN SCHERPENZEEL M，CONTE F，BULL C， et al. Dynamic tracing of sugar metabolism reveals the mechanisms of action of synthetic sugar analogs[J].Glycobiology，2022，32（3）： 239-250.DOI：10.1093/glycob/cwab106.

[21]THOMASAG，ROJASC，TANEGAC，etal.Kinetic characterization of ebselen，chelerythrine and apomorphine as glutaminase inhibitors [J]. Biochem Biophys Res Commun， 2013，438（2） ：243-248.D0I：10.1016/j.bbrc.2013.06.110.

[22]JAMESLR，TANGDM，INGRAMA，etal.Flux through the hexosamine pathwayisa determinantofnuclear factorkappaBdependent promoter activation［J].Diabetes，2002，51（4）： 1146-1156. DOI： 10.2337/diabetes.51.4.1146.

[23]WELLSL，VOSSELLERK，HARTG W.A role for N-acetylglucosamine as a nutrient sensor and mediator of insulin resistance[J].Cell Mol Life Sci CMLS，2003，60（2）：222- 228.DOI： 10.1007/s000180300017.

[24]LOVE D C， HANOVER J A. The hexosamine signaling pathway： deciphering the“O-GleNAc code”［J].SciSTKE，2005， 2005（312）：re13.DOI：10.1126/stke.3122005re13.

[25]BIERHAUS A，NAWROTHPP.Multiple levels of regulation determine the role of the receptor for AGE（RAGE）as common soil in inflammation，immune responses and diabetes melitus and its complications[J].Diabetologia，2009，52（11）：2251-2263. DOI：10.1007/s00125-009-1458-9.

[26]LIAO JK.Linking endothelial dysfunction with endothelial cell activation［J].JClin Invest，2013，123（2）：540-541.DOI： 10.1172/JCI66843.

[27] LECOUTRE S，MAQDASY S，PETRUS P，et al. Glutamine metabolism in adipocytes：a bona fide epigenetic modulator of inflammation[J].Adipocyte，2020，9（1）：620-625.DOI： 10.1080/21623945.2020.1831825.

[28]LIN C H，LIAO CC，CHEN MY，et al.Feedback regulation of O-GlcNAc transferase through translation control to maintain intracellular O-GlcNAc homeostasis[J]. Int JMol Sci，2021，22 （7）：3463.DOI：10.3390/ijms22073463.

[29]RYU H，KIM J，KIM D，et al. Cellular and molecular links betweenautoimmunityand lipid metabolism[J].Mol Cells， 2019，42（11） ：747-754.D0I：10.14348/molcells.2019.0196.

[30]WANG MM，WANG ZY，MIAO YY，et al. Diallyl trisulfide promotes placental angiogenesis by regulating lipid metabolism and alleviating inflammatory responses in obese pregnant mice [J]. Nutrients，2022，14（11）：2230.D0I：10.3390/nu14112230.

[31] CHENL W，LIN C S，TSAI MC，et al.Pitavastatin exerts potent anti-inflammatory and immunomodulatory effects via the suppression of AP-1 signal transduction in human Tcells[J].Int JMol Sci， 2019，20（14）：3534.DOI：10.3390/ijms20143534.

[32]LIU J，SONGY，ZHAO Q，et al. Effects of Tartary buckwheat protein on gut microbiome and plasma metabolite in rats with highfat diet[J].Foods，2021，10（10）：2457.D0I：10.3390/ foods10102457.

[33]YUH，YI X Z，GAO X，et al. Tilapia-head chondroitin sulfate protects against nonalcoholic fatty liver disease via modulating the gut-liver axis in high-fat-diet-fed C57BL/6 mice[J].Foods， 2022，11（7）：922.D01：10.3390/fo0ds11070922.

[34]WANGQZ，YUANJ，YU ZY，et al.FGF21 attenuates highfatdiet-induced cognitive impairment via metabolic regulationand anti-inflammation of obese mice［J].Mol Neurobiol，2018， 55（6）：4702-4717.D01： 10.1007/s12035-017-0663-7.

[35] LIU J， HUAN C M， CHAKRABORTY M，et al. Macrophage sphingomyelin synthase 2 deficiency decreases atherosclerosis in mice［J].Circ Res，2009，105（3）：295-303.DOI： 10.1161/CIRCRESAHA.109.194613.

[36]HUANGK，LIUCS，PENG M X，et al.Glycoursodeoxycholic acid ameliorates atherosclerosis and alters gut microbiotain apolipoprotein E-deficient mice[J].JAm Heart Assoc，2021， 10（7）：e019820.DOI：10.1161/JAHA.120.019820.

[37]VIKRAMA，KIMYR，KUMARS，etal.Vascular microRNA-2O4isremotelygovernedbythemicrobiomeand impairs endothelium-dependent vasorelaxation by downregulating Sirtuin1［J].Nat Commun，2016，7：12565.DOI：10.1038/ ncomms12565.

[38]LIBBYP.Currentconcepts ofthe pathogenesis of the acute coronary syndromes[J].Circulation，2001，104（3）：365-372. DOI： 10.1161/01.cir.104.3.365.

[39]JAN M，CUETO R，JIANG XH，et al. Molecular processes mediating hyperhomocysteinemia-induced metabolic reprogramming，redox regulation and growth inhibition in endothelialcells［J].RedoxBiol，2021，45：102018.DOI： 10.1016/j.redox.2021.102018.

[40］AKINKUOLIE AO，BURINGJE，RIDKERPM，et al.A novel protein glycan biomarker and future cardiovascular disease events［J].JAmHeart Assoc，2014，3（5）：e001221.DOI： 10.1161/JAHA.114.001221.

[41] YANG X Y， QIAN K. Protein O-GlcNAcylation： emerging mechanisms and functions[J].Nat Rev Mol Cell Biol，2017， 18（7）： 452-465.D0I： 10.1038/nrm.2017.22.

[42]ISHIKITA A，MATSUSHIMA S，IKEDA S，etal.GFAT2 mediates cardiac hypertrophy through HBP-O-GlcNAcylationAkt pathway［J].iScience，2021，24（12）：103517.DOI： 10.1016/j.isci.2021.103517.

[43]PARKHY，KIMMJ，LEE S，et al.Inhibitory effect of a glutamine antagonist on proliferation and migration of VSMCs viasimultaneous attenuation of glycolysis and oxidative phosphorylation［J].IntJMol Sci，2021，22（11）：5602. DOI：10.3390/ijms22115602.

（收稿日期：2024-03-19；修回日期：2024-05-07） （本文編輯：康艷輝）