余源嬋 于曉飛 張?jiān)? 商勝華 王小彥 楊茂發(fā)

摘要?為能更加有效地提高煙青蟲室內(nèi)人工飼養(yǎng)效率，滿足試驗(yàn)用蟲需要，在已報(bào)道的煙青蟲飼養(yǎng)方法基礎(chǔ)上，對(duì)煙青蟲卵的收集方法及初孵幼蟲轉(zhuǎn)移方法加以改進(jìn)。就利用人工氣候箱及自主配制飼料對(duì)煙青蟲進(jìn)行室內(nèi)人工飼養(yǎng)改進(jìn)的具體方法細(xì)則進(jìn)行介紹，探究一種適合煙青蟲小空間大量飼養(yǎng)的方法，以期為煙青蟲相關(guān)的研究提供足夠供試蟲體。

關(guān)鍵詞?人工氣候箱;飼養(yǎng)方法;改進(jìn);煙青蟲

中圖分類號(hào)?S433.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼?A

文章編號(hào)?0517-6611（2019）20-0148-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.20.039

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Study on the Large?amount Rearing of Helicoverpa assulta （Guenée）

YU Yuan?chan1，YU Xiao?fei2，ZHANG Yue1 et al?（1.Institute of Entomology of Guizhou University/Provincial Key Laboratory for Agricultural Pest Management of Mountainous Regions，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025;2.College of Tabacco Sciences，Guizhou University，Guiyang，Guizhou 550025）

Abstract?To improve the efficiency of tobacco budworm rearing in laboratoty and satisfy the requirement of laboratory，based on the reported method for rearing tobacco budworm，those methods of collecting tobacco eggs and transferring hatching larvae were simplified and improved.This paper described the way of indoor rearing of tobacco budworms by climate chamber and prepared feed，and explored a method suitable for large?amount rearing of tobacco budworms in small space.The study will provide sufficient supply for experimental research related to tobacco budworm.

Key words?Artificial climate chamber;Feeding methods;Improvement;Tobacco budworm

煙青蟲[Helicoverpa assulta （Guenée）]屬鱗翅目（Lepidoptera）夜蛾科（Noctuidae）鈴夜蛾屬（Helicoverpa），在田間主要危害辣椒和煙草，是一種重要的寡食性農(nóng)業(yè)害蟲。研究表明，在長(zhǎng)江中下游各煙區(qū)每年因該蟲造成的煙草產(chǎn)量損失達(dá)5%～10%，大發(fā)生年份可超過15%[1]，危害辣椒造成的損失高達(dá)20%～30%[2]。早期由于農(nóng)藥的濫用，導(dǎo)致蟲體產(chǎn)生抗性，近年來隨著人們生活水平的提高，人們開始注重農(nóng)產(chǎn)品的食用安全，提倡“農(nóng)藥零增長(zhǎng)”，加之全球氣候變暖，使得煙青蟲危害加重[3-4]。為降低煙青蟲的危害，亟需對(duì)其生物學(xué)特性、生態(tài)及生物藥效評(píng)估、誘導(dǎo)劑效果評(píng)估等方面進(jìn)行持續(xù)深入研究[5-9]。此外，煙青蟲和棉鈴蟲[Helicoverpa armigera （Hübner）]是同屬近緣姐妹種，兩者可進(jìn)行種間雜交，是用來研究鱗翅目昆蟲遺傳和子一代不育機(jī)理的理想試驗(yàn)材料[10-11]。隨著對(duì)煙青蟲和棉鈴蟲兩者生態(tài)、毒理和遺傳等研究的深入，隨時(shí)需要提供大量生理狀態(tài)一致的標(biāo)準(zhǔn)試蟲。目前煙青蟲和棉鈴蟲室內(nèi)人工繼代飼養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)，且處于不斷改進(jìn)之中[12]，其飼養(yǎng)方法漸趨于低成本和高效繁蟲。然而煙青蟲和棉鈴蟲種群擴(kuò)繁過程中，成蟲散產(chǎn)蟲卵的生物學(xué)特性使得卵粒收集困難，卵布上初孵幼蟲轉(zhuǎn)移困難等問題嚴(yán)重影響供試蟲體的擴(kuò)繁[13]。因此，筆者探究了煙青蟲室內(nèi)大量飼養(yǎng)的方法，旨在為進(jìn)一步研究煙青蟲和棉鈴蟲提供參考。

1?人工氣候箱及條件設(shè)置

人工氣候箱至少2臺(tái)（容積：380L;型號(hào)：RXZ-380A（多段）;廠家：寧波江南儀器廠），溫度為（26±1） ℃，光周期為L(zhǎng)16∶D8，相對(duì)濕度60%～80%。人工氣候箱定期用75%的乙醇擦拭（紫外光照射30 min）消毒熏蒸后使用（每30 d 1次）。

2?飼養(yǎng)設(shè)備及用具

①收集卵：醫(yī)用脫脂紗布（遵義聯(lián)盟醫(yī)用器材有限公司）;

