摘要 煙酰胺單核苷酸（NMN）是一種自然存在的生物活性核苷酸，還是人體內(nèi)必不可少的輔酶煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+/NADH）的合成前體，被認為是極具潛力的抗衰老因子。 對NMN進行全面研究不僅有助于提供延緩衰老的方法，還可能給腦損傷、心臟損傷、肝損傷、糖尿病腎病、膿毒癥、致盲疾病和抑郁癥等疾病帶來新的治療機會。 本文介紹了NMN的抗衰老機制，并從抗衰和醫(yī)療2個角度梳理了其在不同領域的應用。重點論述了國內(nèi)外現(xiàn)有的NMN檢測手段，包括酶偶聯(lián)反應法、電化學分析法、定量核磁共振法、液相色譜及液相色譜-質(zhì)譜法和毛細管電泳法等，并對不同方法的線性范圍、檢測限和回收率等參數(shù)進行對比。 最后，討論了NMN研究在作用機制、實際應用和檢測分析3個方面所面臨的挑戰(zhàn)以及未來的發(fā)展方向。

關鍵詞 煙酰胺單核苷酸；檢測；應用；抗衰老

中圖分類號：O657 文獻標識碼：A 文章編號：1000-0518（2025）02-0168-14

煙酰胺單核苷酸（Nicotinamide mononucleotide，NMN）是一種天然單核苷酸化合物，其結構式如圖1分為α-NMN和β-NMN，其中β-NMN為活性形式，相對分子質(zhì)量為334. 22。 NMN存在于各種生物體內(nèi)，在人體內(nèi)主要存在于胎盤組織以及血液、尿液等體液中［1］，能廣泛參與各類生化反應，與免疫、代謝緊密聯(lián)系。 同時，在天然食品中也能檢測到其存在，例如毛豆、西蘭花、番茄、蘑菇、生牛肉和蝦等［2］。

隨著生活水平的提升，人們越來越關注抗衰保健方面的問題。 研究表明，NMN對嚙齒類動物具有顯著的抗衰老作用，以其為有效成分的保健品已在美國和日本等國家實現(xiàn)商業(yè)化生產(chǎn)［3-4］。 如圖2所示，NMN作為煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（Nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+/NADH）生物合成的速率控制因素，在腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）存在下，通過煙酰胺單核苷酸腺苷酸轉(zhuǎn)移酶（NMNAT）轉(zhuǎn)換成NAD+，其功能也主要通過合成NAD+來實現(xiàn)。

1 NMN 的抗衰老機制

NAD+是人體內(nèi)必不可少的輔酶，廣泛分布在人體的所有細胞內(nèi)。 隨著年齡增長，細胞內(nèi)NAD+水平逐漸下降［5-7］，由圖3可知，色氨酸（Trp）、煙酸（NA）、煙酰胺（NAM）和煙酰胺核苷（NR）這4種膳食來源可以對NAD+進行補充。 生物體主要使用圖3中給出的煙酰胺補救途徑（Salvage pathway），即依賴NAM和NR這2個來源，先合成NMN再轉(zhuǎn)化為NAD+。 細胞外的NMN可能通過3種路線被細胞吸收，第1種是細胞表面蛋白CD73將NMN去磷酸化為NR后進入細胞［8-10］； 第2種是跨膜糖蛋白CD38將NMN代謝成NAM后穿過質(zhì)膜［11］； 第3種是通過特定的轉(zhuǎn)運蛋白Slc12a8直接將NMN特異性地轉(zhuǎn)運到細胞內(nèi)［12］。 無論以何種方式進入細胞內(nèi)的NMN，均是轉(zhuǎn)化成NAD+后才能發(fā)揮抗衰老作用。

