忽萌萌，栗田，夏建偉，張東建，張健，殷志琦

（1.中國(guó)藥科大學(xué)中藥學(xué)院中藥制劑系&天然藥物活性組分與藥效國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210009；2.江蘇省中醫(yī)藥研究院轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210028；3.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇 南京 210028）

0 引言

免疫系統(tǒng)是一個(gè)由淋巴器官、細(xì)胞、體液因子和細(xì)胞因子共同組成的互動(dòng)網(wǎng)絡(luò)，其通過(guò)特異性免疫和非特異性免疫協(xié)同作用，識(shí)別、排斥并清除病原體和其他外來(lái)抗原，維持宿主的健康[1]。研究證明，免疫抑制的人群較正常人群更易感染流感病毒，感染后常出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥甚至死亡[2-3]。

腸道粘液是抵御共生微生物和入侵病原體的一道重要防線[4]。粘液中含有多種免疫調(diào)節(jié)分子，在十二指腸和回腸腔內(nèi)的粘液存在較高濃度的免疫球蛋白A(IgA)，小腸隱窩層的底部亦可產(chǎn)生一些抗菌物質(zhì)，如：防御肽，溶酶菌等。此外，腸道免疫功能還與腸道中負(fù)責(zé)分泌粘液的杯狀細(xì)胞間存在密切聯(lián)系[5]。一方面，免疫系統(tǒng)可通過(guò)免疫因子調(diào)節(jié)杯狀細(xì)胞的功能。例如，輔助型T細(xì)胞2(Th2)通過(guò)產(chǎn)生IL-4，IL-5，IL-9和IL-13促進(jìn)杯狀細(xì)胞增生和粘液分泌[6-7]。另一方面，小腸杯狀細(xì)胞分泌粘液時(shí)能夠感知腸腔內(nèi)的抗原物質(zhì)，并且能夠?qū)⒖乖瓘那粌?nèi)傳遞到固有層的樹(shù)突狀細(xì)胞中，通過(guò)與T細(xì)胞相互作用進(jìn)而觸發(fā)免疫響應(yīng)[8]。因此，刺激粘液分泌，促進(jìn)杯狀細(xì)胞增生將有益于提高機(jī)體的免疫水平。

天天膠囊(TTC)是由蘆薈、南瓜、低聚木糖、茯苓和銀耳組成具有通便作用的保健食品。本課題組在前期的通便機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)TTC能夠促進(jìn)杯狀細(xì)胞的增生及粘液的分泌[9]，因此，我們推測(cè)TTC可能有增強(qiáng)機(jī)體的腸道免疫和全身免疫的功能。為驗(yàn)證這一假設(shè)，本研究使用腹腔注射環(huán)磷酰胺(CPM)構(gòu)建的免疫抑制小鼠模型，評(píng)價(jià)TTC對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)作用，為拓展天天膠囊的功效及適應(yīng)證提供依據(jù)。

1 材料

1.1 藥品與試劑

天天膠囊(河北御芝林藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20180923)；鹽酸左旋咪唑(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號(hào)：20190920)；環(huán)磷酰胺(上海阿拉丁試劑有限公司，批號(hào)：20190620)；印度墨汁(上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號(hào)：20191019)；刀豆蛋白 A(北京 Coolaber公司，批號(hào)：20191023)；胎牛血清(美國(guó)Sigma公司)；LPS(江蘇凱基生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20180120)；1640培養(yǎng)基(江蘇凱基生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20190722)；DMSO(北京索萊寶技術(shù)有限公司，批號(hào)：20190820)；小鼠 INF-γ、IL-6和 IL-2 ELISA 試劑盒(武漢貝茵萊生物科技有限公司，批號(hào)：20191021)；INF-α（武漢伊萊瑞特有限公司，批號(hào)20191021）；IL-1β和分泌型免疫球蛋白A ELISA試劑盒(武漢伊萊瑞特有限公司，批號(hào)：20191025)；CD4-FITC單克隆抗體（美國(guó)biogems公司，批號(hào)：#AF6998）；CD8-PE單克隆抗體(美國(guó)biogems公司，批號(hào)：#NBP1-97927)。

