王培卿李文靜王金梅

河南大學(xué) 開封市保健食品功效成分研究重點實驗室，河南 開封 475004

靈芝孢子粉為多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(leyss. ex Fr.)Karst.或紫芝Ganoderma sineseZhao，Xu et Zhang的成熟孢子，是靈芝的生殖細(xì)胞，集中了靈芝的精華，主要含有多糖、腺嘌呤核苷、蛋白質(zhì)、酶類、硒元素等成分?，F(xiàn)代藥理研究表明靈芝孢子具有提高機體免疫力、加強血液循環(huán)、提高機體耐缺氧能力、保肝、解毒等功效[1]。近年來人們對靈芝孢子藥食兩用的研究越來越多，相關(guān)保健產(chǎn)品也不斷地被開發(fā)出來，但由于孢子粉質(zhì)量參差不齊，使其使用存在著有效性、安全性等問題。如水分超標(biāo)可導(dǎo)致其發(fā)生霉變，從而影響其藥效。此外，藥材在野外生長或栽培過程中可能會富集土壤中的重金屬[2-5]，在生態(tài)系統(tǒng)中持續(xù)積累，最終導(dǎo)致食物產(chǎn)生化學(xué)污染，從而導(dǎo)致各種疾病，威脅人類健康[6-9]。例如，金屬鎘[10]在腎臟和肝臟中積累超過10 a，影響人體的生理功能。課題組在檢測不同產(chǎn)地枸杞子中的金屬鎘水平就發(fā)現(xiàn)有兩批次樣品鎘超標(biāo)，所以對產(chǎn)自自然界的中藥材和食品進(jìn)行相應(yīng)的檢測是必要的[11]。

1 試驗儀器和材料

電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)有限公司)，馬弗爐(上海三相儀表儀器廠)，電熱板，ICP 電感耦合等離子發(fā)射光譜儀(美國Thermo公司)，AB135-S型十萬級電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司，瑞士)，硝酸為優(yōu)級純(昊華化學(xué)試劑有限公司，洛陽)，純凈水(杭州娃哈哈百利食品有限公司)，砷、汞、鉛、鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液(國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心)，高純氬氣 (開封氣體廠)。

從安徽亳州、河北安國等藥材市場共收集25批靈芝孢子粉(編號1～25)，其中14 批為未破壁樣品，11批為破壁靈芝孢子粉，經(jīng)鑒定僅有1批來源于多孔菌科植物紫芝，其余均為多孔菌科赤芝的干燥成熟孢子。

2 試驗方法

2.1 水分的測定方法

依據(jù)《GB 5009.3-2016食品中水分的測定》中的直接干燥法測定。取2.0 g試樣平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，試樣厚度不超過5 mm，置于104 ℃干燥箱中，瓶蓋斜支于瓶邊，干燥4 h后，蓋好取出，放入干燥器內(nèi)冷卻0.5 h后稱量。然后再放入104 ℃干燥箱中干燥1 h左右，取出，放入干燥器內(nèi)冷卻0.5 h 后再稱量。重復(fù)以上操作至前后兩次質(zhì)量差不超過2 mg，根據(jù)減失的重量，計算供試品中的含水量(%)。

2.2 總灰分的測定方法

依據(jù)《GB 5009.4-2016食品中灰分的測定》進(jìn)行測定。精密稱取供試品2.0 g，置于干燥至恒重的坩堝內(nèi)，先在電熱板上以小火加熱使試樣充分炭化至無煙，然后置于馬弗爐中，在(550±25)℃灼燒4 h。冷卻至200 ℃左右，取出，放入干燥器中冷卻30 min稱量，重復(fù)以上操作至前后兩次質(zhì)量相差不超過0.5 mg為恒重。根據(jù)殘渣重量，計算供試品中總灰分的含量(%)。

2.3 鉛鎘砷汞的含量檢測

2.3.1 樣品預(yù)處理

在采樣和制備過程中，所有玻璃器皿及消化罐均需要以20%硝酸浸泡24 h，用水反復(fù)沖沉，最后用去離子水沖洗干凈。精密稱取試樣0.5 g，將試樣置于聚四氟乙烯消化罐中，加入4 mL 硝酸浸泡1 h。再加入1 mL 過氧化氫，蓋上密封蓋，放入恒溫干燥箱中，調(diào)節(jié)恒溫干燥箱溫度140 ℃，加熱1 ～2 h;消解結(jié)束后，冷卻，將消解液轉(zhuǎn)移至50 mL 容量瓶中，用去離子水沖洗消化罐內(nèi)壁3次以上，稀釋至刻度，搖勻，待測。取4 mL 的硝酸和1 mL 過氧化氫按同一試樣消解方法做試劑空白試驗。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

