李朝國　張麗娜

革蘭氏陰性菌是目前我國生活飲用水、食品等樣品中最常檢出的致病菌，在與人體接觸后可導(dǎo)致感染發(fā)生，引起多種疾病，對身體健康造成嚴(yán)重影響。其中，布氏菌較為常見，可在被病畜污染的生活飲用水及肉、奶等食品中檢出。而加強(qiáng)對布氏菌的檢驗(yàn)則能夠有效控制多種急慢性疾病的發(fā)生，包括睪丸炎、骨髓炎、脊柱炎等疾病。那么，什么是布氏菌呢？又如何提高布氏菌的檢驗(yàn)準(zhǔn)確率呢？本文就針對這一話題進(jìn)行分析。

什么是布氏菌？

布氏菌是一類革蘭氏陰性的短小桿菌，多容易感染牛、豬、羊等動物，引起母畜感染性流產(chǎn)等。那么，人類接觸帶菌動物、食用病畜及其乳制品是否會發(fā)生感染呢？那當(dāng)然是肯定的，人類一旦接觸到上述物品均可被感染。實(shí)際上，我國部分地區(qū)曾經(jīng)發(fā)生過流行，但目前已經(jīng)得到控制。

布氏菌是帝國主義者列為失能性生物戰(zhàn)劑之一，其中布氏菌屬可分為羊、牛、豬、鼠、綿陽以及犬布氏菌六個種類，具備20個生物型，而在我國主要流行的是羊、牛以及豬三種布氏菌，其中以羊布氏菌最為常見。

布氏菌多數(shù)情況下主要是感染家畜，而家畜的臨床癥狀并不會十分明顯，而在人類接觸到污染的家畜、奶、肉等物質(zhì)時，則可直接被感染，大多數(shù)患者以青壯年為主。該種細(xì)菌能夠在進(jìn)入人體后被吞噬細(xì)胞吞噬，術(shù)后進(jìn)入淋巴結(jié)，有時可在體內(nèi)存活并形成感染灶，在感染后的2～3周會直接進(jìn)入到血液循環(huán)中產(chǎn)生菌血癥，并持續(xù)對人體的骨髓、肝、脾等造成感染，形成新的感染病灶。

那么，在感染布氏菌后可能發(fā)生那些改變呢？臨床經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，急性感染病變大多數(shù)患者在發(fā)生布氏菌感染后通?？沙霈F(xiàn)急性感染表現(xiàn)，主要以波浪狀發(fā)燒為主要特征，發(fā)燒時間大約可在2～3周左右，隨即1～2周無發(fā)燒癥狀，隨后再次出現(xiàn)發(fā)燒。感染后多數(shù)患者可見多汗、頭痛、乏力、游走性關(guān)節(jié)痛等癥狀。但部分患者在全身癥狀消退后才可能出現(xiàn)局部癥狀。同時，受到布氏菌的感染影響，可累及患者腰椎位置，出現(xiàn)持續(xù)性腰背痛癥狀，伴有肌肉痙攣、活動受限等。更有患者常發(fā)生坐骨神經(jīng)痛等癥狀，檢查可見局部壓痛或叩痛，少數(shù)患者于髂窩處可觀察到膿腫包塊，產(chǎn)生硬膜外膿腫壓迫脊髓及神經(jīng)根，出現(xiàn)感覺、運(yùn)動障礙等，伴有肝、脾腫大，區(qū)域性淋巴結(jié)腫大表現(xiàn)。

慢性感染患者主要以多處關(guān)節(jié)病變?yōu)槌Ｒ姳憩F(xiàn)，大多數(shù)發(fā)生在腰椎位置，小部分患者在胸椎位置，同時在胸腰段、骶椎或骶髂關(guān)節(jié)位置。男性患者可伴有睪丸腫大、睪丸炎癥等疾病，慢性布氏菌感染者具備自愈的特征，但自愈的時間較長。

為了保障人民群眾的身體健康則需要加強(qiáng)布氏菌的監(jiān)測，防治被布氏菌感染的家畜的肉、奶等食品流入市場。那么，布氏菌的檢驗(yàn)方式有哪些呢？