1.2 儀器

電子天平(美國(guó)Mettler Tolerdo公司，型號(hào)：MS206DU)；全波長(zhǎng)多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Tek公司，型號(hào)：SynergyH1)；超速控溫離心機(jī)(美國(guó)Beckman Coulter公司，型號(hào)：Allera64R)；熒光倒置顯微鏡(德國(guó)Carl Zeiss公司，型號(hào)：164-5052)；流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明小鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，體重（21±2）g，共 72只，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物責(zé)任有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)為[SCXK(滬)2017-0005]。動(dòng)物喂養(yǎng)于江蘇省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，飼養(yǎng)于溫度24℃-26℃，相對(duì)濕度40%~60%，12 h光照和12 h黑暗交替的環(huán)境中，期間正常飲食、飲水。本研究的動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)方案均已獲江蘇省中醫(yī)藥研究所倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組、造模和治療

小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，將其隨機(jī)分為6組，每組12只：正常對(duì)照(NC)組、模型對(duì)照(MC)組、陽(yáng)性藥鹽酸左旋咪唑(LM, 20 mg/(kg·d))治療組、天天膠囊低劑量[LTTC, 8.3 mg/(kg·d)]治療組、天天膠囊中劑量 [MTTC, 16.5 mg/(kg·d)]治療組和天天膠囊高劑量[HTTC, 33.0 mg/(kg·d)]治療組。

模型組和治療組腹腔注射環(huán)磷酰胺（CPM）80mg/kg·d，構(gòu)建小鼠的免疫抑制模型；空白對(duì)照組腹腔注射同體積無(wú)菌生理鹽水。CPM注射3d后，治療組灌胃給藥治療7d，空白和模型組灌胃給予同體積的0.3%CMC-Na溶液。其中，每組隨機(jī)選取3只小鼠用于檢測(cè)吞噬指數(shù)，3只小鼠用于淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)。

2.2 TTC對(duì)免疫抑制小鼠單核巨噬細(xì)胞碳粒廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)的影響

每組隨機(jī)選取的3只小鼠于末次給藥24 h后，尾靜脈注射體積分?jǐn)?shù)25%的印度墨汁(10 mL/kg)，并于2 min、10 min后分別于眼球后靜脈叢取血20 μL，立即將其吹入2 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 %的Na2CO3溶液中，搖勻，在波長(zhǎng)675 nm處測(cè)定OD值。

按下列公式計(jì)算碳粒廓清指數(shù)(K)和吞噬指數(shù)(α)。

K=(LgA1-LgA2)/(t2-t1)

α=K1/3×W/WLS

式中，A為血樣吸光值(A1，A2為2次測(cè)定吸光值)；t為采血時(shí)間(t1，t2為2次采血時(shí)間)；W為體重；WLS為肝脾合重。

2.3 TTC對(duì)免疫抑制小鼠免疫器官的影響

每組隨機(jī)選取6只小鼠，摘眼球取血，采血結(jié)束后，處死小鼠，取出脾臟和胸腺，精密稱量，計(jì)算出小鼠的脾臟和胸腺指數(shù)。

脾臟指數(shù)=脾臟重量(mg)/小鼠體重(g)

胸腺指數(shù)=胸腺重量(mg)/小鼠體重(g)

2.4 TTC對(duì)免疫抑制小鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響

將“2.3”收集的血液，每組隨機(jī)選取3只，分別與CD4-FITC和CD8-PE混合，在4℃條件下避光染色30min，各管加入紅細(xì)胞裂解液1mL，混勻，避光10min，然后加入PBS溶液1mL混勻，1000r/min離心10min，棄上清。使用500μL的PBS重懸細(xì)胞沉淀，通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞的百分率。

