陳真陽

（中國醫(yī)藥保健品有限公司，北京 100101）

咖啡屬茜草科（Rubiaceae）咖啡屬（Coffea）多年生常綠灌木或小喬木，原產(chǎn)于非洲埃塞俄比亞，栽培較多的有小粒種（Coffea arabicaLinnaeus）、中粒種（Coffea canephoraPierre ex Froehner）和大粒種（Coffea libericahiern）[1]?？Х仁鞘澜缛箫嬃现?，藥理研究證明咖啡具有抗炎作用[2]，咖啡中所含的咖啡因具有緩解體力疲勞、增強(qiáng)免疫力作用[3-4]。但有關(guān)速溶咖啡粉對小鼠免疫功能的影響目前報(bào)道較少，因此本文對此進(jìn)行試驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 受試物

速溶咖啡粉是以咖啡豆為主要原料，經(jīng)焙烤、粉碎后用水萃取可溶物，再經(jīng)蒸發(fā)和干燥而得到的純咖啡?？Х纫蚝浚?%。速溶咖啡粉每日推薦量為每人每天2 g，按每人體重60 kg計(jì)算，折合劑量為0.0333 g·（kg bw）-1。

1.2 受試物配制

根據(jù)人體口服推薦劑量，設(shè)低、中、高3個(gè)劑量組，分別為0.167 g·（kg bw）-1、0.333 g·（kg bw）-1、1.000 g·（kg bw）-1（相當(dāng)于人體推薦劑量的5倍、10倍、30倍）。分別取樣品1.67 g、3.33 g、10.0 g加蒸餾水定容至200 mL，分別給小鼠灌胃，每天1次，灌胃體積0.2 mL/10 g bw，對照組給予等體積蒸餾水，連續(xù)灌胃至少30 d后測定指標(biāo)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物

SPF級雌性昆明種小鼠，18～22 g。按體重每40只小鼠為一大組，共5大組。免疫Ⅰ組：進(jìn)行碳廓清實(shí)驗(yàn)；免疫Ⅱ組：NK活性測定、ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)（MTT法）；免疫Ⅲ組：半數(shù)溶血值測定、抗體生成細(xì)胞數(shù)的測定（Jerne改良玻片法）；免疫Ⅳ組：遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)（DTH）（足跖增厚法）；免疫Ⅴ組：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)（半體內(nèi)法）。將5大組動物每大組再按體重隨機(jī)分成4小組，每組10只動物。

1.4 試劑與儀器

綿陽紅細(xì)胞（SRBC）、Hank’s液、小牛血清、生理鹽水和印度墨汁等試劑。

分析天平、分光光度計(jì)、恒溫水浴箱、離心機(jī)、CO2培養(yǎng)箱和酶標(biāo)儀等。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 細(xì)胞免疫功能檢測

遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）（足跖增厚法）、ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（MTT法），按《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）的規(guī)定進(jìn)行檢測[5]。

1.5.2 體液免疫功能檢測

含抗體生成細(xì)胞檢測（Jerne改良玻片法）、半數(shù)溶血值（HC50）的測定，按《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）的規(guī)定進(jìn)行檢測。

1.5.3 單核-巨噬細(xì)胞功能測定

含小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)（半體內(nèi)法），按《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）的規(guī)定進(jìn)行檢測。

1.5.4 NK細(xì)胞活性測定（乳酸脫氫酶測定法）

按《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）的規(guī)定進(jìn)行檢測。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用（x—±s）表示，應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和兩兩比較，P=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 速溶咖啡粉對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響

由表1可知，0.333 g·（kg bw）-1（中劑量組）、1.000 g·（kg bw）-1（高劑量組）小鼠足跖腫脹度顯著大于對照組，差異有顯著性（P＜0.05）。1.000 g·（kg bw）-1劑量組（高劑量組）能增加小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力，與對照組比較差異有顯著性（P＜0.05）。說明速溶咖啡粉對小鼠細(xì)胞免疫功能具有增強(qiáng)作用。

表1 對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響(x—±s)

2.2 速溶咖啡粉對小鼠體液免疫功能的影響

由表2可知，1.000 g·（kg bw）-1劑量組能增加小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)，與對照組相比差異有顯著性（P＜0.05）。1.000 g·（kg bw）-1劑量組能增加小鼠半數(shù)溶血值（HC50），與對照組相比差異有顯著性（P＜0.05）。說明速溶咖啡粉對小鼠體液免疫功能具有增強(qiáng)作用。

表2 對小鼠體液免疫功能的影響(x—±s)

2.3 速溶咖啡粉對單核-巨噬細(xì)胞功能的影響

由表3可知，0.167 g·（kg bw）-1、0.333 g·（kg bw）-1、1.000 g·（kg bw）-1劑量組對單核-巨噬細(xì)胞碳廓清能力未見明顯影響，與對照組相比差異無顯著性（P＞0.05）。0.167 g·（kg bw）-1、0.333 g·（kg bw）-1、1.000 g·（kg bw）-1劑量組對小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力未見明顯影響，與對照組比較差異無顯著性（P＞0.05）。說明速溶咖啡粉對單核-巨噬細(xì)胞功能無影響。

表3 對小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能的影響(x—±s)

2.4 速溶咖啡粉對小鼠NK細(xì)胞活性的影響

由表4可知，0.333 g·（kg bw）-1、1.000 g·（kg bw）-1劑量組能增加NK細(xì)胞活性，與對照組比較差異有顯著性（P＜0.05）。說明速溶咖啡粉對小鼠NK細(xì)胞活性具有增強(qiáng)作用。

表4 對小鼠NK細(xì)胞活性的影響(x—±s)

3 結(jié)論

根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）中的規(guī)定，在受試樣品低、中、高這3個(gè)劑量組中，應(yīng)設(shè)一個(gè)10倍劑量組（以人每日每公斤體重推薦攝入量計(jì)算），高劑量不得超過30倍。故本研究以人每日日推薦攝入量的5倍、10倍、30倍劑量連續(xù)給予小鼠灌胃速溶咖啡粉30 d，結(jié)果顯示速溶咖啡粉對小鼠具有一定的增強(qiáng)免疫力作用，為速溶咖啡粉的配方應(yīng)用提供了依據(jù)。