劉松濤,楊琳,王松,王雪嬌,張佳旭,侯阿嬌,姜海

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),黑龍江 哈爾濱 150040)

金銀花(LonicerajaponicaThunb.)是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥，始見于明代李時(shí)珍所著《本草綱目》，現(xiàn)已收入《中國(guó)藥典》。具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱之效，常用于治療癰腫、疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風(fēng)熱感冒和溫病發(fā)熱等癥[1],主要分布于山東，河南等地。近年來(lái)藥理研究表明，金銀花具有多種生物活性，如抗病毒[2]、抗炎[3]、抗氧化[4]、解熱[5]、抗菌[6]和保肝[7]的作用。

在以往的植物化學(xué)研究中，從金銀花中分離出黃酮[8]，環(huán)烯醚萜類[9]，咖啡?；鼘幩岷王10]，三萜皂苷[11]和腦苷脂類[12]化合物。本研究對(duì)金銀花的50%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位進(jìn)行化學(xué)成分研究，應(yīng)用硅膠柱色譜、RP-HPLC、NMR及MS等技術(shù)手段分離鑒定9個(gè)化合物，分別為咖啡酸(1)、 5-O-caffeoylquinic acid (2)、3,5-O-di-caffeoylquinic acid (3)、木犀草素(4)、木犀草苷(5)、Secologanoside 7-methyl ester (6)、Loganic acid (7)、Sweroside (8)、Secologanoside (9)。

1 儀器與材料

Bruker AV600-III spectrometers核磁共振波譜儀(德國(guó)Bruker公司);島津QP5000質(zhì)譜儀(島津，日本)；中壓液相色譜(法國(guó)Gilson公司，UV檢測(cè)器);高效液相色譜儀(美國(guó)waters公司，UV檢測(cè)器);ODS柱色譜填料(40～60 mm，日本YMC公司);制備色譜柱(YMC-Pack ODS-A，250 mm×20 mm,5 mm，日本YMC公司);柱色譜硅膠(200～300目，青島海洋化工廠);交聯(lián)葡聚糖LH-20，GF254(青島海洋化工廠);ODS(50 μm，日本YMC公司);提取分離所用溶劑均為分析純(廣東西隴公司)。金銀花藥材采購(gòu)于安徽亳州藥材市場(chǎng)，經(jīng)鑒定為正品。

2 藥材的提取與分離

干燥金銀花原藥材(5.0 kg)，50%乙醇熱回流提取2次，合并減壓回收溶劑。分別依次用石油醚(Petroleum ether, PE)、乙酸乙酯 (ethyl acetate, EA)與正丁醇(n-butyl alcohol, n-BuOH)進(jìn)行萃取，獲得EA部位干膏117.7 g，之后采用正相硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇不同比例梯度洗脫，經(jīng)TLC薄層板檢識(shí)，合并相同部分，得6組流份(Fr.1～6)。對(duì)Fr.3進(jìn)行二氯甲烷-甲醇不同比例梯度洗脫硅膠柱色譜，得化合物 1。同樣，對(duì)Fr.2采用石油醚-醋酸乙酯不同比例為溶劑反復(fù)硅膠柱色譜洗脫,合并相同部分，再經(jīng)凝膠柱色譜Sephadex LH-20純化,得化合物2、化合物9。對(duì)Fr.4組分采用凝膠柱色譜Sephadex LH-20(純甲醇洗脫)，薄層色譜(TLC)檢測(cè)合并相近組分，得到6個(gè)合并組分(Fr.4.1～4.6)；對(duì)Fr.4.3反復(fù)再采用正相硅膠、MCI、ODS柱色譜洗脫合并后，再采用制備液相分離純化，獲得化合物 7、化合物3。對(duì)Fr.4.4采用正相硅膠、Sephadex LH-20和MCI柱色譜(純甲醇洗脫)，獲得化合物4、化合物6。Fr.5經(jīng)凝膠柱色譜Sephadex LH-20柱色譜(甲醇洗脫)，進(jìn)而采用制備液相純化得到化合物5、化合物8。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

