亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        觀察環(huán)境中分離的銅綠假單胞菌噬菌體對燒傷感染小鼠的治療作用

        2020-09-02 09:11:48張歡歡
        關(guān)鍵詞:治療作用銅綠假單胞菌噬菌體

        張歡歡

        【摘要】目的 觀察燒傷感染小鼠環(huán)境中分離的銅綠假單胞菌噬菌體的治療作用。方法 購買鄭州大學(xué)實驗動物中心提供的健康雌性SPF級ICR小鼠,建立燒傷感染模型,觀察噬菌體療效,分析滅活噬菌體的治療作用、非宿主菌感染小鼠噬菌體的治療作用,研究噬菌體體內(nèi)代謝,然后分離鑒定噬菌體,確定細(xì)菌最小致死劑量,分析噬菌體Pap-co1治療效果的時間依賴性、滅活噬菌體Pap-co1療效、Pap-co2燒傷感染小鼠噬菌體的治療作用。結(jié)果 對燒傷小鼠進行感染,途徑為稀釋新鮮培養(yǎng)的細(xì)菌Pap-co1為1×103-1×108PFU/ml,然后將第2 d、5 d小鼠的生存率選取出來,其中第5 d 1×106-1×108CFU/ml劑量組小鼠均死亡,因此絕對最小致死劑量為1×106CFU/ml。滅活噬菌體組、對照組小鼠第2 d、5 d的生存率80.0%、20.0%,80.0%、0均顯著低于正常噬菌體組100.0%、100.0%(P<0.05),但滅活噬菌體組、對照組小鼠第2 d、5 d的生存率之間的差異均不顯著(P>0.05)。Pap-co2組、對照組小鼠第2 d、5 d生存率60.0%、0,80.0%、0均顯著低于Pap-co1組100.0%、100.0%(P<0.05),但Pap-co2組、對照組小鼠第2 d、5 d生存率之間的差異均不顯著(P>0.05)。給予小鼠腹腔注射噬菌體Pap-co1后第一時間被吸收,1h內(nèi)達到最高峰,24h內(nèi)維持噬菌體濃度在104左右,維持在一定濃度范圍內(nèi)一定時間后逐漸降低。結(jié)論 燒傷感染小鼠環(huán)境中分離的銅綠假單胞菌寬噬噬菌體的治療作用明顯,同時具有較低的抗原性。

        【關(guān)鍵詞】環(huán)境中分離;銅綠假單胞菌;噬菌體;燒傷感染小鼠;治療作用

        【中圖分類號】R644 【文獻標(biāo)識碼】A 【文章編號】ISSN.2095.6681.2020.21..02

        在醫(yī)院感染病原菌中,銅綠假單胞菌占有重要地位,在呼吸科革蘭陰性菌中位居首位。近年來,銅綠假單胞菌耐藥性在大量應(yīng)用各種廣譜抗菌藥的作用下日益提升。在我國,在所有醫(yī)院感染革蘭陰性桿菌中,銅綠假單胞菌位居首位,對碳青霉烯類抗生素的耐藥性已經(jīng)在30%以上,具有極為復(fù)雜的耐藥機制。相關(guān)醫(yī)學(xué)統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示[1],合并銅綠假單胞菌感染的死亡燒傷患者占總數(shù)的50%。因此,臨床很有必要深入研究噬菌體療法這一抗感染治療方法。本研究觀察了燒傷感染小鼠環(huán)境中分離的銅綠假單胞菌噬菌體的治療作用。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        購買上海新興化工試劑研究所生產(chǎn)的瓊脂粉,杭州天和廠生產(chǎn)的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,Amersco公司生產(chǎn)的CsCl,自行配置LB培養(yǎng)液;河南省人民醫(yī)院檢驗科分離并鑒定的21株銅綠假單胞菌;從龍湖鎮(zhèn)居民生活用水下水道中分離噬菌體,經(jīng)噬菌斑、電鏡觀察鑒定。擴增培養(yǎng)噬菌體后離心,途徑為經(jīng)CsCl密度梯度,并純化、生理鹽水稀釋,對滴度進行測定,在此過程中將噬菌斑充分利用起來,稀釋到1×1010PFU/ml待用,稀釋過程中將生理鹽水充分利用起來;購買鄭州大學(xué)實驗動物中心提供的健康雌性SPF級ICR小鼠,周齡6~8周,平均(7.0±1.0)周;體重18-22g,平均(20.0±2.0)g。

        1.2 方法

        1.2.1 燒傷感染模型建立

        在10 ml LB培養(yǎng)液中按1:100比例稀釋新鮮培養(yǎng)的銅綠假單胞菌,繼續(xù)培養(yǎng)到對數(shù)生長期,濃度為1×108CFU/ml,A50為0.5左右。分實驗小組為7組,每組5只,將其背部毛剃掉,面積為小鼠體表面積的10%,直徑為2.5 cm的圓形,讓小鼠吸入乙醚對其進行麻醉,待其無足趾反射后在鼠夾上固定小鼠,用90℃的熱水將其燙傷,持續(xù)10 s,為了對燙傷引發(fā)的體液丟失進行補充,將0.1 ml不同濃度的銅綠假單胞菌皮下注射到燒傷部位,同時給予其皮下注射0.5 ml生理鹽水,將燒傷感染模型建立起來,給予對照組注射等量生理鹽水,對小鼠進行5 d觀察,將最小致死劑量(LD100)設(shè)定為1組小鼠全部死亡的最小劑量,并將其設(shè)定為燒傷動物模型的感染劑量。