乙酰化是細胞衰老的一大特征。 當動物衰老時，組蛋白乙酰化等表觀遺傳印記會發(fā)生顯著變化，當動物到達中年時，這些變化就會顯現(xiàn)出來［13-15］。 而NAD+依賴的去乙?；负虯DP-核糖轉(zhuǎn)移酶又稱為長壽蛋白（SIRT），在細胞抗逆性、能量代謝、細胞凋亡和衰老過程中具有重要作用。 哺乳動物中有7種SIRT存在于不同的亞細胞區(qū)室中： SIRT1、SIRT6和SIRT7主要存在于細胞核中； SIRT2主要存在于細胞質(zhì)中； SIRT3、SIRT4和SIRT5主要存在于線粒體中［10］。 SIRT1?SIRT7中，每個成員均具有各種酶活性、靶標和生理功能，任何一個成員的缺乏均會加速細胞衰老［16］。 其中，SIRT1、SIRT2、SIRT3、SIRT5、SIRT6和SIRT7均具有去乙?；富钚?，SIRT4具有ADP-核糖轉(zhuǎn)移酶活性，SIRT所有的這些酶活性均依賴于NAD+［17］。 通過NMN的補充可以增強NAD+的體內(nèi)合成，如圖4所示，NAD+與其還原形式NADH之間相互轉(zhuǎn)化產(chǎn)生能量，并激活SIRT去除底物蛋白上的乙?；?，同時，NAD+在煙酰胺和ADP-核糖之間裂解，后者變成一個乙?；荏w，捕獲游離的乙?；笊梢阴；?ADP-核糖，從而實現(xiàn)底物蛋白的去乙?；_到對抗細胞衰老的效果［10］。

2 NMN 的應用

2. 1 抗衰領域

衰老是一種自然過程，其特征是由于NAD+的消耗導致大腦、脂肪組織、皮膚、肝臟、骨骼肌和胰腺等各種器官中線粒體的能量下調(diào)［18］。 由于NMN是NAD+生物合成的中間化合物，因此可以通過向體內(nèi)施用NMN來補償NAD+水平降低導致的衰老行為。 Mills等［2］研究發(fā)現(xiàn)，給實驗鼠長期飼喂NMN可有效地減輕小鼠與年齡相關的生理衰退，NMN在沒有任何明顯的毒性或者有害作用的情況下，可以抑制與年齡相關的體重增加，增強能量代謝，促進體力活動，改善胰島素敏感性和血脂譜，并改善眼功能和其他病理生理指標，這些作用體現(xiàn)出NMN對人類有效抗衰的預防和治療潛力。 隨著年齡的增長，毛細血管密度和血流量下降是死亡率和發(fā)病率的主要原因。 Das等［19］發(fā)現(xiàn)用NMN治療小鼠可以促進毛細血管密度增加，以此改善老年小鼠的血流量并提高耐力，這一發(fā)現(xiàn)對于改善器官和組織的血液流動以及提高老年人身體性能具有重要意義。

2. 2 醫(yī)療領域

除了NMN的抗衰老潛力外，許多體內(nèi)研究還發(fā)現(xiàn)它具有廣泛的藥理活性，其在醫(yī)療領域的應用也一直是研究熱點［20-26］。 Park等［27］發(fā)現(xiàn)在缺血性損傷后注射NMN可以保護海馬CA1區(qū)神經(jīng)元免于缺血性細胞死亡，而且可防止ADP-核糖基化和NAD+分解代謝的增加，故以適當劑量給藥NMN對缺血性腦損傷具有很強的保護作用。 Wei等［28］論證NMN治療顯著減少了腦出血區(qū)域的腦水腫、腦細胞死亡、氧化應激、小膠質(zhì)細胞活化和中性粒細胞浸潤、細胞間黏附分子-1 表達，以此減輕腦出血后腦損傷。Kawamura等［29］發(fā)現(xiàn)NMN治療可以恢復海馬NAD+和SIRT6水平，以此為臨床相關的缺氧缺血小鼠新生兒動物模型提供神經(jīng)保護，這可能意味著一種治療新生兒腦損傷的新方法。

