馬靜 滕圣敏 李苓

徐州醫(yī)科大學(xué)附屬滕州市中心人民醫(yī)院1病理科，2腫瘤科（山東滕州277500）

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是一種常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，在全球男性和女性惡性腫瘤中的發(fā)病率分別居于第五位和第三位，病死率均位列第三［1］。新的診斷技術(shù)和治療手段的應(yīng)用雖在一定程度上降低了病死率，但伴發(fā)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)移的Ⅳ期CRC 患者預(yù)后仍不理想［2］。腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致CRC 患者高病死率的主要原因，因此深入研究CRC 侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，探尋CRC侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)分子標(biāo)志物對(duì)于后續(xù)治療和延長(zhǎng)患者生存周期是至關(guān)重要的。miRNA是一類(lèi)長(zhǎng)度約19 ～25 nt 的內(nèi)源性非編碼RNA，在轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后的翻譯中起作用，是細(xì)胞增殖、分化、凋亡、細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞自噬和細(xì)胞代謝等生物學(xué)過(guò)程的調(diào)節(jié)因子［3］。此外，miRNA 可發(fā)揮癌基因或抑癌基因作用，其表達(dá)水平的改變與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［4］。miR-128-3p 是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種非編碼RNA，其在乳腺癌［5］、肝細(xì)胞癌［6］、前列腺癌［7］等腫瘤組織中表達(dá)水平降低并與腫瘤患者臨床病理特征相關(guān)，miR-128-3p 過(guò)表達(dá)可顯著抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感度［8］。目前，miR-128-3p在結(jié)直腸癌中作用及分子機(jī)制尚未明確，本研究中我們將探討miR-128-3p 在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其參與結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制，為該腫瘤的治療策略提供新的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料收集2015年6月至2017年5月在徐州醫(yī)科大學(xué)附屬滕州市中心人民醫(yī)院行結(jié)直腸癌根治術(shù)的56 例患者癌組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織（距癌灶邊緣＞5 cm 取材）標(biāo)本，手術(shù)切除后的組織標(biāo)本立即用液氮冷凍并保存于-80 ℃冰箱。56 例CRC 患者臨床資料完整且術(shù)后病理組織學(xué)報(bào)告均由高年資病理醫(yī)師復(fù)核，其中：男30 例，女26 例，中位年齡57 歲（30 ～77 歲）；根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）第八版結(jié)直腸癌TNM分期系統(tǒng)進(jìn)行分期：Ⅰ-Ⅱ期22 例，Ⅲ-Ⅳ期34 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者26 例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者30 例；有遠(yuǎn)處移患者23 例，無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者33 例。所有患者術(shù)前均未接受放化療及免疫治療，并簽署知情同意書(shū)。

1.2 細(xì)胞和試劑人結(jié)直腸癌細(xì)胞株（SW480、SW620、HT-29 和LoVo）和人正常結(jié)直腸上皮細(xì)胞株NCM460 均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。RPMI1640 培養(yǎng)基、胎牛血清（FBS）和胰蛋白酶均購(gòu)自美國(guó)Gibco 公司；TRIzol 試劑，LipofectamineTM2000 購(gòu)自于美國(guó)Invitrogen 公司；miScript Primer 試劑、miScript ⅡRT 試劑盒和miScript SYBR Green PCR 試劑盒均購(gòu)自德國(guó)Qiagen 公司；Transwell 小室（孔徑8.0 μm）購(gòu)自美國(guó)BD 公司；雙熒光素酶報(bào)告基因試劑盒購(gòu)自美國(guó)Promega 公司；ZEB1 和GAPDH 兔抗人多克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Abcam 公司，羊抗兔二抗購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)公司。PCR引物、ZEB1 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒（pcDNA3.1-ZEB1）、miR-128-3p 模擬物（mimics）及模擬物陰性對(duì)照（mimics-NC）、miR-128-3p 抑制物（inhibitor）及抑制物陰性對(duì)照（inhibitor-NC）均由上海吉?jiǎng)P生物技術(shù)公司設(shè)計(jì)合成。