2.5 血清抗體IgG和IgM檢測(cè)

為評(píng)價(jià)藥物對(duì)小鼠特異性體液免疫的影響，取“2.3”中獲得的血液，分離得到的各組小鼠血清，每組隨機(jī)選取3只，按照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)藥物對(duì)小鼠血清IgG和IgM的含量。

2.6 TTC對(duì)免疫抑制小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖的影響

2.6.1 脾細(xì)胞懸液制備

每組隨機(jī)選取3只空白小鼠，脫頸處死，置于75%酒精中浸泡30s，超凈工作臺(tái)中快速剝離脾臟，加預(yù)冷PBS清洗2次，加入3mL1640培養(yǎng)基冰浴勻漿，200目篩子過(guò)濾，濾液以1500r/min離心5min，棄上清，加入紅細(xì)胞裂解液3mL，冰上孵育10min，1500r/min離心5min，棄上清。加預(yù)冷PBS漂洗2次，最后加入3mL1640完全培養(yǎng)液重懸，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和鋪板。

2.6.2 TTC以及TTC協(xié)同ConA、LPS對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響

取“2.6.1”制備的各組脾細(xì)胞懸液分為3組分別以2×105cells/mL的密度接種于96孔板，每孔100μL細(xì)胞懸液。第1組為空白組用1640完全培養(yǎng)液培養(yǎng)，第2組用含有8μg/mLConA的培養(yǎng)液培養(yǎng)，第3組用含有20μg/mLLPS的培養(yǎng)液培養(yǎng)。培養(yǎng)箱孵育48h后，每孔加10μLMTT，繼續(xù)孵育4h，孵育結(jié)束后，用注射器吸取96孔板內(nèi)的培養(yǎng)基，每孔加入150μL的DMSO溶液，置搖床上震搖10min，于490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，結(jié)果以三個(gè)復(fù)孔A值表示。

2.7 TTC協(xié)同ConA對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響

取“2.6.1”制備的脾細(xì)胞懸液以3×105cells/mL的密度接種于在6孔板中，每孔2 mL細(xì)胞懸液。將其分為6個(gè)組，分別為NC組、MC組、LM組、LTTC+ConA組、MTTC+ConA組和HTTC+ConA組，ConA的終濃度為8μg/mL。將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h后，離心收集上清，ELISA法檢測(cè)上清液中細(xì)胞因子水平。

2.8 TTC對(duì)免疫抑制小鼠空腸組織損傷的影響

每組選取3只小鼠剪取適量的空腸組織，預(yù)冷的PBS緩沖液沖洗，使用組織勻漿器在冰浴狀態(tài)下勻漿，離心后吸取上清，根據(jù)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)空腸組織中sIgA、INF-α、IL-1β的含量。另取部分組織進(jìn)行HE染色，用倒置顯微鏡觀察空腸組織的黏膜結(jié)構(gòu)。

2.9 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SEM)表示，用Prism 7.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，多組間比較采用單因素方差分析(oneway ANOVA)，兩組間的多重比較采用LSD法，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 TTC對(duì)免疫抑制小鼠單核巨噬細(xì)胞碳粒廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)的影響

本文采用體內(nèi)碳粒廓清試驗(yàn)分析TTC對(duì)免疫抑制小鼠單核吞噬系統(tǒng)功能的影響。結(jié)果如Table 1所示，MC組小鼠血液碳粒廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)顯著低于NC組；而經(jīng)LM和TTC治療一周后，LM組和TTC各劑量組的碳粒廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)顯著高于MC組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果提示，TTC可增加免疫抑制小鼠的非特異性免疫功能。

Table 1 Effect of TTC on the phagocytic activity of the mononuclear phagocytic system in mice(±s,n=3)

Table 1 Effect of TTC on the phagocytic activity of the mononuclear phagocytic system in mice(±s,n=3)

NC: normal control group; MC: model control group; LM:levamisole hydrochloride treatment group; LTTC: low dose of TTC;MTTC: middle dose of TTC; HTTC: high dose of TTC.Data are expressed as mean±SEM.#P<0.05,##P<0.01,compared to the NC.*P<0.05,**P<0.01,compared to the MC.