鉛、鎘、砷元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液10 μg/mL:分別取元素標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.5 mL 與50 mL 的容量瓶中，用2%硝酸定容至刻度，此溶液濃度為10 mg/L。

汞元素標(biāo)準(zhǔn)溶液2 μg/mL:取元素標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.1 mL與50 mL的容量瓶中，用2%硝酸定容至刻度，此溶液濃度為2 mg/L。

取10 μg/mL 鉛、鎘、砷 元 素 混 合 標(biāo) 準(zhǔn) 溶 液5 mL，用硝酸(2+98)稀釋至50 mL，成為標(biāo)準(zhǔn)使用溶被，分取此標(biāo)準(zhǔn)使用溶液0、0.05、0.125、0.25、0.5和1.25 mL分別置于50 mL容量瓶中，用2%硝酸稀釋至刻度，此混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中各元素濃度，見表1。

表1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中各元素濃度單位:ng·mL-1

2.3.3 電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(ICP-OES)的測定條件

射頻功率:1.15 kW，輔助氣流量:1.0 L/min，冷卻氣體流量:13.0 L/min，蠕動泵轉(zhuǎn)速:45 r/min。

3 結(jié)果與討論

3.1 水分測定結(jié)果

見表2所示:破壁靈芝孢子粉中水分最高的是19號(10.04%)，其次是18 號(9.39%)，水分最低的是15號(3.59%);靈芝孢子粉中水分含量最高的是24號(12.79%)，其次是22號(10.48%)，水分含量最低是5號(6.21%)?！陡＝ㄊ≈兴庯嬈谥埔?guī)范》2012年版和《浙江省中藥飲片炮制規(guī)范》2015年版均規(guī)定靈芝孢子粉和破壁靈芝孢子粉的水分不得超過9%，而《安徽省中藥飲片炮制規(guī)范》2017年版規(guī)定破壁靈芝孢子粉的水分不得超過4.5%。結(jié)合上述標(biāo)準(zhǔn)，我們從市場上購買的14批靈芝孢子粉水分合格率為85.71%。破壁靈芝孢子粉水分平均值為7.08%。水分含量過高有可能會導(dǎo)致發(fā)霉、蟲蛀等變異現(xiàn)象的發(fā)生，故應(yīng)加強靈芝孢子粉及破壁靈芝孢子粉的水分監(jiān)測，從而保證其質(zhì)量的穩(wěn)定。

表2 25批靈芝孢子粉的含水率

3.2 灰分測定結(jié)果

《浙江省中藥飲片炮制規(guī)范》2015年版和《福建省中藥飲片炮制規(guī)范》2012年版都規(guī)定靈芝孢子粉及破壁靈芝孢子粉的總灰分不得超過3%。如表3所示，從市場上購買得到的14批靈芝孢子粉的總灰分均低于3%，11批破壁靈芝孢子粉中總灰分含量最高的19號樣品(長白山破壁靈芝孢子粉)，高達(dá)8.16%，其余樣品灰分均低于3%。

表3 25批靈芝孢子粉的灰分含量 / %

3.3 砷鎘汞鉛測定結(jié)果

3.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

砷、鎘、汞、鉛元素含量的回歸方程見表4。

表4 砷鎘汞鉛元素標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立單位:mg·kg-1

3.3.2 樣品的測定

《浙江省中藥飲規(guī)范片炮制》2015年版和《安徽省中藥飲片炮制規(guī)范》2017 年版都將靈芝孢子粉鉛、砷、鎘、汞規(guī)定為鉛含量≤2.0 mg/kg，砷含量≤1.0 mg/kg，鎘含量≤0.5 mg/kg，汞含量≤0.1 mg/kg。所有樣品均合格，見表5。

靈芝孢子粉采用傳統(tǒng)加工方法機械研磨破壁時，可能引入重金屬鎳和鉻，《浙江省中藥飲片炮制規(guī)范》2015年版和《安徽省中藥飲片炮制規(guī)范》2017年版中增加了對破壁孢子粉鎳和鉻的規(guī)定，鎳含量≤1.0 mg/kg，鉻含量≤2.0 mg/kg。

表5 25批樣品重金屬含量測定單位:mg·kg-1

4 結(jié)論

通過對25批靈芝孢子粉進(jìn)行水分、灰分及鉛、鎘、砷、汞含量的測定，我們發(fā)現(xiàn)14批靈芝孢子粉水分合格率為85.71%，其中破壁靈芝孢子粉水分平均值為7.08%。14批靈芝孢子粉的總灰分均低于3%，11批破壁靈芝孢子粉中總灰分除19號樣品外其余樣品灰分均低于3%。25批樣品中砷、鎘、汞和鉛的含量均達(dá)標(biāo)，未破壁與破壁孢子粉之間的鉛、鎘、砷、汞含量也無較大差異，說明破壁技術(shù)對鉛、鎘、砷、汞含量影響不大。