周敏，郭艷芳，王烜，程奇珍

江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價重點實驗室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，南昌 330029

復(fù)方氨基酸注射液（18AA）是含有多種氨基酸的腸外營養(yǎng)制劑，屬于營養(yǎng)用氨基酸注射液，用于各種應(yīng)激狀態(tài)和危重患者的營養(yǎng)支持，臨床使用較廣［1］。復(fù)方氨基酸注射液引起的不良反應(yīng)，涉及多個系統(tǒng)、器官，其臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣［2］，其中以靜脈炎最普遍，其次為過敏性休克。除使用方面的原因，靜脈炎主要與藥物中含山梨醇、電解質(zhì)等多種成分相關(guān)，過敏性休克主要與藥品在生產(chǎn)過程中混有其它雜質(zhì)或其代謝產(chǎn)物及亞硫酸氫鈉過敏［3,4］相關(guān)。

氯離子、亞硝酸根離子、磷酸根離子是水中常見的陰離子［5］，部分氨基酸結(jié)合醋酸根離子成鹽，同時制劑過程中調(diào)節(jié)pH 值時也可能引入部分醋酸根［6］，乙二胺四醋酸二鈉常用于注射液金屬離子絡(luò)合，亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉用于注射液中作為抗氧劑，以上多種陰離子均有可能在制劑中存在，可能與用藥引起的不良反應(yīng)相關(guān)，為監(jiān)控注射液用藥安全，有必要進行檢測監(jiān)控。

離子色譜法需要樣品量少，具有專屬性、靈敏度、準確度、自動化程度高的優(yōu)點，適合于分析陰離子、陽離子、有機酸、堿，特別適合分析各種離子，由于多數(shù)陰離子的紫外響應(yīng)值較低，而本制劑中總離子強度較強，為減少解離，以氫氧根作為淋洗液。本次實驗建立離子色譜法同時測定多種陰離子含量的方法，用于測定不同來源復(fù)方氨基酸注射液（18AA）的多種陰離子含量，從而發(fā)現(xiàn)潛在的隱患。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器

戴安離子色譜（ICS-1000 系統(tǒng)+AS40 進樣器+IONPAC AS11 陰離子交換柱+KOH 自動抑制外加水模式）；Synergguv Millipore 超純水制水機。

1.2 對照品

醋酸鈉（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20150417，含量99%）；乙二胺四醋酸二鈉（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20170527，含量：99.0%）；亞硝酸鈉（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：142024，含量99%）；氯化鈉（西隴化工股份有限公司，批號：170417，含量：99.5%）；磷酸鈉（西隴化工股份有限公司，批號：160106，含量：98%）；硫代硫酸鈉（SIGMA，批號：MKBT8948V，含量：99.5%）；硫酸鈉（西隴化工股份有限公司，批號：160105）；亞硫酸氫鈉（SIGMA，批號：MKBB5028，含量：100%）

2 實驗方法

2.1 色譜條件

色譜條件色譜柱：Ion Pac AS11 Analytical（4 mm ×250 mm），保護柱：Ion Pac AS11（50 mm × 4 mm），淋洗液：20 mmol/L KOH 溶液，流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃，檢測器：電導(dǎo)檢測器，進樣體積：25 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標準品貯備液的制備分別精密稱取醋酸鈉、乙二胺四醋酸二鈉、亞硝酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉、硫代硫酸鈉、硫酸鈉與亞硫酸氫鈉對照品適量，加超純水制成對照品貯備液（濃度與折算見表1，乙二胺四醋酸二鈉以EDTA 計）。

表1 標準品貯備液的濃度折算表

2.2.2 供試品溶液的制備取本品一支，用超純水溶解并轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 標準曲線溶液的制備及線性考察分別精密量取適量各標準品貯備液，置同一容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，配制成相應(yīng)濃度的標準曲線溶液，見表2?；旌蠈φ掌啡芤弘x子色譜圖，見圖1，各成分分離度良好。線性考察結(jié)果良好，見表3。

表2 混合標準曲線溶液濃度

表3 線性關(guān)系與檢測限

2.3 專屬性試驗

分別取溶劑（超純水）、氨基酸原料溶液（取氨基酸原料，按處方量配制混合氨基酸溶液）與復(fù)方氨基酸注射液（18AA），同法測定。結(jié)果：溶劑對樣品陰離子測定均無干擾，氨基酸對照品溶液僅檢測出氯離子，樣品溶液色譜圖中各檢出陰離子峰分離度良好。方法專屬性良好，見圖2。