用于癌癥治療的放射性治療可能會對心臟造成損害，其中氧化應激增加是導致心臟功能障礙的一個重要因素。 Wang等［30］提出補充NMN可以有效減少活性氧的生成并提高ATP含量，還能部分減輕心肌中核苷酸和氨基酸代謝的改變，以此減輕輻射引起的機械和電功能障礙，因此NMN可以成為緩解放射誘導的心臟損傷的候選藥物。 Margier等［31］分別通過急性和慢性研究發(fā)現(xiàn)NMN可以預防抗腫瘤藥物阿霉素誘導的心臟和骨骼肌毒性，這一研究可能改善阿霉素在臨床應用中受到的限制。 另外，Whitson等［32］和Nadtochiy等［33］也分別從線粒體靶向和糖酵解刺激角度解釋了NMN對心臟的保護作用。

肝星狀細胞（HSC）是誘導肝纖維化的細胞外基質(zhì)的主要來源，Zong等［34］提出NMN可有效抑制活性HSC中促纖維化蛋白和氧化還原酶的分泌，從而導致HSC失活。 該研究提供了補充NMN作為肝纖維化治療的新思路。 Ge等［35］構建了脂溶性番茄紅素和水溶性NMN功能化共存體系，二者協(xié)同作用可降低氧化應激和炎癥，并調(diào)節(jié)腸道菌群，從而預防脂多糖誘導的急性肝損傷。

Yoshino等［36］研究表明，NMN通過恢復高脂飲食誘導的2型糖尿病小鼠的NAD+水平來改善葡萄糖耐量，其通過增強胰島素敏感性和胰島素信號傳導成為對飲食和年齡誘發(fā)的糖尿病治療的有效干預措施。 Yasuda等［37］對患有糖尿病腎病的小鼠進行NMN治療，發(fā)現(xiàn)早期糖尿病腎病的短期NMN治療可以通過激活NAD+補救途徑起到遠程腎臟保護作用，這項研究提供了NMN治療具有遺留效應的證據(jù)，表明短期NMN補充可抑制糖尿病腎病的長期發(fā)展。

膿毒癥引起的多器官衰竭是重癥監(jiān)護病房發(fā)病和死亡的主要原因。 Suchard等［38］認為病毒或細菌感染導致的膿毒癥是由病原體干擾宿主的NAD+代謝引起的，應該將巨噬細胞代謝變化與細胞內(nèi)NAD+ 濃度之間的聯(lián)系作為研究重點。 Cao等［39］發(fā)現(xiàn)通過NMN補充NAD+可防止線粒體功能障礙和氧化應激并抑制細菌傳播，同時通過維持SIRT3活性減少膿毒癥中的炎癥損傷，這可能是膿毒癥的一種治療選擇。

Lin等［40］研究表明，視網(wǎng)膜缺乏NAD+是多種視網(wǎng)膜功能障礙的早期特征，會導致代謝功能障礙，誘發(fā)光感受器死亡。 補充NMN促進視網(wǎng)膜中的NAD+的生物合成可以減少光感受器死亡并改善視力，未來可能為致盲疾病提供統(tǒng)一的治療靶點。

Yach等［41］研究表明，NMN對與線粒體相關的疾病具有保護作用，這些疾病在人類和動物研究中與抑郁癥有關。 Xie等［42］提出補充NMN可以有效增強SIRT3活性，改善小鼠海馬體和肝臟中的線粒體能量代謝，提高ATP生成，從而減輕慢性皮質(zhì)酮誘導的小鼠抑郁樣行為。

這些治療效果多源自于動物實驗，研究目的多為安全性評估。 但NMN在人體內(nèi)的藥理學效用仍知之甚少，需要大量臨床研究進行充分驗證。 隨著NMN信號通路的探索和臨床實驗的深入，通過NMN控制NAD+濃度以預防或治療疾病、延長壽命的方法，可能成為一種綜合型的干預策略，提供一種科學治療的新方向。