1.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與分組將結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620以2 × 105個(gè)/孔接種至6 孔培養(yǎng)板培養(yǎng)，為檢測(cè)miR-128-3p 對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲和遷移的影響，實(shí)驗(yàn)分為4 組：miR-128-3p mimics 組、mimics-NC組、miR-128-3p inhibitor 組和inhibitor-NC 組；為檢測(cè)miR-128-3p調(diào)控ZEB1對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲和遷移的影響，實(shí)驗(yàn)分為3 組：空白對(duì)照組、pcDNA3.1-ZEB1組和miR-128-3p mimics+pcDNA3.1-ZEB1組。待細(xì)胞融合度達(dá)70%～80%時(shí)，按照LipofectamineTM2000 轉(zhuǎn)染試劑盒說(shuō)明書(shū)將各載體轉(zhuǎn)染至SW620細(xì)胞，48 h 后檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。

1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）檢測(cè)根據(jù)TRIzol說(shuō)明書(shū)提取CRC 組織和細(xì)胞的總RNA，通過(guò)紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA 的濃度和純度。取2 μg 總RNA 逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA，反應(yīng)條件為：45 ℃30 min，85 ℃10 min。在熒光定量PCR 儀上以cDNA 為模板進(jìn)行擴(kuò)增，qPCR 反應(yīng)總體系為10 μL，反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)熱10 min，95 ℃，15 s，61 ℃，30 s，70 ℃20 s，共40 個(gè)循環(huán)。miR-128-3p 引物序列F：5′-ACACAGGTTGGGATCGGTTG-3′，R：5′-CAAACTCAACAGGCCGGGA-3′；ZEB1 引物序列F：5′-CAGCTTGATACCTGTGAATGGG-3′，R：5′-CAGCTTGATACCTGTGAATGGG-3′；內(nèi)參U6 引物序列F：5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，R：5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。擴(kuò)增產(chǎn)物量達(dá)到臨界閾值時(shí)所對(duì)應(yīng)的循環(huán)數(shù)為Ct 值，△Ct 為miR-128-3p 的Ct 值與內(nèi)參U6 Ct 值的差值，并以2-△△Ct作為待測(cè)miRNA的相對(duì)表達(dá)水平。

1.5 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)通過(guò)生物信息學(xué)軟件Target Scan、miRbase 和miRDB 預(yù)測(cè)miR-128-3p 靶基因，三款軟件均發(fā)現(xiàn)ZEB1 的3′-UTR 端與miR-128-3p 有互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)，因此推測(cè)ZEB1 為miR-128-3p的靶基因。分別設(shè)計(jì)合成ZEB1野生型（WT）和突變型（MUT）結(jié)合位點(diǎn)序列并克隆至PGL3-Pro-moter 質(zhì)粒螢火蟲(chóng)熒光素酶下游構(gòu)建成報(bào)告載體。將結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620 以1 × 105個(gè)/孔接種在12 孔板中培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)80%時(shí)，參照轉(zhuǎn)染說(shuō)明書(shū)，將miR-128-3p mimic 或miR-128-3p inhibitor 連同報(bào)告載體轉(zhuǎn)染入SW620 細(xì)胞，同時(shí)轉(zhuǎn)染海腎熒光素酶（phRL-tK）作為內(nèi)參。轉(zhuǎn)染48 h后，按照Promega 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。

1.6 WB 實(shí)驗(yàn)收集各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞并用PMSF 及RIPA 提取細(xì)胞總蛋白，BCA 試劑盒測(cè)定蛋白濃度。取50 μg 蛋白進(jìn)行SDS 聚丙烯酰胺凝膠電泳1.5 h，然后將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF 膜上，5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，TBST 洗膜后，加入ZEB1（1∶500）一抗和GAPDH（1∶1 000）一抗，4°C 下孵育過(guò)夜，TBST 漂洗后，加入1∶1 000 稀釋的羊抗兔二抗37 ℃孵育1 h，將PVDF 膜浸于1 mL 顯色液中避光約10 min 后觀察結(jié)果，用凝膠圖像處理系統(tǒng)分析目標(biāo)條帶的相對(duì)分子質(zhì)量和凈吸光度值。

