趙春霞，印洪林，李杏娟，陳柿妗

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬明基醫(yī)院病理科，江蘇 南京 210000)

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤，在全部惡性腫瘤中，其發(fā)病率居于第五位，死亡率居于第三位[1]。胃癌具有侵襲性高、易復(fù)發(fā)、預(yù)后差的特點(diǎn)，其發(fā)生發(fā)展涉及多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、多因素、多步驟過程[2]。微小RNA(microRNA，miRNA，miR)是一種約有9～25個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編碼RNA，在生物體內(nèi)廣泛存在，參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡調(diào)控等多種生物學(xué)過程，以及與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。近年研究[3-4]發(fā)現(xiàn)，腫瘤組織中普遍存在著miRNA的差異表達(dá)，其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展緊密關(guān)聯(lián)，其中miR-183、miR-675在乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、肝癌等多種腫瘤中高表達(dá)，對于腫瘤的診治及預(yù)后判斷有重要作用[5-6]。但目前關(guān)于miR-183、miR-675在胃癌中表達(dá)及其預(yù)后價(jià)值的研究報(bào)道尚少。本研究旨在探討胃癌組織中miR-183、miR-675水平及其預(yù)后價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2019年12月南京醫(yī)科大學(xué)附屬明基醫(yī)院收治接受手術(shù)切除的胃癌患者96例為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)經(jīng)組織病理學(xué)證實(shí)為胃癌；(2)行標(biāo)準(zhǔn)胃癌根治術(shù)；(3)術(shù)前未接受任何新輔助治療；(4)病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并嚴(yán)重肝腎疾病者；(2)伴其他類型惡性腫瘤者；(3)非胃癌相關(guān)性死亡者；(4)隨訪等數(shù)據(jù)缺失者。標(biāo)本的獲取符合醫(yī)院倫理委員會規(guī)定，并得到批準(zhǔn)，同時(shí)取得患者或家屬的知情同意。

1.2 方法

1.2.1 qRT-PCR法檢測miR-183、miR-675的表達(dá) 收集患者胃癌組織與癌旁正常組織(距癌組織邊緣>3cm)，利用TRIzol法進(jìn)行總RNA的提取，采用分光光度計(jì)進(jìn)行總RNA濃度及純度的檢測，按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(德國Qiagen公司)說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)DNA，置于-20 ℃環(huán)境下保存。取總RNA 2 μg，采用熒光定量PCR儀(德國Qiagen公司)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測。miR-183上游引物序列：5′-CCCGGGCTTGTCTTTTGTT-3′，下游引物序列：5′-GAGTGGGTGGCTCACTCTTCTG-3′；miR-675上游引物序列：5′-TCCCTGAACCACTCCACTGC-3′，下游引物序列：5′-GACAGTGATGGTCAGAGTGAAGC-3′；反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s，95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)。以U6作為內(nèi)參，數(shù)據(jù)處理采用2-ΔCt法，計(jì)算miR-183、miR-675的相對表達(dá)量。

1.2.2 分組 采用受試者工作特征曲線(ROC)確定miR-183、miR-675的臨界值，當(dāng)miR-183相對表達(dá)量為1.89和miR-675相對表達(dá)量為3.12時(shí)，此時(shí)約登指數(shù)最大。以miR-183、miR-675最佳臨界點(diǎn)為1.89和3.12，將96例患者分為miR-183低表達(dá)(<1.89)組(n=46)與miR-183高表達(dá)(≥1.89)組(n=50)和miR-675低表達(dá)(<3.12)組(n=41)與miR-675高表達(dá)(≥3.12)組(n=55)。

1.2.3 隨訪及生存分析 患者隨訪均采用門診結(jié)合電話的方式進(jìn)行，術(shù)后兩年內(nèi)每3個(gè)月進(jìn)行1次，兩年以后每6個(gè)月進(jìn)行1次，隨訪截止至2021年12月31日?？偵鏁r(shí)間(OS)是指患者術(shù)后當(dāng)天開始至患者死亡或者隨訪截止日期所經(jīng)歷的時(shí)間。無進(jìn)展生存時(shí)間(DFS)定義為術(shù)后當(dāng)天開始到局部復(fù)發(fā)/遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或死亡或隨訪截止日期所經(jīng)歷的時(shí)間。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組miR-183、miR-675相對表達(dá)量比較

相比于癌旁正常組織，胃癌組織miR-183、miR-675均呈高表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組miR-183、miR-675相對表達(dá)量比較

2.2 胃癌組織中miR-183、miR-675表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

胃癌組織miR-183、miR-675表達(dá)與TNM分期、是否有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(P<0.05)，而與年齡、性別、腫瘤最大徑、分化分級等無相關(guān)性(P>0.05)。見表2。

