王發(fā)英 吳查青 陳張金 劉敏 余華麗 王偉影

(麗水市質(zhì)量檢驗(yàn)檢測研究院，浙江 麗水 323000)

麝香壯骨膏是由八角茴香、山柰、生川烏、生草烏、麻黃、白芷、蒼術(shù)、當(dāng)歸和干姜提取而制成浸膏、再取麝香、薄荷腦、水楊酸甲酯、豹骨、硫酸軟骨素、冰片、鹽酸苯海拉明與樟腦八味藥物組成的一種外用橡膠膏劑，具有鎮(zhèn)痛、消炎的功效，臨床上用于風(fēng)濕痛、關(guān)節(jié)痛、腰痛、神經(jīng)痛、肌肉酸痛、扭傷和挫傷[1]。通過國家局網(wǎng)站批準(zhǔn)文號查詢，全國范圍內(nèi)麝香壯骨膏的生產(chǎn)企業(yè)共58家，批準(zhǔn)文號61個?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)有《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十一冊[2]和國家食品藥品監(jiān)督管理總局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-2268-96-2[3]。本文擬通過法定標(biāo)準(zhǔn)與含量測定(樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯和鹽酸苯海拉明)對市售麝香壯骨膏進(jìn)行質(zhì)量調(diào)研，為麝香壯骨膏的質(zhì)量評價(jià)與臨床應(yīng)用提供參考數(shù)據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Agilent7890B氣相色譜儀；H-Class Waters超高效液相色譜儀；XS105DU、XS104電子天平(瑞士梅特勒公司)；UNE400自然對流烘箱(德國Memmert公司)、Milli-Q Advantage A10超純水儀。

1.2試劑 樟腦對照品(批號：110747-201409)、薄荷腦對照品(批號：110728-200506)、冰片對照品(批號：110743-200905)、水楊酸甲酯對照品(批號：110707-201112)、萘對照品(批號：111673-200803)、鹽酸苯海拉明對照品(批號：100066-200807)、烏頭堿對照品(批號：110720-201111)，均購自中國食品藥品檢定研究院；乙酸乙酯(色譜純，上海展云化工有限公司)；甲醇(色譜純，默克)，其余試劑均為分析純，水為自制超純水。

麝香壯骨膏，市場隨機(jī)購入50批次，涉及20家生產(chǎn)企業(yè)，生產(chǎn)企業(yè)所在省市包括浙江、安徽、江西、海南、吉林、桂林、江蘇、重慶、河南、湖北、湖南、山東等地，具有一定的地域差異性，樣品具有良好代表性。樣品信息見表1。

表1 麝香壯骨膏基本信息

2 方法與結(jié)果

2.1法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn) 現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十一冊，檢驗(yàn)項(xiàng)目包括性狀、含膏量、耐熱性和微生物限度；現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)國家食品藥品監(jiān)督管理總局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-2268-96-2(樣品中僅公司F執(zhí)行此標(biāo)準(zhǔn))，比《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十一冊多了樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯氣相色譜鑒別，鹽酸苯海拉明薄層鑒別，樟腦、水楊酸甲酯、鹽酸苯海拉明的含量測定和烏頭堿限量的薄層檢查。按照法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，50批樣品均符合所執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，合格率為100%，其中含膏量結(jié)果見表2和圖3。

2.2含量測定 鹽酸苯海拉明(高效液相色譜法)。

2.2.1色譜條件[4-9]Agilent Zorbax XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱 (美國安捷倫公司)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：258 nm；流動相：甲醇-1%硫酸銨水溶液(47∶53)；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2.2對照品溶液的制備 取鹽酸苯海拉明對照品適量，精密稱定，加80%甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備 取樣品70 cm2，除去蓋襯，剪成條狀，精密加入80%甲醇25 mL，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.4系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取“2.2.2、2.2.3”項(xiàng)下溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1。由圖1可見，在該色譜條件下，鹽酸苯海拉明與相鄰雜質(zhì)峰均達(dá)到良好分離，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)均在10000以上，具有良好的分離效果。