EI-MS: m/z 180[M]+, 白色粉末，1H-NMR (氘代甲醇, 400 MHz) δ: 7.52(1H, d, J=15.9 Hz, H-7), 7.04 (1H, d, J=1.6 Hz, H-2), 6.94 (1H, dd, J=1.6, 8.1 Hz, H-6), 6.77 (1H, d, J=8.1 Hz, H-5)，6.20 (1H, d, J=15.9 Hz, H-8)。13C-NMR (氘代甲醇,100 MHz) δ: 172.0(C-9), 149.7 (C-4), 147.0 (C-3), 146.5 (C-7), 128.0 (C-1), 123.1(C-6), 116.7 (C-8), 116.5(C-2), 116.2 (C-5)。核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]一致，鑒定化合物為咖啡酸。

3.2 化合物2

EI-MS: m/z 354[M]+, 白色粉末，1H-NMR(氘代甲醇, 400 MHz) δ: 7.57(1H, d, J=16.0 Hz, H-7′), 7.07(1H, d, J=1.8 Hz,H-2′), 6.92 (1H, dd, J=8.3, 1.8 Hz,H-6′), 6.77 (1H, d, J=8.3 Hz, H-5′), 6.27 (1H, d, J=16.0 Hz, H-8′), 5.39(1H, m, H-5), 4.12(1H, m, H-3), 3.68 (1H dd, J=8.4, 3.2 Hz, H-4), 2.18 (1H, m, H-2a), 2.15 (1H, m, H-6b), 2.01 (1H, m H-2b), 1.97 (1H, m,H-6a)。13C-NMR (氘代甲醇,100 MHz) δ: 180.5 (C-7), 169.1 (C-9′), 149.3 (C-4′), 146.6(C-3′,7′),127.5 (C-1′), 122.7 (C-6′), 116.2 (C-5′), 115.4 (C-2′), 115.2 (C-8′), 77.9 (C-1), 75.3 (C-4), 73.2 (C-5), 72.6 (C-3), 40.7 (C-6), 39.0 (C-2)以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]中的 5-O-caffeoylquinic acid對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為5-O-caffeoylquinic acid。

3.3 化合物3

EI-MS: m/z 516[M]+,白色粉末,1H-NMR (氘代甲醇, 400 MHz) δ: 7.50 (2H, d, J=15.8 Hz, H-7′, 7″), 7.00 (2H, dd, J=8.2, 1.8 Hz, H-6′, 6″), 6.94 (2H, d, J=1.8 Hz, H-2′, 2″), 6.76 (2H, d, J=8.2 Hz, H-5′, 5″), 6.25 (2H, d, J=15.8 Hz, H-8′, 8″), 5.38 (1H, m, H-5), 5.32 (1H, m, H-3), 3.71 (1H, dd, J=9.8, 3.1 Hz, H-4), 2.17 (1H, m, H-2a), 2.11 (1H, m, H-2b), 1.92 (1H, m, H-6a), 2.01 (1H, m, H-6b)。13C-NMR (氘代甲醇, 100 MHz) δ: 180.5 (C-7), 169.5 (C-9″), 168.2 (C-9′), 149.7 (C-4″), 148.3 (C-4′), 146.5 (C-7′), 146.4 (C-7″), 146.2 (C-3″), 145.5 (C-3′), 127.5 (C-1″), 127.7 (C-1′), 123.5 (C-6″), 123.2 (C-6′), 116.8 (C-5′), 116.5 (C-5″), 115.7 (C-8′), 115.5 (C-8″), 115.5 (C-2″),114.2 (C-2′), 77.7 (C-1), 73.2 (C-3), 75.2 (C-4), 72.6 (C-5), 40.4 (C-2), 39.2 (C-6),以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的基本一致, 故鑒定該化合物為3,5-O-di-caffeoylquinic acid。