3 NMN 的檢測方法

NMN的檢測方法主要包括酶偶聯(lián)反應法、電化學分析法、定量核磁共振法、液相色譜及液相色譜-質(zhì)譜法和毛細管電泳法等。

3. 1 酶偶聯(lián)反應法

酶偶聯(lián)反應法是一種通過工具酶反應速率來間接反映待測酶活性的方法，該法具有反應快速、靈敏和特異性強的優(yōu)勢。 Ummarino等［43］通過新型酶偶聯(lián)反應同時定量測定不同奶類中的NR、NMN和NAD+，酶偶聯(lián)反應過程如圖5所示，NR通過煙酰胺核苷激酶（NRK）轉(zhuǎn)化為NMN后，通過NMNAT轉(zhuǎn)化成NAD+，產(chǎn)生的NAD+通過乙醇脫氫酶（ADH）和心肌黃酶（Diaphorase）的共同作用進行循環(huán)，同時將刃天青（Resazurin）轉(zhuǎn)化為高熒光產(chǎn)物試鹵靈（Resorufin）。 在循環(huán)步驟中，試鹵靈的產(chǎn)生速率分別與NAD+、NR和NMN的產(chǎn)生量成正比，通過酶標儀記錄熒光強度的增加值，得到提取物中NR、NMN和NAD+含量，其中NMN在母乳和羊奶中含量分別為6. 1×10-6和2. 1×10-6 mol/L。 雖然該方法還存在樣品前處理繁瑣、間接檢測導致信號強度相對不穩(wěn)定且準確性較低等問題，但這首次證實了在食物中存在NMN并提供了定量數(shù)據(jù)，為人們尋找最合適的NMN來源提供了新的思路，有助于設計更好的加工技術以保留食物營養(yǎng)價值。

3. 2 電化學分析法

對于NMN的電化學研究還非常罕見，不管是定性研究還是定量研究均存在廣闊空間。 Braun等［44］探究了還原態(tài)的煙酰胺單核苷酸（NMNH）在水介質(zhì)中碳電極和二甲基亞砜（DMSO）中鉑電極上的電化學氧化，發(fā)現(xiàn)在水介質(zhì)和DMSO介質(zhì)中，NMNH分別在約-1. 15和-0. 99 V處產(chǎn)生陰極峰，這些陰極峰僅在初始氧化后出現(xiàn)，并被確定為由于NMNH本身的還原所致，即NMN的還原峰。 Liu等［45］開發(fā)了一種通過二氧化硫脲化學還原NMN生產(chǎn)NMNH的方法，并在研究中表明NMNH在體外和體內(nèi)均是比NMN更好的NAD+增強劑。 Zhang等［46］將細胞生長與NMN和NMNH的體內(nèi)循環(huán)耦合起來，實現(xiàn)更經(jīng)濟和可擴展的生物轉(zhuǎn)化。 這些報道表明NMN與NMNH之間存在特定的氧化還原轉(zhuǎn)化，這種轉(zhuǎn)化可以通過化學或者生物的方法實現(xiàn)，通過電化學分析法定量NMN理論可行。 NMN電化學研究的難點可能主要體現(xiàn)在修飾電極的制備上，選擇合適的電極載體和修飾材料是對NMN電化學定量的關鍵。 Black等［47］表明，NMN與NADH具有非常相似的氧化還原電位。 作為結構和功能均與NMN具有高度相關性的生物活性分子，NADH的電化學研究已經(jīng)趨于成熟。 表1是采用電化學分析法檢測NADH的應用，這些應用將對NMN的電化學研究具有十分有效的參考價值。

3. 3 定量核磁共振法（qNMR）

qNMR是一種基于核磁共振原理的定量分析方法，該方法制樣和檢測的過程簡便，可在測量含量的同時鑒別化合物的結構，并且不會破壞樣品結構。 近些年來，其廣泛應用在有機物的結構確定和定量研究領域。 早期主要通過qNMR對相關核苷酸進行檢測，Neves等［69］使用體內(nèi)核磁共振碳譜（13C NMR）定量乳酸乳球菌活細胞中的NAD+和NADH水平，通過添加乳酸鹽作內(nèi)標，所得檢測限為5. 0×10-4 mol/L，為qNMR作為非侵入性的檢測方法提供了一種有效思路。 Anderson等［70］在研究通過熱量限制延長酵母細胞壽命的作用機理時，同樣采用體內(nèi)13C NMR技術檢測熱量限制細胞中游離的NAD+，分別在2×10-2和5×10-3 mol/L葡萄糖的培養(yǎng)基中檢測到NAD+含量分別為3. 97×10-3和4. 28×10-3 mol/L，表明添加葡萄糖不會影響NAD+水平，即細胞沒有葡萄糖饑餓。 Guo等［71］提出了一種通用的定量核磁共振氫譜法（1H NMR）來監(jiān)測ATP周轉(zhuǎn)，其檢測限約為3. 0×10-7 mol/L。 Gowda等［72］采用1H NMR法實現(xiàn)NAD+、NADH、ATP以及煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸等物質(zhì)的同時測定，野生型小鼠心臟組織中NAD+和NADH質(zhì)量濃度分別為170～180和60～70 ng/mg。