1.7 transwell 實(shí)驗(yàn)transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移：將滅菌Transwell 板下室加入含趨化因子的細(xì)胞培養(yǎng)液，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞以2×104/mL 濃度接種于含人工基底膜成份的transwell 小室并套入下室，37 ℃培養(yǎng)箱孵育24 h。取出上室，吸取殘夜。在下室中添加70%甲醛固定30 min，常規(guī)結(jié)晶紫染色，在高倍鏡視野下計(jì)數(shù)小室面細(xì)胞數(shù)即為穿透細(xì)胞數(shù)。transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲：4 ℃溶解過(guò)夜的Matrigel 用無(wú)血清RPMI 1640 培養(yǎng)基按1∶7 的體積比例進(jìn)行稀釋后，加20 μL 于transwell 小室中，待Matrigel 凝固后，按照細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)進(jìn)行后續(xù)操作。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 17.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以（）表示，多組間均數(shù)差異的比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用t檢驗(yàn)。采用秩和檢驗(yàn)分析miR-128-3p 表達(dá)水平與患者臨床病理特征的關(guān)系。P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-128-3p 在結(jié)直腸癌組織和細(xì)胞系中低表達(dá)qPCR 檢測(cè)結(jié)果顯示，miR-128-3p 在結(jié)直腸癌組織中的相對(duì)表達(dá)水平為（0.665±0.030），在癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)水平為（1.493±0.053），兩者間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 13.51，P＜0.001）；miR-128-3p 表達(dá)水平與CRC 患者的TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)（均P＜0.05），而與患者年齡、性別、腫瘤大小和腫瘤分化程度不具有相關(guān)性（均P＞0.05）。miR-128-3p 在SW620、SW480、HT-29、LoVo 細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著低于NCM460細(xì)胞（均P＜0.05），以SW620細(xì)胞中表達(dá)水平最低，見(jiàn)圖1、表1。

圖1 qPCR 檢測(cè)miR-128-3p 在結(jié)直腸癌組織（A）和結(jié)直腸癌細(xì)胞系（B）中的表達(dá)情況Fig.1 The relative expression of miR-128-3p in colorectal cancer tissues（A）and colorectal cancer cell lines（B）was detected by qPCR

表1 miR-128-3p 表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系Tab.1 Relationship between miR-128-3p expression and clinicopathological characteristics of CRC patients ±s

表1 miR-128-3p 表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系Tab.1 Relationship between miR-128-3p expression and clinicopathological characteristics of CRC patients ±s

項(xiàng)目性別男 女年齡≤60 歲＞60 歲腫瘤直徑≤4 cm＞4 cm TNM 分期Ⅰ-ⅡⅢ-Ⅳ腫瘤分化程度高/中分化低分化淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移否 是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移否 是例數(shù)30 26 21 35 24 32 22 34 37 19 30 26 33 23 miR-128-3p expreesion 0.66±0.23 0.67±0.22 0.72±0.22 0.63±0.23 0.64±0.19 0.69±0.25 0.82±0.19 0.57±0.19 0.69±0.23 0.60±0.21 0.79±0.24 0.59±0.19 0.75±0.21 0.54±0.19 t 值0.113 1.411 0.818 4.754 1.464 3.285 3.882 P 值0.910 0.164 0.417＜0.001 0.149 0.002＜0.001

2.2 ZEB1 是miR-128-3p 的靶向調(diào)控基因生物信息學(xué) 軟 件Target Scan、miRbase 和miRDB 均 發(fā)現(xiàn)miR-128-3p 在ZEB1 3′-UTR 區(qū)有互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)（圖2A）。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示（圖2B），在WT-ZEB1 3′-UTR 實(shí)驗(yàn)中，與mimic-NC 組相比較，miR-128-3p mimics組pGL3-ZEB1的熒光素酶活性顯著降低（P=0.027）；與inhibitor-NC組相比較，miR-128-3p inhibitor 組pGL3-ZEB1 的熒光素酶活性顯著增高（P= 0.018）。在MUT-ZEB1 3′-UTR實(shí)驗(yàn)中，與mimic-NC 組相比較，miR-128-3p mimics組pGL3-ZEB1 的熒光素酶活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P= 0.742）；與inhibitor-NC 組相比較，miR-128-3p inhibitor 組pGL3-ZEB1 的熒光素酶活性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.347）。

圖2 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證ZEB1 與miR-128-3p 的靶向關(guān)系Fig.2 The targeting relationship between ZEB1 and miR-128-3p was verified by Luciferase reporter assay

