趙麗靜

【摘 ?要】目的：評(píng)價(jià)實(shí)時(shí)熒光PCR應(yīng)用于百日咳桿菌與百日咳抗體檢測(cè)的價(jià)值。方法：將2017年9月-2019年8月在我院確診為百日咳的56例患兒作為研究對(duì)象，采集患兒咽拭子，進(jìn)行百日咳桿菌實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)，采集患兒血液標(biāo)本進(jìn)行百日咳抗體IgM實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)檢測(cè)結(jié)果，以百日咳桿菌與百日咳抗體IgM均為陽(yáng)性作為百日咳診斷標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)計(jì)實(shí)時(shí)熒光PCR聯(lián)合檢測(cè)百日咳桿菌、百日咳抗體診斷百日咳的準(zhǔn)確率。結(jié)果：56例患兒百日咳桿菌的陽(yáng)性率為85.70%，百日咳抗體IgM的陽(yáng)性率為75.00%。實(shí)時(shí)熒光PCR聯(lián)合檢測(cè)兩者診斷百日咳的準(zhǔn)確率為73.21%。結(jié)論：實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)百日咳桿菌及百日咳抗體IgM對(duì)百日咳的臨床診斷具有輔助價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】實(shí)時(shí)熒光PCR;百日咳桿菌;百日咳抗體;臨床診斷

【中圖分類號(hào)】R440;R516.6 ? ? ?【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ? ? ?【文章編號(hào)】1672-3783（2020）08-0067-02

百日咳為感染百日咳桿菌而發(fā)生的一種急性呼吸道傳染病，發(fā)病后的主要臨床表現(xiàn)為陣發(fā)性痙攣性咳嗽，且伴有“雞鳴”樣吸氣性吼聲，病程較長(zhǎng)，可持續(xù)2～3個(gè)月，故稱為百日咳。長(zhǎng)期觀察發(fā)現(xiàn)，該疾病的潛伏期較長(zhǎng)，傳染性較強(qiáng)，延誤診治很容易造成小范圍流行[1]。因此，實(shí)現(xiàn)該疾病的早期臨床診治具有必要性。為進(jìn)一步提高該疾病的早期確診率，本研究探討實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)百日咳桿菌和百日咳抗體在百日咳臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)匯報(bào)研究?jī)?nèi)容如下：

1. 資料與方法

1.1一般資料

研究對(duì)象為2017年9月-2019年8月在我院確診為百日咳的56例患兒。百日咳臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)：有明顯的咳嗽癥狀、持續(xù)時(shí)間至少2周且伴有以下癥狀中的一項(xiàng)：（1）呈痙攣性咳嗽;（2）伴有“雞鳴”樣吸氣性吼聲;（3）無(wú)明顯誘因的咳嗽后嘔吐。56例患兒中，男患兒26例，女患兒30例，年齡5個(gè)月～3歲（1.06±0.26）歲。其家長(zhǎng)均事先對(duì)本研究知情，同意患兒參與研究。

1.2方法

1.2.1百日咳桿菌檢測(cè)

具體檢測(cè)過(guò)程為：使用棉拭子取患兒咽部分泌物，置于裝有無(wú)菌生理鹽水的試管中立即送檢。檢測(cè)儀器為熒光定量PCR擴(kuò)增儀（羅氏），檢測(cè)試劑盒購(gòu)自中國(guó)中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司，嚴(yán)格按照儀器及試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)操作。

百日咳桿菌結(jié)果判定：Ct值<38，且有擴(kuò)增曲線判定為陽(yáng)性，Ct值≥38或無(wú)擴(kuò)增曲線判定為陰性。

1.2.2百日咳抗體檢測(cè)

具體檢測(cè)過(guò)程為：使用真空抽血管采集患兒靜脈血3ml，待血液凝固后，將采血管置于血清離心機(jī)中，以4000r/min的速度離心10min，取上清液進(jìn)行百日咳抗體IgM。檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上?？道缮锟萍加邢薰荆瑖?yán)格按照儀器及試劑的說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)操作。

