劉亞方　張治云　姜鷹雁　國(guó)璐路　楊琪

摘要：目的 建立一種高效液相色譜法定量檢測(cè)雞精中谷氨酸鈉含量的方法。方法 采用Ultimate XB-NH₂色譜柱，柱溫35 ℃;以0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)pH至3.3）-乙腈為流動(dòng)相，流速：2.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm。結(jié)果 谷氨酸鈉濃度在50.36～2014.40 ?g/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0.9997），平均加樣回收率為99.71 %，RSD為1.18 %（n=9），檢出限為15.11 μg/ml。結(jié)論 該方法操作簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高，可用于雞精中谷氨酸鈉的定量檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;谷氨酸鈉;雞精;含量測(cè)定

谷氨酸鈉，化學(xué)名α-氨基戊二酸一鈉，是雞精中的主要呈味劑，是反映產(chǎn)品鮮度的主要物質(zhì)^[1]，因此研究雞精中谷氨酸鈉含量測(cè)定方法具有一定的實(shí)用價(jià)值。谷氨酸鈉含量測(cè)定可采用高氯酸滴定法、旋光法、酸度計(jì)法和凱氏定氮法^[2-4]，但雞精中除含有谷氨酸鈉外，成分中還含有食鹽、白砂糖、香精等添加劑，由于干擾物質(zhì)較多，采用上述檢測(cè)方法測(cè)定其谷氨酸鈉專屬性差。本文采用HPLC法對(duì)雞精中的谷氨酸鈉進(jìn)行分離檢測(cè)，可有效消除產(chǎn)品中各添加劑的干擾，準(zhǔn)確定量，專屬性強(qiáng)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters e2695高效液相色譜儀;Mettler-Toledo XS205電子分析天平;Mettler-Toledo Seven Excellence pH計(jì)。

1.2 試藥

L-谷氨酸單鈉鹽一水合物（Sigma-Aldrich）;磷酸二氫鉀（分析純）;磷酸（優(yōu)級(jí)純）;乙腈（色譜純）;鹽酸（分析純）;水為超純水。雞精：品牌A，B，C均為市售產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Ultimate XB-NH₂（4.6×250 mm，5 ?m）;流動(dòng)相：0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)pH至3.3）-乙腈（27：73）;流速：2.0 ml/min;柱溫：35 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm;進(jìn)樣體積：10 ?l。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取谷氨酸鈉202.86 mg置100 ml量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液;精密量取上述貯備液2.5 ml置10 ml量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻。

2.2.3 供試品溶液 取雞精25 mg，精密稱定，置25 ml量瓶中，加溶劑適量，超聲10 min，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，用濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液備用。

2.2.4 溶劑 0.1 mol/L鹽酸溶液。

2.3專屬性研究

分別精密量取溶劑和對(duì)照品溶液各10 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。試驗(yàn)結(jié)果表明，空白溶液無(wú)干擾峰，表明本法專屬性強(qiáng)。

2.4 線性和范圍

精密量取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液0.25，1.0，2.5，1，1.5，2.0 ml分別置10 ml量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為線性溶液，依法測(cè)定，記錄色譜圖。以峰面積A對(duì)濃度C繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=164.39X-1298.6（r=0.9997）。結(jié)果表明，谷氨酸鈉在50.36～2014.40 ?g/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 定量限和檢出限

定量限：精密量取“2.2.2”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 ml置10 ml量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，依法測(cè)定，所得谷氨酸鈉峰信噪比約為10：1，即谷氨酸鈉定量限為50.36 μg/ml。該濃度溶液連續(xù)測(cè)定6次峰面積RSD為2.53 %。

檢出限：精密量取定量限溶液3.0 ml置10 ml量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，依法測(cè)定，所得谷氨酸鈉峰信噪比約為3：1，即谷氨酸鈉檢出限為15.11 μg/ml。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

按“2.2.3”項(xiàng)下方法配制6份A品牌雞精供試品溶液，依法測(cè)定谷氨酸鈉含量，結(jié)果谷氨酸鈉含量的平均值為44.68 %，RSD為0.91 %，表明方法測(cè)定樣品的重復(fù)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn)

取9只25 ml量瓶，分別精密加入A品牌雞精12mg，平均分為3組，取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品貯備液，第一組加入2.5 ml，第二組加入3.75 ml，第三組加入5.0 ml，分別加空白溶液適量，超聲10 min，并用溶劑稀釋至刻度，搖勻，用濾膜過(guò)濾，依法測(cè)定，，計(jì)算谷氨酸鈉回收率。結(jié)果表明，谷氨酸鈉的平均回收率為99.71 %，RSD為1.18 %，表明該方法準(zhǔn)確度良好。

2.8 樣品測(cè)定

取3種市售雞精樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下分別配制3份供試品溶液，依法測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品溶液中谷氨酸鈉含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

谷氨酸鈉分子結(jié)構(gòu)中含有氨基和羧基，屬于兩性化合物，極性較大，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，曾嘗試采用不同色譜柱進(jìn)行分離，結(jié)果谷氨酸鈉均流出較快，與溶劑峰不能完全分離，不能準(zhǔn)確定量。氨基柱以氨基丙基硅烷鍵合硅膠為填充劑，適合于測(cè)定極性較大的化合物，本文采用氨基柱對(duì)雞精中谷氨酸鈉進(jìn)行分離，得到了理想的結(jié)果。在供試品溶液制備過(guò)程中，分別采用不同溶液進(jìn)行提取，結(jié)果顯示溶劑用水和流動(dòng)相時(shí)，所得谷氨酸鈉峰拖尾嚴(yán)重，采用0.1 mol/L鹽酸溶液進(jìn)行提取，所得谷氨酸鈉峰對(duì)稱性良好，回收率高，最終確定溶劑為0.1 mol/L鹽酸溶液。文中建立的檢測(cè)方法，采用常規(guī)流動(dòng)相洗脫，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，無(wú)需進(jìn)行衍生化處理，操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確度高，可用于雞精中谷氨酸鈉的定量檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)：

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