②飼養(yǎng)低齡幼蟲：19.2 cm×13.0 cm×7.1 cm容積為1.5 L食品保鮮塑料盒（圖1A、B）、200目尼龍紗網(wǎng)塊、84消毒液;

③飼養(yǎng)3齡幼蟲和高齡幼蟲：環(huán)保連體食品原盒（型號(hào)P2-50ML）（圖1C）;

④飼養(yǎng)蛹：培養(yǎng)皿、無菌棉花、75%乙醇;

⑤飼養(yǎng)成蟲：羽化展翅籠（圖1D、E）、培養(yǎng)皿、含蜂蜜水的棉花球、交配杯（圖1F）。

3?飼養(yǎng)過程

3.1?飼養(yǎng)器具的清洗和消毒

將培養(yǎng)皿、低齡幼蟲飼養(yǎng)盒等養(yǎng)蟲器具置于盆中，加84消毒液浸泡2 h后戴手套用試管刷刷洗干凈，清水漂洗2次后倒置晾干，噴75%乙醇消毒液進(jìn)一步消毒，自然風(fēng)干后隔離放置干凈環(huán)境中儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

3.2?飼料的準(zhǔn)備

配制步驟：飼料配方參照董鈞鋒等[12]的方法略作修改，分別稱取麥胚、大豆粉、蔗糖、酵母粉、尼泊金、山梨酸、抗壞血酸、亞油酸（滴）、維生素C、維生素B（片）、氯化鈉、瓊脂、蒸餾水、煙葉等成分，各成分配比：麥胚粉40.0 g，大豆粉20.0 g，蔗糖5.0 g，酵母粉提取物12.0 g，尼泊金1.0 g，山梨酸0.4 g，亞油酸2.0 滴，抗壞血酸1.7 g，維生素C 2.0 g，維生素B 10.0 片，瓊脂粉5.0 g，氯化鈉0.1 g，蒸餾水300.0 mL，煙粉15.0 g。將300 mL 蒸餾水和5 g瓊脂粉倒入電飯煲中加熱至沸騰后加入預(yù)先稱量好的麥芽粉、大豆粉、蔗糖，待煮沸10 min后保溫?cái)嚢? min。之后加入其余組分（酵母粉、尼泊金、山梨酸、抗壞血酸、亞油酸（滴）、維生素C、維生素B（片）、氯化鈉、煙粉）攪拌繼續(xù)加熱5 min即可（圖1H）。將高溫煮熟的飼料倒入飼料盒中，待其冷卻后蓋上盒蓋，放入4℃冰箱備用。（部分原材料的加工，煙葉放入60 ℃的烘箱中，待其完全干燥后取出，用小型多功能粉碎機(jī)（璐楓LF-600A型）對(duì)干燥煙葉進(jìn)行粉碎，制成煙粉待用;麥胚粉為小麥催芽淘洗干凈后烘干粉碎而成，大豆粉為市售大豆粉。）

3.3?蟲源的引入

于煙青蟲發(fā)生期前往貴州省遵義市鳳岡縣進(jìn)化鎮(zhèn)煙草基地采集煙青蟲幼蟲帶回實(shí)驗(yàn)室投喂人工飼料進(jìn)行飼養(yǎng)（圖1J）。成蟲飼以25%的蜂蜜水，在人工氣候箱中建立試驗(yàn)種群。煙青蟲幼蟲鑒定參照文獻(xiàn)[14]的方法。

3.4?幼蟲的飼養(yǎng)

煙青蟲高、低齡幼蟲均用上述飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，3齡以前用19.2 cm×13.0 cm×7.1 cm容積為1.5 L食品保鮮塑料盒進(jìn)行集體飼養(yǎng)，每天檢查飼料取食情況，并加入新鮮飼料。待蟲體長(zhǎng)至3齡大小后進(jìn)行單頭飼養(yǎng)，飼養(yǎng)容器為事先已進(jìn)行扎孔處理的環(huán)保連體食品圓盒（型號(hào)P2-50ML），每盒一頭，根據(jù)蟲體生長(zhǎng)情況酌情加入飼料，飼料2 d一換。待蟲體進(jìn)入高齡幼蟲后，加入足量飼料塊，以供其制作土室進(jìn)行化蛹（圖1K）。操作過程中應(yīng)注意全程配戴一次性消毒手套，在更換飼料過程中，如發(fā)現(xiàn)蟲盒內(nèi)的蟲感染死亡，直接將該蟲盒移除，幼蟲期13 d左右。高齡幼蟲飼養(yǎng)盒為一次性用品，若以其他飼養(yǎng)器具代替應(yīng)注重消毒。