組別 碳粒廓清指數(shù) (K) 吞噬指數(shù) (α)NC 0.07081±0.0144 8.8163±0.7560 MC 0.01782±0.0097## 4.3597±1.0454##LM 0.04939±0.0051*# 6.3508±0.6014*#LTTC 0.04027±0.0247*# 5.1436±1.9815##MTTC 0.06259±0.0087*# 6.9701±0.3720*#HTTC 0.07187±0.0067* 7.2261±0.2218**#

3.2 TTC對(duì)免疫抑制小鼠免疫器官的影響

分析免疫器官指數(shù)發(fā)現(xiàn)，相較于NC組，MC組小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)顯著降低(P<0.05)；而與MC組相比，LM組和TTC各組的胸腺指數(shù)顯著增加(P<0.05)。脾臟指數(shù)呈增長(zhǎng)趨勢(shì)(P>0.05)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)Table 2。

Table 2 Effect of TTC on thymus and spleen indices of mice(±s, n=6)

Table 2 Effect of TTC on thymus and spleen indices of mice(±s, n=6)

Data are expressed as mean±SEM.#P<0.05,compared to the NC.*P<0.05 and *P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,compared to the MC.ns:P>0.05

Group Thymus index(mg/g) Spleen index(mg/g)NC 7.3905±0.3512 2.1638±0.2483 MC 4.5402±0.7707# 1.5677±0.3691(ns)LM 8.7914±0.5433*** 1.7609±0.4679(ns)LTTC 7.1933±0.5600* 1.8195±0.2729(ns)MTTC 7.7145±0.6633** 2.0513±0.3646(ns)HTTC 7.3186±0.38267* 1.7727±0.3572(ns)

3.3 TTC對(duì)免疫抑制小鼠血清抗體IgG和IgM的影響

如Fig.1所示，MC組小鼠血清中IgG和IgM的含量相較于NC組均顯著降低(P<0.05)，而相比于MC組，不同劑量的TTC均可提高IgG和IgM的含量(P<0.05)，且MTTC組的效果最好。提示，TTC可調(diào)節(jié)機(jī)體的體液免疫功能。

Fig.1 Effects of TTC on the levels of serum immunoglobulin in mice(±s,n=3).

3.4 TTC對(duì)免疫抑制小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響

研究報(bào)道，CD4+和CD8+是T細(xì)胞的兩大亞型，而機(jī)體CD4+和CD8+的比值是反應(yīng)機(jī)體免疫水平的重要指標(biāo)[10]。如Fig.2A和2B所示，與NC組相比，MC組外周血中CD4+和CD8+百分率含量顯著降低(P<0.05)。給予不同劑量天天膠囊和陽(yáng)性藥治療后，相比于MC組，各治療組的CD4+和CD8+百分率均顯著升高(P<0.05)，其中MTTC組的CD4+增加尤為顯著(P<0.001)；且CD4+與CD8+的比值在MTTC組也有升高的趨勢(shì)（Fig.2C）(P>0.05)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果說(shuō)明，TTC可調(diào)節(jié)機(jī)體的細(xì)胞免疫。