百日咳抗體IgM結(jié)果判定：濃度<14U/ml判定為陰性，反之判定為陽(yáng)性。

1.3觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)研究對(duì)象實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)百日咳桿菌和百日咳抗體IgM的陽(yáng)性率以及實(shí)時(shí)熒光PCR聯(lián)合檢測(cè)百日咳桿菌和百日咳抗體IgM診斷百日咳的準(zhǔn)確率。

診斷準(zhǔn)確率評(píng)價(jià)參考的金標(biāo)準(zhǔn)為一般資料中的百日咳臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，反映的是聯(lián)合檢測(cè)百日咳桿菌和百日咳抗體IgM診斷百日咳與金標(biāo)準(zhǔn)方法的符合程度。

2. 結(jié)果

2.1 56例患兒的百日咳桿菌和百日咳抗體IgM的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)結(jié)果

2.2實(shí)時(shí)熒光PCR聯(lián)合檢測(cè)百日咳桿菌和百日咳抗體IgM診斷百日咳的準(zhǔn)確率

經(jīng)統(tǒng)計(jì)得出，56例百日咳患兒中，共41例患兒的實(shí)時(shí)熒光PCR聯(lián)合檢測(cè)百日咳桿菌和百日咳抗體IgM診斷結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)診斷結(jié)果符合，診斷準(zhǔn)確率為73.21%（41/56）。

3. 討論

世界衛(wèi)生組織（WHO）的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，全球人群的百日咳發(fā)病率近年來(lái)有明顯的上升趨勢(shì)，不僅危害人群身心健康，同時(shí)也造成了較嚴(yán)重的醫(yī)療資源損失[2]。如何進(jìn)一步提高該疾病的早期確診率值得進(jìn)行探索。早期，病原學(xué)檢查被認(rèn)為是診斷百日咳的及標(biāo)準(zhǔn)，但經(jīng)長(zhǎng)期實(shí)踐應(yīng)用也發(fā)現(xiàn)諸多局限性，如病原微生物的培養(yǎng)過(guò)程易受到多種因素的影響，可能出現(xiàn)假陽(yáng)性、假陰性的結(jié)果，且檢驗(yàn)周期較長(zhǎng)，較易造成疾病的延誤診治。

實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)為現(xiàn)階段在我國(guó)較受關(guān)注的一種檢驗(yàn)方法，經(jīng)實(shí)踐證實(shí)多多種病原微生物及抗體均具有較高的敏感性和特異性。本研究應(yīng)用該方法檢測(cè)百日咳桿菌和百日咳抗體，并分析聯(lián)合檢測(cè)兩者對(duì)百日咳的診斷價(jià)值。結(jié)果顯示納入研究的百日咳患兒的百日咳桿菌陽(yáng)性率和百日咳抗體IgM陽(yáng)性率均高于70%，實(shí)時(shí)熒光PCR聯(lián)合檢測(cè)兩者診斷百日咳的準(zhǔn)確率為73.21%。根據(jù)上述研究結(jié)果得出，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)百日咳桿菌和百日咳抗體能夠?yàn)榧膊〉呐R床診斷提供輔助價(jià)值。百日咳桿菌的致病機(jī)制主要為其本身能夠合成一種特異性的毒素，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)能夠檢出該毒素，且能夠?qū)υ摱舅剡M(jìn)行定量[3]。因此，對(duì)百日咳桿菌具有較高的敏感性和特異性。百日咳抗體IgM近年來(lái)已被多個(gè)課題研究發(fā)現(xiàn)在百日咳發(fā)病早期具有較高的檢出率，且初次感染的患者多會(huì)在痙攣期出現(xiàn)該抗體。因此，近年來(lái)該抗體檢測(cè)在百日咳臨床診斷中的應(yīng)用較廣泛。本次研究中也發(fā)現(xiàn)，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)百日咳抗體IgM為陽(yáng)性的患兒多處于疾病的痙攣期。

綜上所述，實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)百日咳桿菌和百日咳抗體在百日咳臨床診斷中的應(yīng)用，有利于實(shí)現(xiàn)百日咳的早期診斷，值得各大醫(yī)院開(kāi)展應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

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