張桂銘

【摘要】目的 用直接接種法對醫(yī)療器械沖洗管進行無菌檢查，比較整體浸提和剪開分段管腔浸提兩種方式對檢測結(jié)果的影響。方法采用ISO 11737-2：2009標(biāo)準(zhǔn)方法，對試驗樣品進行無菌檢查試驗。

【關(guān)鍵詞】管腔醫(yī)療器械? 無菌? 方法? 比較

在科技飛速發(fā)展的今天，輔助治療人類疾病的醫(yī)療器械也層出不窮，醫(yī)學(xué)及生物學(xué)對于醫(yī)療器械尤其是無菌醫(yī)療器械的質(zhì)量風(fēng)險控制也日趨嚴(yán)格，本文就沖洗管，筆者對采用整體浸提和剪開分段管腔浸提兩種方法下的無菌檢查進行了比較。

一、材料與試劑

（一）培養(yǎng)基及試劑

氯化鈉（國藥集團化學(xué)試劑有限公司;批號：20151123），吐溫80（國藥集團化學(xué)試劑有限公司;批號：20160314），大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基SCDM（青島海博生物技術(shù)有限公司;批號：20180522），胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基TSA（北京陸橋技術(shù)股份有限公司;批號：180820），沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基SDA（北京陸橋技術(shù)股份有限公司;批號：181127）

（二）陽性菌株

金黃色葡萄球菌〔ATCC 6538〕：第5代;枯草芽孢桿菌〔ATCC 6633〕：第5代;白色念珠菌〔ATCC 10 231〕：第5代;黑曲霉〔ATCC 16 404〕：第5代;來源自美國菌種保藏中心。

（三）試驗樣品

某公司生產(chǎn)的沖洗管（同一批號;規(guī)格：4米;滅菌方式：環(huán)氧乙烷）。

（四）其他材料

電子天平JM-A2003（余姚紀(jì)銘稱重校驗設(shè)備有限公司）;潔凈工作臺SW-CJ-2F（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）;生物安全柜BHC-1300IIA2（阿爾泰實驗室設(shè)備有限公司）;生化培養(yǎng)箱SHP-150（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）;生化培養(yǎng)箱SHP-450（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）;立式壓力蒸汽滅菌器YXQ-LS-100SII（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）;移液器（Thermo Scientific，100-1000 ml，20-200 ml，10-100 ml）;滅菌吸頭（250、1000ml）;WHIRL-PAKR SAMPLE BAGS（B01447）。

二、方法與結(jié)果

（一）無菌試驗方法驗證

（1）標(biāo)準(zhǔn)菌株準(zhǔn)備：取枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉傳代培養(yǎng)，制成小于100cfu/ml的菌懸液備用，用標(biāo)準(zhǔn)平板計數(shù)法進行微生物計數(shù)（cfu）;

（2）試驗樣品組：以無菌操作將試驗樣品（SIP=1）轉(zhuǎn)移到1000ml SCDM培養(yǎng)基中，接種標(biāo)準(zhǔn)菌株≤100cfu;試驗樣品接種方式分為兩種：整件浸提和剪開分段浸提。

（3）陽性對照：取滅菌1000ml SCDM接種標(biāo)準(zhǔn)菌株≤100cfu;

（4）陰性對照：取滅菌產(chǎn)品（SIP=1） 以無菌操作轉(zhuǎn)移到1000ml SCDM培養(yǎng)基中;

（5）空白對照：取滅菌1000ml SCDM直接培養(yǎng);

（6）培養(yǎng)條件：30±2℃培養(yǎng)≤5天;結(jié)果可接受標(biāo)準(zhǔn)：試驗樣品組可見微生物生長;陰性對照和空白對照無菌生長;陽性對照可見微生物生長;

（7）試驗結(jié)果：陰性對照和空白對照無菌生長;陽性對照可見微生物生長;兩種浸提方式下的試驗樣品組在規(guī)定培養(yǎng)時間內(nèi)均可見微生物生長。在本試驗條件下，整件浸提和剪開分段浸提的試驗樣品中均未檢出影響微生物生長的釋出物，該試驗方法（整體浸提和剪開分段浸提）可以作為試驗樣品的常規(guī)無菌檢測方法。