3.4 化合物4

EI-MS: m/z 286[M]+,黃色粉末,1H-NMR (二甲基亞砜, 400 MHz) δ: 9.37(1H, s, 4′-OH), 10.6(1H, s, 7-OH), 9.88(1H, s, 3′-OH), 7.37(1H, s, H-2′), 7.41(1H, dd, J=8.6, 2.4 Hz, H-6′), 6.87(1H, d, J=8.6 Hz, H-5′), 6.41(1H, d, J=1.6 Hz, H-8), 6.16(1H, d, J=1.6 Hz, H-6)。13C-NMR (二甲基亞砜, 100 MHz) δ: 180.4 (C-4), 162.9 (C-7), 161.8 (C-2), 160.9 (C-9),156.8(C-5), 148.6 (C-4′), 145.2 (C-3′), 120.5 (C-1′), 118.2 (C-6′), 115.0(C-5′), 113.0 (C-2′), 102.5(C-10), 101.3 (C-3), 98.5(C-6), 93.1 (C-8)，以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]中的木犀草素對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為木犀草素。

3.5 化合物5

EI-MS: m/z 448[M]+,黃色粉末,1H-NMR (二甲基亞砜, 400 MHz) δ: 12.62(1H, s, 5-OH)，9.30(1H, s, 3′-OH), 9.80(1H, s, 4′-OH), 7.40(1H, dd, J=8.6, 2.5 Hz, H-6′), 7.36(1H, 1H, d, J=2.5 Hz, H-2′), 6.88(1H, d, J=8.6 Hz, H-5′), 6.70(1H, brs, H-8), 6.40(1H, d, J=1.6 Hz, H-6)，5.00(1H,d, J=7.4 Hz, H-1″)。13C-NMR (二甲基亞砜, 100 MHz) δ: 180.5 (C-4), 162.9 (C-2), 161.7(C-7), 160.2(C-5), 155.5(C-9), 148.6 (C-4′), 144.2 (C-3′), 120.1 (C-1′), 118.9 (C-6′), 115.0(C-5′), 112.8 (C-2′), 104.2(C-10), 103.5 (C-3), 100.1 (C-1″), 97.8(C-6), 94.1 (C-8), 73.0 (C-2″), 76.8 (C-3″), 70.0 (C-4″), 76.4 (C-5″), 61.7 (C-6″), 以上核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]木犀草苷基本一致，因此鑒定此化合物為木犀草苷。

3.6 化合物6

EI-MS: m/z 404[M]+,無(wú)色粉末,1H-NMR (氘代甲醇, 400 MHz) δ: 7.50(1H,brs, H-3), 5.64(1H,ddd, J=18.0,10.2, 5.6 Hz, H-8), 5.48(1H,d, J=4.2 Hz, H-1), 5.23(2H,m, H-10), 4.68(1H,d, J=7.6 Hz, H-1′), 3.34(1H,m, H-5), 3.35(3H,m, H-3′, 4′, 5′), 3.20(1H,m, H-2′), 3.69(3H,s,-OCH3), 3.86(1H,dd, J=12.0,2.0 Hz,H-6′a), 3.67(1H,m, H-6′b), 2.77(1H,m, H-9), 2.90(1H,dd, J=16.0,5.4 Hz, H-6b), 2.36(1H,dd, J=16.0,8.6 Hz, H-6a)。13C-NMR (氘代甲醇, 100 MHz) δ:97.3 (C-1), 153.0(C-3), 110.7(C-4), 29.0(C-5), 35.4(C-6), 174.2(C-7), 134.0 (C-8), 45.2(C-9), 120.5(C-10), 169.9(C-11), 100.2 (C-1′), 74.7 (C-2′), 78.0(C-3′), 71.7 (C-4′), 78.2(C-5′), 62.9 (C-6′), 52.5(-OCH3)以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]中的Secologanoside 7-methyl ester對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為Secologanoside 7-methyl ester。