2.4 穩(wěn)定性試驗

取混合對照品溶液5 間隔24 h 進樣，比較結(jié)果。亞硫酸氫根離子峰有較明顯減小，硫酸根離子峰明顯增大，其余陰離子穩(wěn)定，見圖3。

因亞硫酸氫根在水中不穩(wěn)定，對亞硫酸氫根標準品貯備液進行穩(wěn)定性試驗。從結(jié)果可知亞硫酸氫根離子在水中會部分轉(zhuǎn)化為硫酸根離子，且隨放置時間增長而增加，見圖4。

樣品由于長期存放，添加的亞硫酸氫根離子同樣會部分轉(zhuǎn)化成硫酸根離子，從用藥的安全性考慮應(yīng)測定硫酸鹽與亞硫酸氫鹽的總和［7］，試驗結(jié)果見表4。

2.5 精密度試驗

取六份混合對照品溶液5 分別進樣，比較結(jié)果（硫酸鹽與亞硫酸鹽按總量計），精密度良好，見表5。

2.6 回收率試驗

分別稱取氨基酸原料藥（混合）12 份約50 mg，置100 mL 量瓶中，加適量高純水溶解，分別精密加入各陰離子貯備溶液0.5、1.0、2.0 mL，加高純水稀釋至刻度，搖勻，同法測定?；厥章式Y(jié)果良好，結(jié)果見表6。

表4 亞硫酸氫根標準貯備液穩(wěn)定性試驗結(jié)果

表5 精密度試驗結(jié)果（n=6）

表6 加標回收率測定結(jié)果 %

2.7 檢測限試驗

分別精密量取1 mL 混合對照溶液2 置5、25、50 mL 量瓶中，加高純水稀釋至刻度，搖勻，同法測定。分別得各陰離子檢出限濃度，見表3。

3 結(jié)果分析

本次共選取5 家企業(yè)樣品（制劑A～E），各抽取三批進行測定，測定結(jié)果（三批均值，見表7）。測定結(jié)果與理論值均存在一定差異。其中：（1）原料檢測結(jié)果氯離子與理論值一致，其余離子均未檢出。（2）制劑中氯離子檢測結(jié)果均高于處方量。根據(jù)處方，氯離子主要來源于原料中鹽酸精氨酸、鹽酸賴氨酸與鹽酸組氨酸。其中一家企業(yè)含量明顯高于處方量，推測來源：①工藝中調(diào)節(jié)pH 時使用帶入；②使用注射用水中帶入。天然水體中含有大量常規(guī)離子如氟離子、氯離子、硝酸鹽、硫酸鹽等以及其他可能的污染物。大量研究表明，對水體進行深度處理的常規(guī)消毒工藝如臭氧和二氧化氯等消毒技術(shù)的應(yīng)用也越來越廣泛，其中氯化消毒是我國的主要飲用水消毒方法［9］。然而,消毒劑和飲用水中的天然有機物和無機物反應(yīng)可生成溴酸鹽、氯酸鹽和鹵代乙酸等消毒產(chǎn)物；③本品包裝使用丁基膠塞，丁基膠塞中含有氯［10］，在產(chǎn)品貯存過程可能產(chǎn)生微量遷移。（3）亞硫酸氫根離子檢測，5 家制劑含量在59%～96%之間，均符合現(xiàn)行藥典標準［10］規(guī)定（不得過標示量的110.0%），但計算亞硫酸氫根離子與硫酸根離子總量卻有4 家均超過了110%，說明在添加亞硫酸氫鈉時可能存在實際添加量高于處方量的情況?，F(xiàn)有藥典標準使用紫外-可見分光光度法檢測亞硫酸氫根含量，雖能有效監(jiān)控溶液中亞硫酸氫根的含量，但從離子色譜法檢測結(jié)果來看，仍存在一定的隱患。（4）磷酸根離子5 家均有微量檢出，但原料溶液中未有檢出，推測為藥品包裝中產(chǎn)生的微量遷移。

表7 樣品測定結(jié)果（n=3） mg/mL

4 結(jié)論

本次實驗研究探討了離子色譜法對復(fù)方氨基酸注射液（18AA）多種陰離子同時進行分離測定。方法需要樣品量少、自動化程度高，精密度、準確度及回收率均較滿意，為該品種提供了一種較為新穎的質(zhì)量控制手段，具有較好的參考和實用價值。