圖1 HPLC圖

2.2.5樣品含量測定 取公司F生產(chǎn)的6批次樣品，其他生產(chǎn)企業(yè)各1批，總共25批樣品，各平行2份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算鹽酸苯海拉明的含量，結(jié)果見表2和圖4。

2.3含量測定 樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯(氣相色譜法)。

2.3.1色譜條件[10-16]phenomen ZB-WAX毛細(xì)管柱，0℃～250℃(250℃):60 m×320 μm×0.5 μm；檢測器：FID；進(jìn)樣口溫度：220 ℃；檢測器溫度：250 ℃；柱溫：150 ℃，維持23 min；流速：1.5 mL·min-1；進(jìn)樣量：2 μL；分流比：15∶1。

2.3.2內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取萘適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1 mL含5.000mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3.3混合對照品貯備液的配制 精密稱取樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯對照品適量,加乙酸乙酯溶解，配制成每1 mL含各對照品分別為5.2850 mg，5.4750 mg，5.2750 mg， 6.2000 mg的混合液，搖勻，作為混合對照品貯備液。

2.3.4供試品溶液的配制 取本品175 cm2，除去蓋襯，剪成條狀，置250 mL燒瓶中，加水100 mL，照揮發(fā)油測定法，自測定器上端加水充滿刻度部分，并溢流入燒瓶為止，再加甲苯2 mL，加熱回流3 h，放冷，將揮發(fā)油測定器中的液體轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，分取有機(jī)溶劑層，置預(yù)先精密加入5 mL內(nèi)標(biāo)溶液的25 mL量瓶中，以適量乙酸乙酯分次洗滌冷凝管、揮發(fā)油測定器及分液漏斗，洗滌液并入上述量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3.5系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 精密量取混合對照品貯備液與內(nèi)標(biāo)溶液適量，加乙酸乙酯稀釋至一定的濃度，分別精密吸取上述溶液與供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖2。由圖2可見，在該色譜條件下，樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯、萘與其他成分可達(dá)到基線分離，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)均在50000以上，具有良好的分離效果。

圖2 GC圖

2.3.6線性關(guān)系考察 精密量取混合對照品貯備液0.5，1.0，2.0，4.0，8.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，各精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，以各峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比為縱坐標(biāo)(Y)，待測物濃度為橫坐標(biāo)(X，mg·mL-1)進(jìn)行線性回歸，得樟腦回歸方程為Y=0.7297X+0.0199，r=0.9999，薄荷腦回歸方程為Y=0.7005X+0.0459，r=0.9998，冰片回歸方程為Y=0.7516X+0.0041，r=0.9999，水楊酸甲酯回歸方程為Y=0.4627X-0.0021，r=0.9998。結(jié)果表明：在樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯分別在0.261～4.172 mg·mL-1、0.274～4.380 mg·mL-1、0.258～4.136 mg·mL-1、0.309～4.944 mg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.7方法學(xué)考察 經(jīng)精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性及加樣回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果均符合《中國藥典》收載的“藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”的要求。

2.3.8回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的麝香壯骨膏(編號39)，共6份，各取本品90 cm2，除去蓋襯，剪成條狀，置250 mL燒瓶中，濃度為樟腦8.943 mg·mL-1、薄荷腦12.98 mg·mL-1、冰片10.85 mg·mL-1、水楊酸甲酯9.168 mg·mL-1的混合對照品溶液1 mL，按“2.3.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果其回收率平均值依次為樟腦97.12%(RSD=1.37%，n=6)、薄荷腦97.02%(RSD=1.35%，n=6)、冰片96.89%(RSD=1.24%，n=6)、水楊酸甲酯96.45%(RSD=1.46%，n=6)。

2.3.9樣品含量測定 取公司F生產(chǎn)的6批次樣品，其他生產(chǎn)企業(yè)各1批，總共25批樣品，各平行2份，按“2.3.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯的含量，結(jié)果見表2和圖5。

