廖跟東 梁素聯(lián) 王金含

（廣西田東縣動物疫病預(yù)防控制中心 531500）

動物寄生蟲病的診斷，是在進行流行病學(xué)調(diào)查和臨床診斷的基礎(chǔ)上，最后通過實驗室檢查出病原體而確診。而寄生蟲病實驗室檢查方法很多，不同種類的寄生蟲病其檢查方法亦不同。本人2010～2019 年間從事寄生蟲病糞便檢查診斷工作，現(xiàn)將實驗室糞便檢查的方法及體會淺談如下，供大家參考。

1 糞便的采集和保存

被檢便應(yīng)該是新鮮而未被污染的，最好從動物直腸直接采取。小動物采集自然排出的新鮮糞便，從糞便的中間或上部采集，采集的糞便依次編號，并將其裝入清潔的容器內(nèi)。采集用具應(yīng)每采一份，清洗一次，以防交叉污染。采集的糞便應(yīng)盡快檢查，不能立即檢查的應(yīng)放在陰暗處或冰箱內(nèi)保存。需要長期保存的可將其浸入50～60℃的5%～10%福爾馬林溶液中，使糞便中的蟲卵失去生活能力，起固定作用，防止蟲卵變形。

2 糞便檢查方法

2.1 漂浮法

主要對線蟲卵、絳蟲和球蟲卵囊有很好的檢出效果。

漂浮法最常用的漂浮液是飽和鹽水溶液，其制法是將食鹽加入沸水中，直至食鹽不再溶解生成沉淀為止(1L 水大約加入食鹽400g)，即為飽和鹽水溶液。然后用4 層紗布濾過后，冷卻備用。

2.1.1 飽和鹽水漂浮法

取5～10g 糞便置于100～200ml 燒杯(或塑料杯) 中，加入少量漂浮液攪拌混合后，繼續(xù)加入約20 倍的漂浮液。然后將糞液用金屬篩或紗布濾入另一杯中，舍去糞渣，靜置濾液。經(jīng)40min 左右，用直徑0.5～1cm 的金屬圈平著接觸濾液面，提起后將黏著在金屬圈上的液膜抖落于載玻片上，如此多次取不同部位的液面后，加蓋玻片鏡檢。

2.1.2 試管浮聚法

取2g 糞便置于燒杯中或塑料杯中，加入約15 倍的漂浮液攪勻，用紗布濾入另一杯中。將濾液倒入直立的平口試管中，直到液面接近管口為止，然后用滴管補加糞液，滴至液面凸出試管為止。靜置30min 后，用清潔蓋片輕輕接觸液面，提起后放于載玻片上鏡檢，加蓋玻片鏡檢。

2.2 沉淀檢查法

沉淀法多用于吸蟲病和棘頭蟲病的診斷。

2.2.1 徹底洗凈法

取糞便5～10g 置于燒杯（或塑料杯中），加10～20 倍清水充分混勻，再用金屬篩或紗布濾過到另一燒杯中，濾液靜置20min 后傾去上層液，再加清水與沉淀物重新混勻、靜置。如此反復(fù)水洗沉淀物多次，直至上清液透明為止。最后傾去上清液，用吸管吸取沉淀物滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。

2.2.2 離心沉淀法

取糞便3g 置于小杯中，加10～15 倍水?dāng)嚢杌靹颍瑢⒓S要液用金屬篩或紗布濾入離心管中，在電動離心機轉(zhuǎn)數(shù)為2500～3000r/min，離心沉淀1～2min。取出后傾去上層液，再加水混勻，離心沉淀。如此離心沉淀2～3 次，最后傾去上層液，用吸管吸取沉淀物滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。

2.3 幼蟲期孵化法

此法主要用于鑒別蟲的種類。取一滅菌的培養(yǎng)皿，在培養(yǎng)皿底部加濾紙一張，然后將欲培養(yǎng)的便加水調(diào)成硬糊狀，塑成半球形，放在培養(yǎng)皿內(nèi)的紙上，使半球形糞便的頂部略高出平皿邊緣，使加蓋時與培養(yǎng)皿蓋相接觸。將此培養(yǎng)皿置于25℃恒溫箱中，使底部的墊紙始終保持潮濕狀態(tài)，經(jīng)7d 后，多數(shù)線蟲蟲卵即可發(fā)育成第三期幼蟲，并集中于培養(yǎng)皿蓋上的水滴中。將幼蟲析出，置于載玻片上，放在顯微鏡下檢查。

2.4 蟲卵計數(shù)法

此法主要用于判斷寄生蟲感染的強度。取新鮮便1g 置于小杯中，加入10 倍量的水?dāng)嚢杌靹?，用金屬篩過濾入試管中，靜置30～60min 后傾去上層液，再加飽和鹽水?；靹蚝笥玫喂艿渭语柡望}水到管口，然后管口覆以蓋玻片。經(jīng)20min 取下蓋玻片，放在載玻片上鏡檢。計算蟲卵的數(shù)量。每份便用同樣的方法檢查3 片，其總和為1g 糞便的蟲卵數(shù)（EPG）。

2.5 毛蚴孵化法

此法適用于鑒別吸蟲的種類。取便約30g 左右，先經(jīng)沉淀法濃集處理后，將糞便沉渣倒入三角燒瓶內(nèi)，加清水（城市中需用去氯水） 至瓶口，在20～26℃的條件下進行解化，經(jīng)4～6h后用肉眼或放大鏡觀察。如見水面下有白色點狀物作直線來往游動，即是毛蚴。必要時也可用吸管將毛蚴吸出鏡檢。如無毛蚴，每隔1～5h 觀察記錄一次。氣溫高時，毛蚴可在短時間內(nèi)解出，因此，在夏季要用1.0%～1.2%食鹽水成冰水沖洗糞便，最后一次才改用室溫清水，防止毛蚴過早孵出。

3 體會

糞便檢查的方法有很多種，應(yīng)根據(jù)不同寄生蟲病的種類，選擇檢出效果好的檢測方法。

采集的糞便最好直接從動物直腸采取，這樣新鮮又不被污染。采集的糞便應(yīng)盡快檢查，放置過久易導(dǎo)致蟲卵破壞。不能立即檢查的應(yīng)用密封袋單獨包裝好放在陰暗處或冰箱內(nèi)保存，以防交叉污染。

要長期保存的糞便可將其浸入50～60℃的5%～10%福爾馬林溶液中，使糞便中的蟲卵失去生活,并起固定蟲卵作用，防止變形難以識別。裝糞便的容器要清潔、干燥、無吸水和滲漏，以防交叉污染。

飽和鹽水漂浮法漂浮時間應(yīng)20～30min 為宜，時間過短蟲卵不完全漂浮，有時可能找不到蟲卵。時間過長造成蟲卵變形、破裂，難以識別。檢查蟲卵時，先用低倍鏡順序查蓋玻片下所有部分，發(fā)現(xiàn)疑似蟲卵物時，再用高倍鏡仔細觀察。