        1.2.2 噬菌體療效觀察

        分實驗小鼠為6組,每組5只,開始計時時間為建立燒傷感染模型后,感染后即刻、3 h、6 h、12 h、24 h分別給予其腹腔注射0.1 ml效價為1×1010PFU/ml的噬菌體。每組均將對照組設(shè)置出來,給予其注射等劑量生理鹽水,將小鼠生存率記錄下來。

        1.2.3 滅活噬菌體的治療作用分析

        加熱噬菌體30 min,條件為在90℃的溫度下,效價為1×1010PFU/ml,滅活。分實驗小鼠為3組,每組5只,分別給予其注射0.1 ml噬菌體、滅活噬菌體、給予其注射等量生理鹽水(對照組),時間為燒傷感染后即刻。

        1.2.4 非宿主菌感染小鼠噬菌體的治療作用分析

        分實驗小鼠為3組,分別給予其注射0.1 ml生理鹽水+0.1 ml該噬菌體宿主菌(對照組)、0.1 ml噬菌體+0.1 ml噬菌體宿主菌、0.1 ml噬菌體+0.1 ml噬菌體宿主譜以外的銅綠假單胞菌,時間為燒傷后,將小鼠生存率記錄下來。

        1.2.5 噬菌體體內(nèi)代謝研究

        給予實驗小鼠腹腔注射1 ml高濃度噬菌體,時間為開始計時前,分別在第1 h、6 h、12 h、18 h、24 h、30 h、36 h、42 h、48 h將血液從小鼠斷尾取出,對噬菌體效價進行測定,在此過程中運用噬菌斑法,重復(fù)實驗3次,將濃度時間曲線繪制出來。

        1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

        計數(shù)資料用率表示,用x2檢驗。采用SPSS 21.0,檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

        2 結(jié) 果

        2.1 噬菌體分離鑒定

        將宿主菌設(shè)定為銅綠假單胞菌,將3株銅綠假單胞菌噬菌體從下水道中分離出來,其中寬噬噬菌體1株,電鏡觀察為短尾噬菌體,直徑、尾長分別為45 nm、50 nm,裂解譜、噬菌斑大小分別為6株銅綠假單胞菌、2 mm,命名其為Pap-co1,將1株從6株宿主菌、宿主譜以外的銅綠假單胞菌選取出來,分別命名為Pap-co1、Pap-co2,,在實驗研究中應(yīng)用。

        猜你喜歡
        治療作用銅綠假單胞菌噬菌體
        不同富集培養(yǎng)方法對噬菌體PEf771的滴度影響
        高效裂解多重耐藥金黃色葡萄球菌的噬菌體分離及裂解酶的制備
        抗焦慮抑郁藥物對高血壓治療作用的臨床研究
        心胸外科銅綠假單胞菌的耐藥狀況及抗菌藥物的選擇應(yīng)用
        阿卡波糖聯(lián)合維格列汀對老年2型糖尿病的治療作用分析
        銅綠假單胞菌耐藥性分析
        阿米卡星霧化吸入在銅綠假單胞菌感染患者中的應(yīng)用
        依達拉奉聯(lián)合七葉皂苷鈉對腦出血的治療作用研究
        2010~2014年醫(yī)院銅綠假單胞菌的耐藥性分析
        副溶血弧菌噬菌體微膠囊的制備及在餌料中的應(yīng)用
        色欲人妻综合aaaaa网| 日本黑人人妻一区二区水多多 | 日本高清视频wwww色| 高中生粉嫩无套第一次| 极品诱惑一区二区三区| 久久精品国产亚洲av沈先生| 亚洲最大成人网站| 香蕉久久福利院| 中文字幕无码日韩欧毛| 国产精品午夜高潮呻吟久久av| 日本强伦姧人妻一区二区| 人妻少妇久久中文字幕一区二区| 亚洲另类欧美综合久久图片区| 日日噜噜夜夜久久密挑| 美女露出自己的性感大胸一尤内衣 | 久久av一区二区三区下| 女人被躁到高潮嗷嗷叫免| 欧美亚洲国产一区二区三区| 亚洲在AV极品无码天堂手机版| 国产内射视频在线播放| 久久av不卡人妻出轨一区二区| 国产精品久久777777| 99热精品成人免费观看| 国内精品久久人妻性色av| 中文字幕一区二区三区视频 | 亚洲av无码国产精品色午夜软件| 国精品无码一区二区三区在线| 91亚洲人成手机在线观看| 暴露的熟女好爽好爽好爽| 人妻精品久久久久中文字幕69| 亚洲 欧美 国产 日韩 精品| 亚洲嫩模一区二区三区视频| 91精品国产综合久久久密臀九色| 性高朝大尺度少妇大屁股| 国产精品视频yuojizz| 国产三级在线观看不卡| 少妇高潮av久久久久久| 丰满人妻妇伦又伦精品国产| 亚洲av伊人久久综合性色| 91超精品碰国产在线观看| 无遮挡又黄又刺激又爽的视频|