3.7 化合物7

EI-MS: m/z 376[M]+,無(wú)色粉末,1H-NMR (氘代甲醇, 400 MHz) δ: 7.40(1H,d, J=1.6 Hz, H-3), 4.05(1H,m, H-7), 5.30(1H,d, J=4.4 Hz, H-1), 3.12(1H,m, H-5), 2.96(1H,m, H-6a), 1.66(1H,m, H-6b), 2.24(1H,m, H-9), 1.90(1H,m, H-8), 1.11(1H,d, J=7.4 Hz, H-10), 4.66(1H,d, J=7.8 Hz, H-1′), 3.30～3.50(4H,m,H-1′, 2′,3′,4′,5′), 3.92(1H,dd, J=11.8,2.0 Hz, H-6′ a), 3.65(1H,dd, J=11.8, 5.0 Hz,H-6′ b)。13C-NMR (氘代甲醇, 100 MHz) δ:97.7 (C-1), 152.3(C-3), 114.5(C-4), 32.9(C-5), 42.8(C-6), 75.2(C-7), 42.7 (C-8), 46.5(C-9), 14.8(C-10), 171.6(C-11), 100.0 (C-1′), 74.8 (C-2′), 77.9(C-3′), 71.5 (C-4′), 78.2(C-5′), 62.9 (C-6′), 以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]中的Loganic acid對(duì)照基本一致，故鑒定該化合物為L(zhǎng)oganic acid。

3.8 化合物8

EI-MS: m/z 358[M]+,無(wú)色粉末,1H-NMR (氘代甲醇, 400 MHz) δ: 7.51(1H,d, J=2.5 Hz, H-3), 5.50(1H,d,J=1.8 Hz, H-1), 5.42(1H,q, J=2.4,7.2,9.6 Hz, H-8), 5.23(1H,dd,J=1.8,10.2 Hz, H-10a), 5.32(1H,dd,J=1.8,18.2 Hz, H-10b), 4.39(1H,dq,J=2.0,4.5,6.6 Hz, H-7a), 4.35(1H,m, H-7b), 3.10(1H,m, H-5), 2.71(1H,qd,J=1.3,5.4 Hz, H-9), 1.60(1H,m, H-6a), 1.80(1H,m, H-6b), 4.77(1H,d,J=7.8 Hz, H-1′), 3.22-3.45(4H,m, H-2′, 3′, 4′, 5′), 3.62(1H, m, H-6′a), 3.86(1H, m, H-6′b)。13C-NMR(氘代甲醇, 100 MHz) δ:97.0 (C-1), 152.0(C-3), 105.9(C-4), 27.7(C-5), 28.0(C-6), 68.2(C-7), 133.1 (C-8), 43.1(C-9), 120.5(C-10), 165.3(C-11), 99.2 (C-1′), 74.0 (C-2′), 77.0(C-3′), 71.2 (C-4′), 77.7(C-5′), 62.2 (C-6′),核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]中的Sweroside基本一致，因此鑒定此化合物為Sweroside。

3.9 化合物9

EI-MS: m/z 390[M]+,無(wú)色粉末,1H-NMR (氘代甲醇, 400 MHz) δ: 7.42(1H,t, J=2.2 Hz, H-3), 5.42(1H,d, J=3.8 Hz, H-1), 5.54(1H,m,H-8), 5.25(1H,m, H-10a), 5.12(1H,m, H-10b), 4.68(1H,d, J=7.8 Hz, H-1′), 3.23(2H,m, H-6), 2.75(1H,dd, J=3.8,1.6 Hz, H-5), 2.17(1H, q, J=9.8 Hz, H-9), 3.01～3.41(4H, m, H-2′,3′,4′,5′), 3.83(1H, m, H-6′a), 3.62(1H, m, H-6′b)。13C-NMR (氘代甲醇, 100 MHz) δ:97.1 (C-1), 153.1(C-3), 110.2(C-4), 28.2(C-5), 34.8(C-6), 171.0(C-7), 134.1 (C-8), 44.7(C-9), 121.2(C-10), 176.0(C-11), 99.7 (C-1′), 74.0 (C-2′), 76.9(C-3′), 70.9 (C-4′), 77.8(C-5′), 62.2 (C-6′),核磁數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]中的Secologanoside基本一致，因此鑒定此化合物為Secologanoside。