布氏菌的檢驗(yàn)方式

布氏菌目前能夠選擇準(zhǔn)確的檢驗(yàn)方式為病原學(xué)檢查，而病原學(xué)檢查又可分為抹片檢查以及離培養(yǎng)鑒定。

抹片檢查

抹片檢查是指取需檢查的畜胚胎絨毛葉組織、流產(chǎn)胎兒胃液、分泌物等作為抹片，并使用改良的齊爾-尼爾森石碳酸復(fù)紅原液（堿性復(fù)紅1 g，溶于10 ml純乙醇中，加入90 ml5%的石炭酸水溶液，混勻即成）的110稀釋液染色10 min，用0.5%醋酸溶液脫色20 s，沖洗后，用1%美藍(lán)復(fù)染20 s，鏡檢。布氏桿菌染成紅色，背景為藍(lán)色。布氏桿菌大部分在細(xì)胞內(nèi)，集結(jié)成團(tuán)，少數(shù)在細(xì)胞外。衣原體和胎兒弧菌也引起流產(chǎn)，在抹片中也染成紅色，但形態(tài)與布氏桿菌不同，可用作區(qū)別鑒定。

分離培養(yǎng)鑒定

目前檢驗(yàn)中認(rèn)為，分離培養(yǎng)鑒定是診斷布氏菌最可靠的方式之一，只需要從病羊體內(nèi)或排出物中發(fā)現(xiàn)病原體即可確診。但由于患病動物身體狀態(tài)、感染時期和發(fā)病過程等原因，往往不易檢查出病原。因此，在進(jìn)行分離培養(yǎng)時，應(yīng)選擇適宜時機(jī)（如產(chǎn)后），采取適宜病料（如胎兒和產(chǎn)后排出物及病羊的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞等），用適宜培養(yǎng)基分離培養(yǎng)才能成功。一般是將被檢材料接種于兩個同樣的選擇培養(yǎng)基（每100 ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基，如血清葡萄糖瓊脂、血清馬鈴薯浸液瓊脂、胰酶消化蛋白胨瓊脂、血清馬丁湯瓊脂中加入抑菌藥物，放線菌酮10 mg，桿菌肽25單位，多黏菌素（B6單位）平板，1個置10%二氧化碳（CO2）環(huán)境37℃培養(yǎng)，1個置普通溫箱37℃培養(yǎng)，逐日觀察，通常在3～10天可出現(xiàn)生長，然后移植于血清葡萄糖瓊脂純化。

如符合下述全部條件，可認(rèn)為是布氏桿菌屬的細(xì)菌：細(xì)小的革蘭氏陰性球桿菌，無芽胞、莢膜和鞭毛，不運(yùn)動，需氧，接觸酶陽性，糖發(fā)酵，甲基紅試驗(yàn)（MR），維培試驗(yàn)（VP），吲哚、檸檬酸鹽利用等反應(yīng)均為陰性，光滑型菌落能與布氏桿菌陽性血清凝集，粗糙型菌落能與布氏桿菌R血清凝集。

為什么分離培養(yǎng)鑒定是最準(zhǔn)確的檢驗(yàn)方式呢？這主要是由于布氏菌屬于需氧菌，因此在初次分離時需要在5%～10%的CO2環(huán)境中才能生長，并選擇最適合的溫度37℃、最適宜的pH值為6.6～7.1，其對營養(yǎng)的要求較高，同時在生長是需要硫胺素、生物素、煙草酸、泛酸鈣等，而試驗(yàn)中常使用的肝浸液培養(yǎng)基以及改良厚氏培養(yǎng)基均符合布氏菌的生長需求，明顯提高了布氏菌的檢出準(zhǔn)確率。

另外，需要注意的是，人體患病后可產(chǎn)生免疫力，在不同菌種與生物型之間又存在交叉免疫，布氏菌多以細(xì)胞內(nèi)寄生為主，抗體不易直接發(fā)揮作用，因此多選擇診斷細(xì)胞免疫以提高診斷準(zhǔn)確率。

結(jié)語

布氏菌是一種可引起急性、慢性疾病的革蘭氏陰性桿菌。布氏菌病是人畜共患疾病，對人體健康危害較大，通過分離培養(yǎng)鑒定可以明顯提高檢出率，做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，及早清除病畜，以免引發(fā)感染流行，造成更大財(cái)產(chǎn)損失，對保護(hù)人類生命財(cái)產(chǎn)安全具有重大的意義。