王桂梅

奧測(cè)世紀(jì)（天津）技術(shù)有限公司 天津 301700

中藥的農(nóng)藥殘留問(wèn)題嚴(yán)重阻礙了我國(guó)中藥走向國(guó)際市場(chǎng)，建立有效的農(nóng)藥殘留量測(cè)定方法是規(guī)范中藥材種植和管理的重要舉措。有機(jī)氯農(nóng)藥使用歷史長(zhǎng)，用量大，殘效期長(zhǎng)，易積蓄，造成慢性中毒，對(duì)人體危害極大。

黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，味甘而性微溫，具有健脾補(bǔ)中、清熱燥濕、補(bǔ)氣固表、利水消腫、脫毒排膿、斂瘡生肌等功效，臨床應(yīng)用廣泛。本文以2015年版《中國(guó)藥典》四部通則2341中第一法中第2部分的提取凈化方法，采用島津Inertcap5MS（0.25mm×30m，0.25μm）石英毛細(xì)管色譜柱，以電子捕獲檢測(cè)器對(duì)總六六六（α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC）、 總 滴 滴 涕（p,p’-DDE,p,p’-DDD,o,p’-DDT,p,p’-DDT）和五氯硝基苯的檢測(cè)進(jìn)行方法研究。

1 儀器與試藥

島津氣相色譜儀GC-2010Plus（配63Ni-ECD檢測(cè)器）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52A（上海亞榮生化儀器廠）；圓形水浴氮吹儀Jipad-yx-24s（上海旌派儀器有限公司）；電子天平FA2204B（上海天美天平儀器有限公司）；離心機(jī)3K15（SIGMA）；移液器（100-1000μl）（力辰）

乙腈、環(huán)己烷、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、異辛烷均為色譜純；無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉、無(wú)水硫酸鈉為分析純；純化水；BIOBeadsS-X3填料；弗羅里硅土固相萃取柱（1000mg；6ml）

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC,p,p’-DDE,p,p’-DDD,o,p’-DDT,p,p’-DDT標(biāo) 準(zhǔn) 物 質(zhì) 溶 液 各100μg/ml（帶有標(biāo)準(zhǔn)證書）

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱

島津Inertcap5MS(0.25mm×30m，0.25μm）；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度300℃；恒壓模式（87.5kPa）；不分流；進(jìn)樣體積1μl；柱溫：80℃保持1min，15℃/min速度升溫至170℃，保持3min，10℃/min的速度升溫至220℃，保持2min，5℃/min速度升溫至240℃，保持1min，8℃/min速度升溫至280℃，保持10min。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

（1）混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液分別取α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC,p,p’-DDE,p,p’-DDD,o,p’-DDT,p,p’-DDT，五氯硝基苯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液（100μg/ml）100μl置10ml容量瓶中，用異辛烷定容，得1.0μg/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液配制分別取上述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml、1ml、100μl、100μl、100μl置 10ml、5ml、10ml、5ml、100ml中，用異辛烷定容，分別得濃度為0.1μg/ml、0.05μg/ml、0.01μg/ml、0.005μg/ml、0.001μg/ml混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液。

2.3 樣品預(yù)處理取樣品

粉碎成粉末（過(guò)三號(hào)篩），取約1.5g，精密稱定，置于50ml聚苯乙烯具塞離心管中，加入水10ml，混勻，放置2小時(shí)，精密加入乙腈15ml，劇烈振搖提取1分鐘，再加入預(yù)先稱好的無(wú)水硫酸鎂4g與氯化鈉1g的混合粉末，再次劇烈振搖1分鐘后，離心（4000轉(zhuǎn)/分鐘）1分鐘，精密吸取上清液10ml，40℃減壓濃縮至近干，用環(huán)己烷-乙酸乙酯（1：1）混合溶液分次轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加環(huán)己烷-乙酸乙酯（1：1）混合溶液至刻度，搖勻，轉(zhuǎn)移至預(yù)先加入1g，無(wú)水硫酸鈉的離心管中，振搖，放置1小時(shí)，離心，取上清液5ml過(guò)凝膠滲透色譜柱（400mm×25mm，內(nèi)裝BIO-BeadsS-X3填料；以環(huán)己烷-乙酸乙酯（1：1）混合溶液為流動(dòng)相；流速為每分鐘5.0ml）凈化，收集18-30分鐘的洗脫液，于40℃水浴減壓濃縮至近干，加少量正己烷替換兩次，加正己烷1ml使溶解，轉(zhuǎn)移至弗羅里硅土固相萃取小柱[1000mg/6ml，用正己烷-丙酮（95：5）混合溶液10ml和正己烷10ml預(yù)洗]上，殘?jiān)谜和橄礈?次，每次1ml，洗液轉(zhuǎn)移至同一弗羅里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷-丙酮（95：5）混合溶液10ml洗脫，收集全部洗脫液，置氮吹儀上吹至近干，加異辛烷定容至1ml，渦旋使溶解，即得[1-2]。

線性關(guān)系考察精密吸取2.2.2中5份混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各1μl，注入氣相色譜儀，以峰面積f（x）為縱坐標(biāo)，濃度（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到各對(duì)照品的回歸方程。各物質(zhì)出峰情況見(jiàn)圖1，回歸方程結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 9種農(nóng)藥的回歸方程及相關(guān)系數(shù)

結(jié)果表明，9種農(nóng)藥在本色譜條件下，分離度均大于1.5，且在0.001μg/ml-0.1μg/ml范圍內(nèi)線性良好，將混合對(duì)照品溶液逐步稀釋，分別進(jìn)樣測(cè)定，至信噪比S/N=3左右時(shí)的濃度定為檢出限，檢出限均在0.0005-0.008μg/ml。

精密度考察取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0.01μg/ml，連續(xù)進(jìn)樣6次，各農(nóng)藥的6次進(jìn)樣的保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于0.56%，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3.2%。

加樣回收試驗(yàn)取同一批粉碎過(guò)篩的黃芪10份，1份為樣品空白，每3份添加同一濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加入濃度為0.01μg/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液300μl、600μl和濃度為0.05μg/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液600μl，按照2.3項(xiàng)下處理，每個(gè)樣品進(jìn)樣2次，計(jì)算回收率。添加量為0.003μg的平均回收率為75.2%，RSD%為2.8%，添加量為0.006μg的平均回收率為80.6%，RSD%為2.1%，添加量為0.03μg的平均回收率為92.5%，RSD%為1.8%[3]。

3 結(jié)語(yǔ)

從上述研究可知，采用島津Inertcap5MS（0.25mm×30m，0.25μm）建立的色譜條件檢測(cè)黃芪中9中有機(jī)氯農(nóng)殘，特異性良好，靈敏度高，線性檢測(cè)范圍寬，精密度和回收率良好，能夠準(zhǔn)確檢測(cè)黃芪中9種有機(jī)氯農(nóng)藥的的殘留量。