2.3 miR-128-3p 調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620 侵襲和遷移Transwell 侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（圖3A、3C），miR-128-3p mimic 組的侵襲細(xì)胞數(shù)顯著低于mimic-NC組［（89.7±5.6）個(gè)vs.（185.6±15.9）個(gè)，t=5.688，P= 0.005］，miR-128-3p inhibitor 組的侵襲細(xì)胞數(shù)顯著高于inhibitor-NC組［（308.7±21.3）個(gè)vs.（192.3± 16.0）個(gè)，t= 4.364，P= 0.012］，而mimic-NC 組與inhibitor-NC 組間侵襲細(xì)胞數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 0.295，P= 0.783）；Transwell 遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（圖3B、3D），miR-128-3p mimic 組的遷移細(xì)胞數(shù)顯著低于mimic-NC 組［（50.3 ± 4.5）個(gè)vs.（101.7 ±7.5）個(gè)，t= 5.854，P= 0.004］，miR-128-3p inhibitor組的遷移細(xì)胞數(shù)顯著高于inhibitor-NC 組［（193.7± 9.4）個(gè)vs.（110.7 ± 6.4）個(gè)，t= 7.311，P= 0.002］，而mimic-NC 組與inhibitor-NC 組間遷移細(xì)胞數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t= 0.911，P= 0.414）。結(jié)果表明瞬時(shí)上調(diào)或下調(diào)miR-128-3p 表達(dá)可相應(yīng)抑制或增強(qiáng)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620 的侵襲和遷移能力。

圖3 miR-128-3p 模擬物或抑制物對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620 侵襲和遷移能力的影響Fig.3 Effects of miR-128-3p mimics or inhibitors on invasion and migration of CRC SW620 cells

2.4 miR-128-3p 通過(guò)靶向ZEB1 抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620 侵襲和遷移Transwell 侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（圖4A、4B），pcDNA3.1-ZEB1 組的侵襲和遷移細(xì)胞數(shù)分別為（382.7 ± 15.6）個(gè)和（240.3 ±12.9）個(gè)，顯著高于空白對(duì)照組的（167.0 ± 11.0）個(gè)和（108.0±10.0）個(gè)（t=11.280，P＜0.001；t=8.117，P= 0.001），也顯著高于pcDNA3.1-ZEB1+miR-128-3p mimics 組的（219.7 ± 6.8）個(gè)和（139.0 ± 6.8）個(gè)（t=9.574，P=0.001；t=6.963，P=0.002）。WB 和qPCR 檢測(cè)結(jié)果顯示（圖4C、4E），pcDNA3.1-ZEB1組ZEB1 蛋白和mRNA 的相對(duì)表達(dá)水平分別為（0.846 ± 0.053）和（1.633 ± 0.075），顯著高于空白對(duì)照組的（0.540 ± 0.023）和（1.208 ± 0.022）（t=5.297，P=0.006；t=5.413，P=0.006），也顯著高于pcDNA3.1-ZEB1+miR-128-3p mimics 組的（0.569 ±0.044）和（0.890 ± 0.068）（t= 4.042，P= 0.016；t=7.341，P= 0.002）。結(jié)果表明轉(zhuǎn)染ZEB1 質(zhì)粒可上調(diào)ZEB1 蛋白表達(dá)，促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620 的侵襲和遷移，而同時(shí)轉(zhuǎn)染miR-128-3p mimics 可下調(diào)ZEB1 蛋白和mRNA 的表達(dá)，降低ZEB1 對(duì) 結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲和遷移作用。

圖4 miR-128-3p 靶向ZEB1 抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞SW620 侵襲和遷移Fig.4 miR-128-3p targeted ZEB1 to inhibit the invasion and migration of CRC SW620 cells

3 討論

miRNA是一類(lèi)小分子非編碼RNA，以堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式與靶基因的3′非翻譯區(qū)相結(jié)合，通過(guò)剪切靶基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物或者抑制轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的翻譯等途徑調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)。單一miRNA 可調(diào)控?cái)?shù)百種靶基因，一種基因也可受多個(gè)miRNA調(diào)控，以此影響多種信號(hào)通路的功能性相互作用參與細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝等多個(gè)生理過(guò)程。在CRC 發(fā)病機(jī)制的研究中，目前已發(fā)現(xiàn)多種miRNA 異常表達(dá)與CRC 進(jìn)展過(guò)程密切相關(guān)［9-10］，監(jiān)測(cè)特定miRNA 表達(dá)水平可為CRC 的診斷、治療和預(yù)后評(píng)估提供幫助，但目前仍有數(shù)百種miRNA在CRC 發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的功能性作用不清楚，CRC 分子機(jī)制仍需進(jìn)一步探索。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，miR-128-3p 在卵巢癌組織和細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)并與患者預(yù)后相關(guān)，miR-128-3p 可靶向調(diào)控CDK14 表達(dá)抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移［11］；HUO等［12］發(fā)現(xiàn)miR-128-3p 通過(guò)IRS-1/PI3K/AKT 信號(hào)通路靶向神經(jīng)元正五聚蛋白1（NPTX1）抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和分化；此外，miR-128-3p 還可靶向轉(zhuǎn)錄因子4（TCF4）抑制黑色素瘤A375細(xì)胞增殖、侵襲和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化［13］，以上研究均表明miR-128-3p在腫瘤進(jìn)展過(guò)程中可發(fā)揮抑癌基因作用。