定量核磁NMN是近些年才被開發(fā)出來的。 Shabalin等［73］以蔗糖為內(nèi)標，氘代水配制的磷酸鈉緩沖液為溶劑，在700 MHz條件下采用 1H NMR測定人體細胞提取物中的NAD+及其主要代謝物，其中NMN濃度為（0. 24±0. 04） pmol/mg蛋白質(zhì)。 孟辰笑凝等［74］在600 MHz條件下使用1H NMR掃描16次，測定NMN和內(nèi)標物對苯二酚在氘水中的氫譜，分別選擇化學位移為δ 8. 89（NMN）和δ 6. 67（對苯二酚）處的峰作為定量峰計算出市售保健品片劑樣品（標示質(zhì)量分數(shù)0. 7%）中NMN的平均質(zhì)量分數(shù)為0. 67%，RSD=1. 88%。 Gandhi等［75］使用1H NMR方法分析居住在海平面地區(qū)和高海拔地區(qū)人群的尿液代謝組，測得二者的NMN濃度分別為1. 54×10-5和4. 56×10-5 mol/L，表明高海拔地區(qū)人群的NMN平均水平明顯高于海平面地區(qū)，進一步說明NMN可以通過提高體內(nèi)NAD+水平來減緩長期高原缺氧環(huán)境引起的代謝變化。 基于qNMR法檢測NMN的過程快速、簡單，但檢測限通常不及高效液相色譜法（HPLC）等方法，不適用于微量NMN的檢測，因此常用于對市售產(chǎn)品的鑒定，樣品還可回收利用。

3. 4 液相色譜及液相色譜-質(zhì)譜法（LC 及LC-MS）

HPLC是NMN檢測中使用最普遍的方法之一。 HPLC利用溶于流動相中的各組分在固定相中滯留時間的不同，實現(xiàn)不同組分在柱內(nèi)的分離，隨后進入檢測器進行檢測。 現(xiàn)有的檢測器包括紫外吸收檢測器、熒光檢測器、電化學檢測器、示差折光檢測器和二極管陣列檢測器等。 在檢測限和靈敏度方面，HPLC比qNMR要出色許多，但是儀器的維護也更昂貴與頻繁。 HPLC法在使用中通常會對色譜柱、流動相和洗脫程序等參數(shù)進行優(yōu)化以提高精密度和靈敏度，其在NMN檢測中的應用總結于表2。

3. 4. 1 高效液相色譜-紫外檢測（HPLC-UV）

紫外吸收（UV）檢測器是HPLC中最常用的，液相色譜儀在生產(chǎn)過程中基本均配備該檢測器。 早在2004年，Bieganowski等［86］通過建立具有酶活性的HPLC-UV法成功鑒定出NR和NMN，發(fā)現(xiàn)NR與NMN一樣可以作為真核細胞的NAD+前體，此時還沒有實現(xiàn)二者的定量。 Liu等［76］通過煙酰胺生物合成NMN的過程中，利用HPLC-UV對大腸桿菌細胞中的NMN及其類似物進行檢測，采用C18柱，流動相由甲醇和KH2PO4溶液組成，流速設定為1 mL/min，選擇254 nm的波長進行分析，檢測到最終生產(chǎn)的NMN滴度為1. 48×10-3 mol/L（496. 2 mg/L）。 馮雪萍等［77］利用HPLC-UV對保健食品中的NMN含量進行分析，采用C18柱，選擇254 nm的波長，以KH2PO4和乙腈作為流動相，以0. 8 mL/min的流速進行梯度洗脫，NMN濃度在1. 5×10-3～6. 0×10-3 mol/L（0. 5～2. 0 mg/mL）之間存在良好的線性關系，檢測限為3. 0×10-9 mol/L（0. 001 μg/mL）。 UV檢測器能實現(xiàn)與絕大多數(shù)檢測器的串聯(lián)使用，進而獲得更全面、更準確的檢測信號。