3.5 TTC對(duì)免疫抑制小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子的影響

如Fig.3A所示，TTC治療組能顯著刺激脾細(xì)胞的增殖(P<0.05)。進(jìn)一步用ConA和LPS分別刺激脾細(xì)胞時(shí)，結(jié)果顯示，與MC組相比，TTC與ConA合用時(shí)，T淋巴細(xì)胞增殖水平升高，且中劑量與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。與T淋巴細(xì)胞的結(jié)果類似，當(dāng)TTC與LPS共同作用時(shí)，與MC組相比，低劑量和高劑量中的B淋巴細(xì)胞增殖水平也被顯著提高(P<0.05)。上述數(shù)據(jù)表明：TTC能促進(jìn)環(huán)磷酰胺損傷的免疫抑制鼠的脾細(xì)胞的增殖。同時(shí)，TTC能協(xié)同ConA和LPS分別刺激T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的增殖。

如Fig.3B-D所示，與NC組相比，MC組脾淋巴細(xì)胞上清液中IL-2、IL-6和INF-γ含量均顯著降低(P<0.05)，而TTC可顯著提高INF-γ、IL-6和IL-2的含量(P<0.05)，且MTTC的效果最佳。提示：TTC可改善CPM誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞功能紊亂。

3.6 TTC對(duì)免疫抑制小鼠空腸組織的影響

如Fig.4A所示，NC組腸黏膜層次分明，腸絨毛形態(tài)規(guī)則，分布均勻，固有層結(jié)構(gòu)清晰，其內(nèi)細(xì)胞整齊排列。相較與NC組，MC組可見(jiàn)腸黏膜上皮大量壞死和脫落，空腸絨毛斷裂，形狀不規(guī)則，黏膜層結(jié)構(gòu)混亂，隱窩深度顯著下降，杯狀細(xì)胞數(shù)量顯著降低。給予LM和TTC治療一周后，LM組的腸黏膜排列整齊且完整，絨毛長(zhǎng)度明顯增長(zhǎng)，杯狀細(xì)胞增多；TTC各組黏膜相對(duì)完整，未見(jiàn)明顯脫落，杯狀細(xì)胞顯著增多，絨毛長(zhǎng)度增長(zhǎng)。結(jié)果提示，TTC可以治療CPM誘導(dǎo)的小鼠腸道損傷。

空腸組織中細(xì)胞因子水平可直接反映腸道黏膜免疫情況，如Fig.4B-D所示，與NC組相比，MC組小鼠空腸組織sIgA、IL-1β和INF-α含量均顯著降低(P<0.05)；與MC組相比，不同劑量的TTC組小鼠空腸組織sIgA、IL-1β和INF-α含量均顯著增高(P<0.05)。提示，TTC可調(diào)節(jié)腸道黏膜免疫。

Fig.4 Effects of TTC on jejunum in mice(±s,n=3)

Fig.2Effect of TTC on T lymphocytes in mice(±s, n=3)

Fig.3Effects of TTC on spleen lymphocyte proliferation and cytokine induction of spleen lymphocyte in mice(±s,n=3)

4 討論

本研究使用CPM建立的免疫抑制小鼠模型，探究TTC對(duì)機(jī)體是否有免疫調(diào)節(jié)作用。研究結(jié)果顯示，TTC能增強(qiáng)免疫抑制小鼠的腸道黏膜免疫反應(yīng)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，TTC也可提高免疫抑制小鼠機(jī)體的特異性和非特異性反應(yīng)，表現(xiàn)出良好的免疫增強(qiáng)作用。