在結(jié)直腸癌的研究中，LIU 等［14］發(fā)現(xiàn)負(fù)載miR-128-3p 的納米復(fù)合物通過(guò)雙靶向抑制PI3K/AKT和MEK/ERK 信號(hào)通路的活性，可增強(qiáng)結(jié)直腸癌化療效果；另有研究［15］也指出外泌體傳輸?shù)膍iR-128-3p 可增加奧沙利鉑耐藥結(jié)直腸癌細(xì)胞的化療敏感性，但miR-128-3p 在結(jié)直腸癌中的表達(dá)水平及其與結(jié)直腸癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究目前尚未有報(bào)道。本研究通過(guò)臨床樣本檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)miR-128-3p在CRC 組織中低表達(dá)，且與患者的TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性，提示miR-128-3p 可能在CRC 中發(fā)揮抑癌作用。體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)miR-128-3p 在結(jié)直腸癌細(xì)胞中呈低表達(dá)狀態(tài)，轉(zhuǎn)染miR-128-3p mimic 或miR-128-3p inhibitor可相應(yīng)減弱或增強(qiáng)結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲遷移能力。為揭示miR-128-3p 對(duì)結(jié)直腸癌作用機(jī)制，我們通過(guò)靶基因預(yù)測(cè)軟件和熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證實(shí)轉(zhuǎn)錄因子E 盒結(jié)合蛋白1（ZEB1）是miR-128-3p 的下游靶基因，推測(cè)miR-128-3p 可能通過(guò)靶向調(diào)控ZEB1 參與CRC 的侵襲轉(zhuǎn)移。ZEB1 屬于ZEB 轉(zhuǎn)錄因子家族，可與靶DNA 序列結(jié)合并抑制細(xì)胞粘附分子以及細(xì)胞極性相關(guān)基因表達(dá)，誘導(dǎo)EMT進(jìn)程。ZHANG 等［16］研究報(bào)道，ZEB1 高表達(dá)與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移和患者預(yù)后不良相關(guān)，SáNCHEZTILLó E 等［17］發(fā)現(xiàn)ZEB1 通過(guò)拮抗uPA 和PAI-1 促進(jìn)大腸癌細(xì)胞侵襲性，我們的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)ZEB1過(guò)表達(dá)可促進(jìn)CRC 細(xì)胞的侵襲和遷移，與上述研究報(bào)道一致。研究發(fā)現(xiàn)甲基化CPG 結(jié)合蛋白2（MeCP2）［18］和死亡結(jié)構(gòu)蛋白（DAXX）［19］可通過(guò)調(diào)控ZEB1 轉(zhuǎn)錄促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移，而在食管癌［20］和肺癌［21］的研究中也已報(bào)道m(xù)iR-128-3p靶向調(diào)控ZEB1 表達(dá)參與了腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制，以上研究成果提示ZEB1 是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制中多信號(hào)通路的關(guān)鍵作用點(diǎn)，而miR-128-3p 對(duì)ZEB1 的靶向調(diào)控很可能在結(jié)直腸癌的進(jìn)展過(guò)程中也發(fā)揮重要作用。為驗(yàn)證上述推論，將ZEB1 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒單獨(dú)轉(zhuǎn)染或聯(lián)合miR-128-3p mimics 共同轉(zhuǎn)染結(jié)直腸癌細(xì)胞，并觀察其惡性生物學(xué)性狀的改變。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-128-3p 對(duì)ZEB1 具有靶向調(diào)控作用，ZEB1 表達(dá)上調(diào)可促進(jìn)CRC 的侵襲遷移，而轉(zhuǎn)染miR-128-3p 可通過(guò)下調(diào)ZEB1 表達(dá)抑制CRC 的侵襲遷移。

綜上所述，本研究證實(shí)miR-128-3p 與CRC 發(fā)生發(fā)展有重要關(guān)系，其機(jī)制是通過(guò)調(diào)控靶基因ZEB1 的表達(dá)而影響CRC 細(xì)胞的侵襲和遷移，miR-128-3p 有望作為CRC 潛在的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。