張 飛,劉利芳,劉曉華,王建國,韓 霜,聶妙蘭

(內(nèi)蒙古鴻茅藥業(yè)有限責任公司,內(nèi)蒙古 烏蘭察布 013750)

鴻茅健酒由紅景天、藏紅花、天麻、人參、枸杞子、山藥、茯苓、桑椹、黃精、覆盆子10味蒙中藥材經(jīng)提取、濃縮、調(diào)配制成的酒劑,為保持處方中蒙中藥材質(zhì)量、提取工藝穩(wěn)定、產(chǎn)品質(zhì)量一致性,采用以水飽和正丁醇萃取法測定鴻茅健酒總皂苷含量,作為評價該產(chǎn)品的質(zhì)量指標。

1 實驗器材

1.1 儀器

分析天平(型號XPR10)梅特勒;紫外/可見分光光度計 (型號756)上海奧普勒儀器有限公司; 離心機(型號TG16-Ⅱ)長沙平凡儀器儀表有限公司。

1.2 試劑與試藥

人參皂苷Re(批號110754-201827)中國食品藥品檢定研究院提供; Amberlite-XAD-2 大孔樹脂(批號XAD-2-9003)BIOSZUNE LIFE SCIENCES DEP;其他試劑均為分析純。

1.3 供試品

鴻茅健酒(批號:20180401;20190601;20200401;20200402;20200403;20200901)鴻茅藥業(yè)提供。

2 顯色原理

總皂苷在高氯酸的作用下與香草醛反應,產(chǎn)生特征的紫紅色,在560 nm波長處有最大吸收。

3 實驗方法

3.1 提取方法的選擇

3.1.1 大孔樹脂柱層析法

樣品前處理:精密吸取樣品10.0 mL,置水浴上揮盡乙醇后,用水轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中,并用水稀釋至刻度,樣品液備用。

層析柱制備:用10 mL注射器作層析管,內(nèi)裝3cm大孔樹脂,上加1 cm中性氧化鋁。先用25 mL 70%乙醇洗柱,棄去洗脫液,再用約25 mL水洗脫至無醇味,棄去洗脫液。

供試品制備與測定:向制備好的層析柱內(nèi)加入處理后的樣品液0.5 mL,用25 mL水洗柱,棄去洗脫液,再用25 mL或以上70%乙醇洗脫人參皂苷至洗脫液無色,收集洗脫液于蒸發(fā)皿中,置于60℃水浴揮干,殘渣用少量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL具塞比色管中,置水浴中揮干溶劑,加入0.2 mL香草醛冰乙酸溶液,再加入0.8 mL高氯酸,混勻,使溶解,置60℃水浴中加熱10 min,取出,立刻冰浴冷卻,加入5.0 mL冰乙酸,搖勻后,在紫外/可見分光光度計掃描。

3.1.2 水飽和正丁醇萃取法:

供試品溶液制備:精密吸取樣品10.0 mL,置水浴蒸至近干,用15mL水溶解并水轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,分別加入20 mL水飽和正丁醇萃取,分取正丁醇液(必要時可離心),重復萃取3次,合并正丁醇液用20 mL氨試液洗滌2次,棄去氨試液,正丁醇液水浴蒸干,殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中,加甲醇定容至刻度,搖勻,即得。

顯色與測定:分別精密吸取供試品溶液0.5mL,二份,分別置于10 mL納氏比色管中,置水浴中揮干溶劑,其中一份加入0.2 mL香草醛冰乙酸溶液,再加入0.8 mL高氯酸,混勻,使溶解,另一份加入1.0mL高氯酸,混勻,使溶解,兩管同時置60℃水浴中加熱10 min,取出,立刻冰浴冷卻,加入5.0 mL冰乙酸,搖勻后,在紫外/可見分光光度計掃描。

圖1 兩種提取方法與對照品掃描圖

3.2 結(jié)論

大孔樹脂柱層析法制備樣品顯色后與標準品顯色后顏色不一致,水飽和正丁醇萃取法制備樣品顯色后與標準品顯色后顏色基本一致并且在560nm處有相同的吸收峰,因此,選擇采用水飽和正丁醇萃取法。

4 方法學考察

4.1 線性范圍

吸取人參皂苷Re標準溶液(2.4mg/mL)0 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL、1.2 mL于10 mL具塞比色管中,置水浴中揮干溶劑,加入0.2 mL香草醛冰乙酸溶液,再加入0.8 mL高氯酸,混勻,使溶解,置60℃水浴中加熱10 min,取出,立刻冰浴冷卻,加入5.0 mL冰乙酸,搖勻后,于560 nm波長處測定吸光度,結(jié)果顯示:以吸光度為橫坐標,以人參皂苷Re的質(zhì)量(mg)為縱坐標,繪制標準曲線,人參皂苷Re在0.096mg～0.288mg之間,呈良好的線性關系。詳見表1和圖2。

表1 標準曲線試驗結(jié)果

圖2 人參皂苷Re標準曲線

4.2 重復性試驗

取樣品6份,按3.1.2制備供試液并顯色與測定,記錄吸光度,從標準曲線讀取對應的量(mg)。

樣品中總皂苷的含量(以人參皂苷Re計),按式計算,結(jié)果表明,在規(guī)定條件下6次測定結(jié)果的相對標準偏差(RSD%)為3.3%,認為測定方法較穩(wěn)定,重復性良好。詳見表2。

式中:

Xi——樣品中總皂苷的含量(以人參皂苷Re計),單位為毫克每百毫升(mg/100mL);

Ci——由標準曲線得出被測液中人參皂苷Re的量,單位為毫克(mg);

V——被測定樣液的定容體積,單位為毫升(mL);

V0——被測定樣液的顯色體積,單位為毫升(mL);

m——樣品的取樣體積,單位為毫升(mL);

100——單位轉(zhuǎn)換。

4.3 樣品測定

取不同批號樣品,按4.2方法測定、計算,結(jié)果詳見表3。

表2 重復性試驗結(jié)果

表3 不同批次樣品測定結(jié)果

5 討論

5.1 鴻茅健酒中的總皂苷比較穩(wěn)定,兩年之內(nèi)的產(chǎn)品總皂苷含量勻大于48mg/100mL,可以作為評價該產(chǎn)品的質(zhì)量指標之一。

5.2 本比色法是樣品萃取蒸干后顯色測定。由于鴻茅健酒的顏色較深,為消除其它組分顏色的干擾,采用不加入0.2 mL香草醛冰乙酸溶液作為空白,可以有效地解決其它組分顏色在560nm處有吸收干擾的問題。