3.5?蛹的收集和處理

待蟲體化蛹3 d后，將蟲盒中的蛹收集起來，區(qū)分雌雄蛹，隨后分裝入培養(yǎng)皿中進(jìn)行消毒處理。蟲蛹消毒過程：將蟲蛹放入裝有75%消毒乙醇的培養(yǎng)皿中消毒2 min后用無菌蒸餾水漂洗蟲蛹2次，用棉花吸去蟲蛹表面多余水分后，將蟲蛹轉(zhuǎn)至提前做好相應(yīng)標(biāo)識(shí)的干凈大型塑料圓形盒中，盒中放有保濕棉花團(tuán)（圖1O）;正常管理煙青蟲雌蛹（飼養(yǎng)環(huán)境同幼蟲），雄蛹轉(zhuǎn)至溫度28 ℃、濕度60%～80%、光周期L16：D8的人工氣候室中高溫處理2 d后取出，與雌蛹同放于羽化展翅籠中待其羽化。蛹期約為7 d。

3.6?成蟲的羽化和產(chǎn)卵

觀察羽化籠中蟲蛹體色轉(zhuǎn)為深褐色后，在籠中提前放置25%蜂蜜水棉花團(tuán)，以備新羽化的成蟲取食（剛羽化成蟲見圖1L）。將羽化1 d后的成蟲以雌雄比1∶2/2∶1個(gè)體比放入交配杯中，杯中同置蜂蜜水棉花球供成蟲取食，杯口用膠圈紗布扎口，注意杯口紗布保濕，倒置交配杯，杯口朝向氣候箱燈管方向（圖1G）。（成蟲成活時(shí)間6 d左右）。

3.7?卵的收集、管理及初孵幼蟲收集

自成蟲放入交配杯中第2天后每天更換交配杯紗布收集蟲卵（圖1I），將卵布?jí)K用75%乙醇浸泡1 min消毒后用蒸餾水漂洗干凈放置氣候箱晾干，次日收集放入干凈的蟲盒中，待蟲卵漸變?yōu)楹稚珪r(shí)，取出1～2塊卵布?jí)K放入初孵幼蟲飼養(yǎng)盒，盒中事先放置適量新鮮飼料塊，將卵布?jí)K有卵一面覆飼料塊上即可（圖1B），以便蟲體孵化后爬行取食（卵期約3 d）。

4?注意事項(xiàng)

（1）因煙青蟲高齡幼蟲具有自相殘殺的習(xí)性，待其長(zhǎng)至3齡后需分開單頭飼養(yǎng)直至其化蛹，避免其相互撕咬感染致死。

（2）用75%的消毒乙醇噴施后的養(yǎng)蟲器具要自然風(fēng)干后才可用于養(yǎng)蟲。

（3）利用溫度控制蟲體生長(zhǎng)發(fā)育，保證試驗(yàn)蟲齡、蟲質(zhì)、蟲體近似均勻一致，同時(shí)利于飼養(yǎng)管理，減少工作量。

（4）保持飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生，防治病原菌侵入或其他捕食性天敵（如蜘蛛）出現(xiàn)影響飼蟲。

（5）一旦發(fā)現(xiàn)蟲體感染死亡立刻隔離處理病蟲盒。

（6）替換飼料注意戴好衛(wèi)生手套，以免手上細(xì)菌污染飼料。

（7）冬季應(yīng)在溫暖的環(huán)境內(nèi)進(jìn)行蟲管飼料清換，避免蟲體受低溫影響出現(xiàn)滯育或感染病毒死亡。

5?小結(jié)與討論

上述煙青蟲人工飼養(yǎng)方法與前人研究相比，存在諸多改進(jìn)之處。如與李詠軍等[15]飼養(yǎng)方法相比，由分層多格飼養(yǎng)高齡幼蟲改為利用連體環(huán)保食品圓盒單盒單頭飼養(yǎng)，貴州大學(xué)昆蟲研究所利用前人方法飼養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，幼蟲存在串格后相互撕咬感染死亡現(xiàn)象。在成蟲產(chǎn)卵環(huán)節(jié)中，保持產(chǎn)卵杯口紗布濕潤(rùn)，將產(chǎn)卵杯倒置，杯口朝向氣候箱燈管方向，這樣可利用成蟲趨光性吸引雌蟲在近光處的濕潤(rùn)紗布上產(chǎn)卵，便于收集蟲卵。此外，初孵幼蟲的轉(zhuǎn)移方法也有所改進(jìn)，由傳統(tǒng)的毛筆挑轉(zhuǎn)、抖落改為食物誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移，具有簡(jiǎn)便易行的特點(diǎn)，同時(shí)，大大降低了對(duì)蟲體的損傷。然而該飼養(yǎng)方法也存在一些弊端，如幼蟲飼料的清理換新過程較為耗時(shí)等。利用該方法飼養(yǎng)棉鈴蟲發(fā)現(xiàn)，棉鈴蟲對(duì)上述煙青蟲配方飼料有明顯取食趨性，可利用該飼料成功飼養(yǎng)棉鈴蟲直至其羽化產(chǎn)卵（圖1M～P），2～3齡供試幼蟲量可高達(dá)2 000頭，空間可供1 000頭高齡幼蟲化蛹，羽化成蟲數(shù)完全可以保證蟲體種群繼代飼養(yǎng)。