3. 4. 2 高效液相色譜-熒光檢測（HPLC-FLD）

HPLC-FLD是以高效液相色譜作為分離系統(tǒng)，檢測熒光強度的方法，與UV檢測器相比，F(xiàn)LD檢測器的靈敏度大約高出2個數(shù)量級。 Formentini等［78］開發(fā)了一種用苯乙酮衍生NMN，得到具有熒光性質(zhì)的衍生物，從而實現(xiàn)熒光強度檢測的方法。如圖6所示， 將細胞提取物離心后的上清液先與KOH、苯乙酮混合孵育，再與甲酸反應，NMN通過這兩步轉(zhuǎn)化為高熒光衍生物。 隨后，將樣品注入HPLC系統(tǒng)，該系統(tǒng)由C18柱、含0. 1 mol/L磷酸鹽緩沖液和10%（體積分數(shù)）乙腈水溶液的流動相，以及激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為332和454 nm的熒光檢測器組成，結果中NMN相對熒光強度在8. 0×10-12～2. 5×10-9 mol/L的濃度范圍內(nèi)線性增加，靈敏度為7. 5×10-14 mol/L。 通過該方法分別測量了U937 細胞和HeLa 細胞中NMN的含量約為3. 7×10-9 mol/mg蛋白質(zhì)和4. 8×10-10 mol/mg蛋白質(zhì)，還發(fā)現(xiàn)這些細胞的線粒體中NMN濃度明顯高于細胞質(zhì)或細胞核中。 由于FLD不屬于通用型檢測器，該方法只適用于一定條件下能夠發(fā)射熒光的化合物，對于NMN檢測而言需要進行前處理使之轉(zhuǎn)化為熒光衍生物，導致檢測過程費時，且間接檢測的準確性略低。

3. 4. 3 液相色譜-質(zhì)譜檢測（LC-MS）

LC-MS是NMN含量分析領域中最主要的方法，其利用液相色譜進行分離，利用質(zhì)譜提供具有表征特性的高靈敏度檢測，二者結合可以減少實驗誤差，提高準確度。 Yamada等［79］利用LC-MS法通過反相高效液相色譜柱在線性梯度的甲酸銨-甲醇流動相中實現(xiàn)細胞中NMN及相關8種化合物的分離，每種化合物經(jīng)過電噴霧電離后，在三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀的多反應監(jiān)測模式下進行檢測，具有良好的線性響應，定量檢測范圍在1. 0×10-13～1. 0×10-12 mol/L。 使用該方法可以測定小鼠紅細胞中含有3. 3×10-8 mol/mLNMN，這是第1篇直接對細胞中存在的NMN進行定量的報道。 Evans等［80］建立了一種LC-MS方法分析酵母細胞的NAD+代謝組，采用親水相互作用色譜柱，以加入適量乙酸銨的乙腈和氫氧化銨作為流動相，在氨丙基固定相上進行喹啉酸的負離子模式檢測以及其他化合物的正離子模式檢測，選用多反應離子監(jiān)測鑒定出代謝組中12種化合物和6種相關核苷、核苷酸，其中NMN的定量限為5. 0×10-13 mol/L。 相比Yamada等［79］的工作，該法覆蓋NAD+代謝組中的更多成分。