黏膜免疫系統(tǒng)是獨(dú)立于系統(tǒng)免疫的特殊免疫體系，其可耐受性食物抗原和共生菌，但對(duì)病原微生物具有免疫應(yīng)答效應(yīng)。腸黏膜是大多數(shù)免疫過(guò)程發(fā)生的部位[11-12]。粘液作為機(jī)體腸黏膜免疫的第一道防線，可阻止細(xì)菌對(duì)腸上皮細(xì)胞的侵襲。已有研究報(bào)道，維生素A作為一種免疫增強(qiáng)劑能促使粘液分泌[13]。因此，促進(jìn)粘液分泌，維持腸道粘液完整性可有益于提高機(jī)體的腸黏膜免疫。本課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)，TTC在通便過(guò)程中可顯著刺激腸道粘液的分泌。提示，TTC可具有增強(qiáng)機(jī)體腸黏膜免疫的作用。已知分泌型免疫球蛋白A(sIgA)廣泛分布于粘液中，是腸黏膜免疫的主要體液介質(zhì)[14]。研究發(fā)現(xiàn)仿刺參和靈芝多糖均可通過(guò)增加sIgA分泌增強(qiáng)腸黏膜免疫水平[15-16]。本文研究顯示，經(jīng)TTC治療后，免疫抑制小鼠的sIgA的水平顯著增加，說(shuō)明TTC具有改善免疫抑制小鼠腸黏膜免疫的作用。此外，TTC還可顯著上調(diào)空腸組織IL-1β和INF-α的水平，而IL-1β在先天性免疫應(yīng)答調(diào)控中起著重要作用，INF-α參與T淋巴細(xì)胞的活化。此結(jié)果與黑靈芝多糖改善免疫抑制小鼠腸道免疫的結(jié)果相似[17]。此外，TTC還可逆轉(zhuǎn)CPM誘導(dǎo)的空腸組織損傷。綜上可知，TTC可以改善CPM損傷的腸黏膜機(jī)械屏障，增強(qiáng)其腸黏膜免疫功能。

吞噬細(xì)胞是先天免疫反應(yīng)的重要參與者，單核巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)常被用來(lái)評(píng)估機(jī)體非特異性免疫狀態(tài)[18]。在本研究中，TTC可顯著提高CPM小鼠的吞噬指數(shù)，提示TTC具有增強(qiáng)機(jī)體的非特異性免疫的作用。T細(xì)胞被認(rèn)為是調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫的主要免疫細(xì)胞，主要分為CD4差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義T和CD8差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義T細(xì)胞兩大類型[19-20]。當(dāng)CD4差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義與CD8差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的比值較高時(shí)，表明機(jī)體處于較高的免疫應(yīng)答水平[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，MTTC能顯著提高免疫抑制小鼠外周血的CD4差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義與CD8差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的比值，說(shuō)明TTC可提高免疫抑制小鼠的細(xì)胞免疫功能。免疫球蛋白是由B細(xì)胞分泌的參與全身體液免疫的一類球蛋白，其通過(guò)特異性結(jié)合病原體和中和毒素，使病原體更易被吞噬細(xì)胞所吞噬、清除[21]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TTC能顯著提高免疫抑制小鼠血清中的IgM和IgG的水平，提示TTC可增強(qiáng)免疫抑制小鼠的體液免疫功能。上述結(jié)果說(shuō)明，TTC可顯著提高免疫抑制小鼠系統(tǒng)的特異性和非特異性免疫功能。

脾臟作為重要的免疫器官，在機(jī)體的免疫功能調(diào)節(jié)中扮演重要的角色。脾細(xì)胞增殖是活化特異性免疫系統(tǒng)的一個(gè)重要過(guò)程[22-23]。本研究顯示，TTC能夠顯著增加免疫抑制小鼠的脾臟指數(shù)，促進(jìn)免疫抑制小鼠T、B淋巴細(xì)胞的增殖，同時(shí)顯著增加脾細(xì)胞中IL-2、IL-6和IFN-γ的分泌。這些結(jié)果表明，TTC能改善CPM誘導(dǎo)的脾細(xì)胞功能紊亂。

綜上，TTC可通過(guò)增強(qiáng)免疫抑制小鼠的腸黏膜免疫，改善機(jī)體的非特異性和特異性免疫反應(yīng)，進(jìn)而發(fā)揮其免疫增強(qiáng)的作用，為天天膠囊作為免疫增強(qiáng)劑的開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。但天天膠囊增強(qiáng)機(jī)體免疫的機(jī)制尚不明確，仍需進(jìn)一步深入探究。