圖3 含膏量分布圖

圖4 鹽酸苯海拉明含量分布圖

圖5 樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯含量分布圖

表2 麝香壯骨膏中含膏量、鹽酸苯海拉明、樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯的測定結(jié)果(n=2)

續(xù)表2 麝香壯骨膏中含膏量、鹽酸苯海拉明、樟腦、薄荷腦、冰片、水楊酸甲酯的測定結(jié)果(n=2)

3 討論

3.1按法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)果 按照現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，50批樣品均符合所執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

20個生產(chǎn)廠家50批樣品含膏量范圍1.6～2.3 g，平均值為1.8 g，RSD為8.4%，相差較大；同個企業(yè)不同批號的含膏量相對比較穩(wěn)定，不同企業(yè)的含膏量差別較大，可能與生產(chǎn)工藝中的涂膏有關(guān)系，各個企業(yè)間涂膠工藝的差別引起含膏量的差異。除涂膠工藝外，含膏量也可能與膏體表面有無孔有一定的關(guān)系，兩個現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)都未對膏體的是否有孔及孔面積大小進(jìn)行規(guī)定，也未說明計(jì)算含膏量是否要扣除孔面積[17-18]。

公司F生產(chǎn)的6批次樣品，100 cm2含樟腦為18.19～19.64 mg，平均值為19.08 mg，RSD為2.6%；含水楊酸甲酯為15.50～17.43 mg，平均值為16.85 mg，RSD為4.6%；含鹽酸苯海拉明為5.95～7.31 mg，平均值為6.70 mg，RSD為8.1%。樟腦、水楊酸甲酯的含量RSD均小于5%，含量差異較小，說明不同批次投料情況穩(wěn)定，工藝對兩者含量影響較?。欢}酸苯海拉明的含量差異較大，如投料情況穩(wěn)定，則生產(chǎn)工藝對該成分存在一定影響，生產(chǎn)過程容易造成損失。生產(chǎn)企業(yè)需要把握好膏劑生產(chǎn)工藝，保持處方工藝穩(wěn)定，最終保證藥品質(zhì)量均一、可控。

3.2揮發(fā)性成分(樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯)的含量測定 麝香壯骨膏中的揮發(fā)油類成分為其主要有效成分，其主要鎮(zhèn)痛消炎成分為樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯，本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)測定麝香壯骨膏中該4種有效成分含量的方法。所抽取的25批樣品，每100 cm2含樟腦為7.44～30.71 mg，平均值為17.07 mg，最大值與最小值相差4倍多；含薄荷腦為4.33～49.28 mg，平均值為27.53 mg，最大值與最小值相差11倍多；含冰片為9.09～33.34 mg，平均值為20.17 mg，最大值與最小值相差3倍多；含水楊酸甲酯為6.22～25.62 mg，平均值為15.57 mg，最大值與最小值相差4倍多。公司F生產(chǎn)的6批次樣品標(biāo)準(zhǔn)方法以外兩種成分含量為每100 cm2含冰片平均值為23.63 mg，RSD為2.0%，含薄荷腦平均值為32.31 mg，RSD為2.2%；其他生產(chǎn)企業(yè)的19批樣品每100 cm2含樟腦平均值為16.44 mg，RSD為40.2%，含水楊酸甲酯為平均值為15.16 mg，RSD為40.4%，含冰片平均值為19.08 mg，RSD為35.6%，含薄荷腦平均值為26.02 mg，RSD為48.1%。

從樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯這4種揮發(fā)性成分含量測定結(jié)果可以看出，不同生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品差別甚大，質(zhì)量參差不齊；公司F生產(chǎn)的麝香壯骨膏質(zhì)量較為穩(wěn)定，揮發(fā)性成分含量控制的較好。這與企業(yè)投料的量和生產(chǎn)工藝有關(guān)，假設(shè)企業(yè)的投料量均符合要求，如果企業(yè)采用溶劑法生產(chǎn)橡膠膏劑，工藝中由于要加熱，許多揮發(fā)性藥物就會隨溶媒一起蒸發(fā)而損失掉。因此其成分含量較低的企業(yè)要控制好投料的量，重點(diǎn)要改善其生產(chǎn)工藝，減少揮發(fā)性成分在生產(chǎn)過程中的損失[19]。項(xiàng)目組認(rèn)為有必要對麝香壯骨膏種該4種揮發(fā)性成分進(jìn)行質(zhì)控，以提高該產(chǎn)品的質(zhì)量，確保不同生產(chǎn)企業(yè)之間產(chǎn)品的均一性、穩(wěn)定性。建議樟腦和水楊酸甲酯的含量限度采用現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)2中的規(guī)定(每100 cm2含樟腦限度為不得少于12.0 mg、含水楊酸甲酯限度為不得少于9.0 mg)；從現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)2可以看出，樟腦和水楊酸甲酯的含量限度值約為投料的40%，參照該要求，建議每100 cm2含冰片限度為不得少于12.0 mg和含薄荷腦限度為不得少于16.0 mg。4種揮發(fā)性成分按照建議執(zhí)行的限度標(biāo)準(zhǔn)，25批樣品中樟腦含量低于12.0 mg的有5批，水楊酸甲酯含量低于9.0 mg的有2批，冰片含量低于12.0 mg的有2批，薄荷腦含量低于16.0 mg的有4批。

3.3鹽酸苯海拉明的含量測定 麝香壯骨膏處方中含有的鹽酸苯海拉明可緩解患者在使用過程中出現(xiàn)的過敏癥狀。所抽取的25批樣品，每100 cm2含鹽酸苯海拉明為0.13～10.11 mg，平均值為5.42 mg，最大值與最小值相差77倍。公司F生產(chǎn)的6批次樣品鹽酸苯海拉明含量的平均值為6.70 mg，RSD為8.1%，其他19批平均值為5.02 mg，RSD為48.6%。

鹽酸苯海拉明含量測定結(jié)果表明不同生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品中鹽酸苯海拉明含量差別極大，質(zhì)量情況不容樂觀；相比較，公司F生產(chǎn)的麝香壯骨膏對鹽酸苯海拉明含量控制較好，質(zhì)量更為穩(wěn)定。個別生產(chǎn)企業(yè)鹽酸苯海拉明的含量與處方量極不匹配，項(xiàng)目組認(rèn)為在企業(yè)投料都符合要求的前提下，可能與生產(chǎn)企業(yè)的生產(chǎn)工藝有關(guān)，鹽酸苯海拉明在光、濕、熱和酸堿條件下，容易氧化降解生成二苯酮等物質(zhì)，生產(chǎn)企業(yè)在控制其投入的量的同時(shí)，也要防止鹽酸苯海拉明在生產(chǎn)過程中被破壞[20]。建議鹽酸苯海拉明的含量限度采用現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)2中的規(guī)定(每100 cm2含鹽酸苯海拉明限度為4.8～7.4 mg)。按照此標(biāo)準(zhǔn)，25批樣品中有3批超出限度上限7.4 mg、8批低于限度下限4.8 mg。

3.4小結(jié) 按照所執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，50批麝香壯骨膏的合格率為100%，顯示市售麝香壯骨膏的質(zhì)量情況較好。但是，項(xiàng)目組通過對其中25批樣品的鹽酸苯海拉明和4種揮發(fā)性成分(樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯)含量的測定，發(fā)現(xiàn)不同生產(chǎn)企業(yè)的麝香壯骨膏質(zhì)量差異甚大，產(chǎn)品穩(wěn)定性、均一性較差，其中執(zhí)行較高標(biāo)準(zhǔn)的公司F所生產(chǎn)的麝香壯骨膏質(zhì)量較為穩(wěn)定。為了更好控制麝香壯骨膏的質(zhì)量，建議該品種執(zhí)行統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，并增加鹽酸苯海拉明、樟腦、薄荷腦、冰片和水楊酸甲酯含量測定。