表2 胃癌組織miR-183、miR-675表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系[n(%)]

續(xù)表2

2.3 胃癌組織miR-183、miR-675表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

Kaplan-Meier分析顯示，miR-183高表達(dá)胃癌患者OS為(33.49±4.82)個(gè)月，DFS為(27.91±4.78)個(gè)月，低表達(dá)組患者OS為(58.14±5.36)個(gè)月，DFS為(54.12±5.17)個(gè)月，兩組組間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

miR-675高表達(dá)胃癌患者OS為(34.26±4.79)個(gè)月，DFS為(29.11±5.06)個(gè)月，低表達(dá)組患者OS為(56.89±5.13)個(gè)月，DFS為(52.79±4.87)個(gè)月，兩組組間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1-圖4。

3 討論

盡管近年來胃癌的治療手段得到了很大進(jìn)步，特別是術(shù)前新輔助治療技術(shù)及靶向治療在臨床的廣泛應(yīng)用，胃癌患者的生存期得到了改善，但胃癌的死亡率仍較高，手術(shù)切除后仍易出現(xiàn)復(fù)發(fā)。為提高胃癌患者治療效果和延長患者生存期，治療新的靶點(diǎn)和策略研究勢在必行，同時(shí)早期準(zhǔn)確預(yù)測胃癌預(yù)后并指導(dǎo)個(gè)體臨床治療決策尤為關(guān)鍵。既往研究[7-8]顯示，miRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中有著至關(guān)重要的作用，甚至有成為靶向治療靶點(diǎn)的趨勢。本研究結(jié)果表明，miR-183、miR-675在胃癌組織中均呈高表達(dá)，具有預(yù)后預(yù)測價(jià)值。

miRNA作為一種內(nèi)源性非編碼小RNA，可能參與惡性腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)行為，是腫瘤生物標(biāo)志物和潛在靶點(diǎn)。近年研究[9]也揭示miRNA在胃腸道腫瘤中的表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)癌組織與癌旁組織表達(dá)譜存在差異。miR-183是一種進(jìn)化上保守的miRNA成員，參與脂肪前體細(xì)胞分化、成熟以及腫瘤發(fā)生過程。Li等[10]研究報(bào)道，miR-183在腸型胃癌中表達(dá)上調(diào)。Gu等[11]認(rèn)為，miR-183可通過靶蛋白所介導(dǎo)的，其表達(dá)上調(diào)能夠引起LRIG1 mRNA沉默，下調(diào)抑癌基因LRIG1及其蛋白表達(dá)，使得癌基因與抑癌基因平衡遭到破壞，引起細(xì)胞增殖失衡，從而促進(jìn)腫瘤增殖。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織miR-183表達(dá)水平高于癌旁正常組織，且miR-183高表達(dá)胃癌患者TNM分期為III+IV期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比例均高于低表達(dá)組，提示miR-183可能參與了胃癌的發(fā)生發(fā)展，其檢測有助于預(yù)測胃癌患者病情。

近年研究[12-14]發(fā)現(xiàn)，miR-675在食管癌、胃癌和肺癌中均存在異常表達(dá)。研究[15]報(bào)道，食管癌組織中miR-675相對表達(dá)量高于癌旁正常組織，下調(diào)miR-675表達(dá)對食管癌細(xì)胞的增殖有抑制作用。還有研究[16]顯示，miR-675能夠通過激活NF-κB信號而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。本研究中，96例胃癌組織miR-675表達(dá)水平高于癌旁組織，提示miR-675可能作為一種癌基因在胃癌發(fā)生過程中扮演著重要角色。另外本研究發(fā)現(xiàn)，miR-675高表達(dá)組TNM分期為III+IV期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比例均高于低表達(dá)組，進(jìn)一步說明miR-675可能促進(jìn)了胃癌的發(fā)生發(fā)展，可能成為胃癌治療的靶點(diǎn)。本研究進(jìn)一步探討胃癌組織miR-183、miR-675表達(dá)與生存期的關(guān)系，探討二者的預(yù)后預(yù)測價(jià)值。結(jié)果顯示，miR-183、miR-675高表達(dá)胃癌患者OS、DFS，均分別短于miR-183、miR-675低表達(dá)胃癌患者，提示miR-183、miR-675高表達(dá)胃癌患者有著較差預(yù)后，對胃癌預(yù)后判定有參考價(jià)值。

綜上，胃癌組織中miR-183、miR-675表達(dá)上調(diào)，其可能與胃癌的發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后緊密關(guān)聯(lián)，對胃癌預(yù)后判定有一定價(jià)值，并有望成為靶向治療的潛在靶點(diǎn)。