（二）無菌檢查

（1）試驗樣品：無菌操作將試驗樣品沖洗管（SIP=1）轉(zhuǎn)移至1000ml SCDM培養(yǎng)基中，30±2℃培養(yǎng)14天;試驗樣品接種方式分為兩種：整件浸提和剪開分段浸提。

（2）陰性對照：1000ml SCDM培養(yǎng)基同2.2.1培養(yǎng);

（3）陽性對照：無菌操作在含有1件樣品（SIP=1）的SCDM里加金黃色葡萄球菌〔ATCC 6538〕≤100cfu，30±2℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)≤3天;

（4）每天觀察是否有菌生長;

（5）結(jié)果：在本試驗條件下，陰性對照無菌生長，陽性對照在規(guī)定時間內(nèi)有菌生長;整體浸提（SIP=1）的10件樣品中發(fā)現(xiàn)有2件陽性，剪開分段浸提（SIP=1）的10件樣品中發(fā)現(xiàn)有10件陽性。

三、討論

通過兩種方式（整體浸提和剪開分段浸提）對樣品進行無菌檢查的結(jié)果，我們可以看出剪開分段浸提的直接接種法無菌檢查試驗發(fā)現(xiàn)的陽性樣品明顯多于整體浸提的;我們已知用于檢測的試驗樣品是同一批號，且抽樣隨機，即用于兩種方式檢查的樣品應(yīng)出現(xiàn)類似數(shù)量的陽性結(jié)果，于是我們比較了兩種浸提接種方式的區(qū)別。由于樣品沖洗管規(guī)格有4米長，在整體浸提無菌檢查時，其在無菌取樣袋中是繞成7-8圈的狀態(tài)，培養(yǎng)基不能浸入沖洗管的全部內(nèi)腔，即有一部份內(nèi)腔并沒有與培養(yǎng)基接觸，假如這些內(nèi)腔有微生物，那就不能被檢測出來;而剪開分段浸提的方式利用無菌剪刀無菌操作將4米長的沖洗管剪成了20cm左右的片段，每一段管的內(nèi)腔都更容易被培養(yǎng)基浸沒，實驗中此方式下的沖洗管樣品的表面和內(nèi)腔均被培養(yǎng)基完全浸沒。相較于整體浸提，剪開分段浸提對沖洗管的可能存在微生物的檢出更全面，換言之，對沖洗管用整體浸提進行無菌檢查有假陰性的風(fēng)險。

另一方面，從醫(yī)療器械的滅菌方式角度分析，沖洗管類的醫(yī)療器械一般采用環(huán)氧乙烷滅菌，已知環(huán)氧乙烷滅菌程序包括預(yù)熱、預(yù)濕、抽真空、通入汽化環(huán)氧乙烷達到預(yù)定濃度、維持滅菌時間、消除滅菌柜內(nèi)環(huán)氧乙烷氣體、解析;就滅菌效果而言，越是有管腔的非實體醫(yī)療器械就越難達到符合要求的滅菌效果，因為對于將器械繞成7-8圈進行包裝的沖洗管樣品，其內(nèi)腔比表面更難與環(huán)氧乙烷密切接觸，從而達到滅菌的效果，即在無菌屏障系統(tǒng)符合要求下，此類器械的內(nèi)腔中有存活微生物的概率比其表面存在微生物的概率要大。

因此對于管腔類的醫(yī)療器械，尤其是含有較長管腔類的醫(yī)療器械，我們在做無菌檢查時，需無菌操作用剪開分段等方法使醫(yī)療器械的內(nèi)管腔內(nèi)都能浸入培養(yǎng)基，這樣才能更全面的檢測出試驗樣品表面和管腔中可能存在的微生物，避免假陰性的出現(xiàn)，減少醫(yī)療風(fēng)險的發(fā)生。

參考文獻：

[1]Sterilization of Medical Devices - Microbiological Methods - Part 2： Tests of Sterility Performed in the Definition， Validation and Maintenance of a Sterilization Process （ISO 11737-2：2009）.

[2]醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗方法 第2部分：生物學(xué)試驗方法 （GB/T 14233.2-2005）.