福建省微生物研究所 （福建 福州 350007）

內(nèi)容提要： 目的：建立測(cè)定他克莫司滴眼液含量的高效液相色譜法。方法：以高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定他克莫司含量，Agilent SB-CN柱為色譜柱；流動(dòng)相乙腈：0.1磷酸=35:65（V/V），柱溫40℃，流速2mL/min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。結(jié)果：在0.0248～0.2480mg/mL范圍內(nèi)（r=0.9997），他克莫司峰面積和質(zhì)量濃度呈良好線(xiàn)性關(guān)系，平均回收率為99.0%，RSD為0.79%。3批他克莫司滴眼液含量分別為99.3%、99.6%、100.1%。結(jié)論：該含量測(cè)定方法準(zhǔn)確度高，操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)結(jié)果具有較高穩(wěn)定性，專(zhuān)屬性強(qiáng)，在制劑質(zhì)量控制中有明顯效果。

他克莫司（Tacrolimus）又名FK506，是從鏈霉菌屬中分離出的發(fā)酵產(chǎn)物[1-3]。FK506在臨床上使用范圍較大，常用的比如一些自身免疫系統(tǒng)疾病治療，器官移植后排斥反應(yīng)抵抗治療，以及一些與免疫相關(guān)眼科疾病中也有應(yīng)用[4-8]。

1.儀器與試藥

高效液相色譜儀選擇的是安捷倫科技有限公司生產(chǎn)制造的Agilent1260，電子分析天平型號(hào)選擇為梅特勒托利多公司的XA105；他克莫司（福建科瑞藥業(yè)有限公司，批號(hào)：181001，含量：99.6%）；他克莫司對(duì)照品（福建科瑞藥業(yè)有限公司，批號(hào)：170801RS（1），含量：97.3%）；乙腈（色譜純，merck）。

2.方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

流動(dòng)相乙腈：0.1%磷酸，比例為35:65，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，色譜柱為Agilent SB-CN（4.6mm×250mm，5μm），柱溫40℃，流速2mL/min。

2.2 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

取FK506對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液以及他克莫司滴眼液，在色譜條件下進(jìn)樣20μL，分析色譜圖譜。

2.3 制備溶液

2.3.1 配制對(duì)照品溶液

取適量FK506對(duì)照品，在其中加入一定量的流動(dòng)相，超聲下進(jìn)行溶解稀釋定容，得到1mL中含0.1mg溶液，將制得溶液20μL加入到液相色譜儀中。

2.3.2 樣品溶液的配制

取一定量樣品溶液加人適量流動(dòng)相，超聲下進(jìn)行溶解稀釋定容，得到1mL中含0.1mg溶液，將制得溶液20μL加入到液相色譜儀中，記錄色譜圖。

2.3.3 配制陰性樣品溶液

依照處方配制不含他克莫司樣品，作為陰性樣品，照樣品溶液配制方法配制陰性樣品樣品溶液。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

樣品取6份后進(jìn)行測(cè)定含量數(shù)據(jù)值99.4%，RSD數(shù)據(jù)值為0.52%。試結(jié)果可見(jiàn)含量測(cè)定方法具有較好重復(fù)性。

2.5 中間精密度

樣品取6份后進(jìn)行測(cè)定，最終結(jié)果與重復(fù)性試驗(yàn)所得到的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得出含量數(shù)據(jù)99.3%，RSD數(shù)據(jù)為0.98%。結(jié)果可見(jiàn)樣品含量測(cè)定有較高精密度。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備

精密稱(chēng)取他克莫司對(duì)照品25.00mg，置25mL容量瓶中加流動(dòng)相稀釋到刻度。精密吸取0.5mL，1mL，2mL，3mL，4mL，5mL分別置20mL容量瓶中，加流動(dòng)相定容。分別進(jìn)樣20μL二次，以對(duì)照品進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算回歸方程y=7543.2x+351622，r=0.9997，他克莫司在0.0248～0.2480mg/mL范圍內(nèi)呈良好線(xiàn)性關(guān)系。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將試品溶液配制后對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)，在不同時(shí)段下測(cè)定，測(cè)定時(shí)段為0h、1h、2h、4h、8h和12h，峰面積RSD為0.56%，可見(jiàn)溶液具有較高穩(wěn)定性，在常規(guī)分析中適用性較強(qiáng)。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取含量已知的樣品9份，分為3批3份，每一批中分別加入FK506對(duì)照品儲(chǔ)備液0.8mL、1.0mL和1.2mL，放入10mL量瓶中，然后再在其中加入流動(dòng)相，稀釋到刻度位置后，依據(jù)樣品含量進(jìn)行測(cè)定，得出回收率99.0%，RSD數(shù)值0.79%。

2.9 樣品含量測(cè)定結(jié)果

精密稱(chēng)取他克莫司滴眼液3批樣品，在其中加入一定量的流動(dòng)相，在超聲狀態(tài)下進(jìn)行溶解，稀釋后定容，使得每1mL溶液中含量為0.1mg，在液相色譜儀中加入20μL制得液體，分析其色譜圖。3批樣品含量測(cè)定結(jié)果：批號(hào)20181201含量99.3%；20181202含量99.6%；20181203含量100.1%。

3.討論

本文建立了他克莫司滴眼液含量測(cè)定，方法為高效液相色譜測(cè)定，優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)在準(zhǔn)確度高，操作簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性較高，專(zhuān)屬性強(qiáng)，在制劑質(zhì)量控制中有明顯效果。