近些年來，人們逐漸認識到NMN的抗衰老能力，了解天然食品中NMN含量有利于日常生活中的NMN補充。 李東芹［81］建立了利用LC-MS技術快速測定蔬菜和水果中NMN含量的方法，使用ODS色譜柱，以乙酸溶液和含醋酸銨的甲醇溶液為流動相，以0. 3 mL/min的流速梯度洗脫，采用電噴霧離子源，在正離子電離模式下選用多反應離子監(jiān)測掃描模式測得每100 g牛油果、卷心菜及西蘭花鮮樣中分別含有6. 519、4. 091和2. 30 μg的NMN，檢測限達到2. 0×10-10 mol/L。 在探索NMN能否作為藥物治療的過程中，掌握其含量對相關癥狀的作用效果也至關重要。 Qiu等［87］在探究高血壓患者的NAD+水平與血壓升高和血管損傷的關系時，通過LC-MS測定NAD+、NMN以及其他相關代謝物水平，結果表明通過NMN補充劑增加NAD+濃度的方法是針對高血壓患者的一種十分具有前景的治療手段。

另外，在HPLC的基礎上相繼推出的2種超高效液相色譜技術（UPLC、UHPLC），可以更大限度發(fā)揮出色譜的分離性能，二者分別與串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用后形成的UPLC-MS/MS［82-83］和UHPLC-MS/MS［84-85］技術也已經(jīng)被開發(fā)用于動植物細胞中NMN的含量分析。

3. 5 毛細管電泳法（CE）

CE是以高壓直流電場為驅(qū)動力，以毛細管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的一類液相分離技術［88］，其可配備紫外檢測器、熒光檢測器、激光誘導熒光檢測器、電化學檢測器或質(zhì)譜檢測器等多種檢測器。 與HPLC相比，CE具有分離效率更高、試樣消耗量更小和環(huán)境更友好的優(yōu)勢，不足之處在于重現(xiàn)性較差、對檢測器靈敏度要求很高和不適用于制備。 在核苷酸的降解與代謝過程中可以采用毛細管電泳簡單快速的定量分析多種核苷酸［89］。 馬曉穎等［90］開發(fā)了利用CE法測定金針菇提取液中NMN含量的方法，采用P/ACE MDQ毛細管電泳儀，在溫度25 ℃，電壓25 kV，進樣壓力3447. 4 Pa等條件下進樣，以3. 0×10-2 mol/L硼砂和1. 0×10-2 mol/L磷酸二氫鈉為電泳緩沖液，于218 nm波長處檢測紫外吸收強度，該方法的檢測限和定量限分別為5. 10×10-7 mol/L（0. 17 μg/mL）和1. 50×10-6 mol/L（0. 5 μg/mL），測得金針菇提取液樣品中NMN含量為8. 25×10-5 mol/L（27. 57 μg/mL），回收率為89%～94%。目前，在細胞生物大分子分析、細胞代謝和單細胞分析過程中，毛細管電泳已成為有效的工具之一［91］。

4 結論與展望

本文論述了NMN的抗衰老機制、在抗衰領域和醫(yī)療領域的應用以及目前存在的檢測方法。 在NMN的抗衰老機制中，其進入細胞的方式仍存在爭議，建議進一步研究其信號通路以揭示潛在的分子機制。考慮相關酶和轉(zhuǎn)運蛋白的特異性表達極其重要，或許能夠提供新的思路來開發(fā)一種更有效的抗衰老干預措施。在NMN治療領域，過去10多年間已經(jīng)進行了許多研究來探索NMN在相關疾病中的應用，在許多疾病中展現(xiàn)出良好的治療效果。 但大多數(shù)工作是在體外或動物模型中完成的，要想推動NMN治療的進一步發(fā)展，還需要進行全面的臨床實驗，探究NMN在人體內(nèi)的長期安全性和臨床療效。另外，在本文概述的多種NMN檢測方法中LC及LC-MS法的應用最廣，這些傳統(tǒng)的檢測方法還存在一定的局限性，具體表現(xiàn)在大多數(shù)方法仍處于實驗室研發(fā)階段，無法滿足復雜生化體系對檢測提出的更高要求。 因此，開發(fā)選擇性更好、靈敏度更高的痕量分析方法仍是未來NMN檢測領域的重要發(fā)展方向，電化學傳感器和表面增強拉曼散射傳感器可能成為該領域的新方向。 同時，未來應該加快NMN檢測國家標準的制訂，切實加強對相關商品的質(zhì)量監(jiān)管，為市場的穩(wěn)定發(fā)展以及人類的安全健康做出貢獻。

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