【摘 要】 目的：采用高效液相色譜法測定針葉櫻桃提取物中VB1和VB2的含量，優(yōu)化樣品制備方法及HPLC色譜條件，并將該方法用于針葉櫻桃提取物中VB1和VB2的含量測定。方法：采用HPLC法，色譜柱Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm，5?m），柱溫為40℃，進(jìn)樣體積20?L，流速1.0mL/min，檢測波長280nm，流動相組成為乙腈和5mmol/L庚烷磺酸鈉溶液，采用等度洗脫模式。結(jié)果：方法學(xué)考察表明，VB1和VB2分別在0.089?g/mL-0.89?g/mL和0.086?g/mL-0.86?g/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法的精密度、重復(fù)性均符合要求，平均回收率為99.5%～101.1%。結(jié)論：該方法操作簡單、精密度、重復(fù)性良好，能夠用于檢測針葉櫻桃提取物中VB1和VB2的含量檢測。

【關(guān)鍵詞】 針葉櫻桃提取物 VB1 VB2 高效液相色譜

前 言

針葉櫻桃，俗稱西印度櫻桃（West Indies cherry），原產(chǎn)地在熱帶美洲，針葉櫻桃中含有蛋白質(zhì)、糖、維生素A、B1、B2、維生素C，尼克酸、鈣、磷、鐵等多種維生素及礦物質(zhì)。

針葉櫻桃提取物是以優(yōu)良的針葉櫻桃作為提取原料，采取噴霧干燥技術(shù)加工而成，很大限度的維持了針葉櫻桃自身的原味，并且富含多種維生素和酸類物質(zhì)，性狀：棕色粉末，溶解度：≥99.9%，針葉櫻桃中因為維生素C含量很高而得到了廣泛的應(yīng)用，但其中所含微量B族元素維生素B1和維生素B2對人身體也有很大的益處。

維生素B1在體內(nèi)都是以輔酶形式參與糖的分解，對神經(jīng)系統(tǒng)有保護(hù)的作用，還可以幫助腸胃蠕動，增加食欲。

維生素B2參與著各種氧化反應(yīng)，促進(jìn)發(fā)育和細(xì)胞的再次生長，對口腔、唇部、舌頭以及皮膚的一些炎癥反應(yīng)可以起到預(yù)防和消除的作用，還可以緩解的眼睛疲勞。

目前，尚未見有關(guān)對針葉櫻桃中的B族維生素含量進(jìn)行研究分析的文獻(xiàn)報道，鑒于此，本研究對針葉櫻桃中的B族維生素的含量進(jìn)行了測定，建立一種測定針葉櫻桃中維生素B1和維生素B2的方法對于保證針葉櫻桃質(zhì)量具有重要意義。

1.材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗原料

針葉櫻桃提取物，產(chǎn)品廠家：陜西森弗公司。

1.1.2主要試劑

維生素B1 標(biāo)品（北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司）、維生素B2標(biāo)品（北京世紀(jì)奧科生物技術(shù)有限公司）、乙腈（Tedia.USA）、甲醇（DikmaPure.USA）甲酸（重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司）、純凈水（杭州娃哈哈百力食品有限公司）

1.1.3 主要實驗儀器

高效液相色譜儀LC-20AT日本島津公司、數(shù)控超聲波清洗器KQ5200DB昆山市超聲儀器有限公司、電子天平AUW-120D日本島津公司、紫外可見光光譜儀UV2700日本島津公司

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品前處理

稱取針葉櫻桃提取物約500mg精密稱定，置于100ml容量瓶加入1%甲酸溶液定容至容量瓶刻度線，超聲波15min，經(jīng)0.45μm的濾膜過濾既得。

1.2.2對照品溶液的配制

稱取VB1和VB2標(biāo)準(zhǔn)品約10mg，精密稱定，置于10mL容量瓶中，加10mL1%甲酸溶解，即得。

1.2.3 色譜檢測條件

色譜柱Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm×5?m），流動相為：乙腈和5mmol/L庚烷磺酸鈉溶液，等濃度洗脫，柱溫：40℃;進(jìn)樣體積20?l;流速1ml/min;檢測器：氘燈，檢測波長280nm。維生素B1標(biāo)準(zhǔn)品在17.9min出峰;維生素B2標(biāo)準(zhǔn)品在16.5min出峰。

1.2.4 維生素B1、維生素B2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取VB2標(biāo)準(zhǔn)品0.0089g，用1%的甲酸溶液配成濃度為0.89?g/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲備液;用0.89?g/ml的儲備液配制成質(zhì)量濃度為0.089?g/ml、0.178?g/ml、0.356?g/ml、0.534?g/ml、0.712?g/ml、0.89?g/m的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到VB2的校正曲線計算公式為y=59252x﹢5261.7，相關(guān)系數(shù)R2=0.9922。精密稱取VB1標(biāo)準(zhǔn)品0.0086g，用1%的甲酸溶液配成濃度為0.86?g/ml的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用0.86?g/ml的儲備液配制成質(zhì)量濃度為0.086?g/ml、0.172?g/ml、0.344?g/ml、0.516?g/ml、0.688?g/ml、0.86?g/m的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。得到VB1的校正曲線計算公式為y=220936x-9557.7，相關(guān)系數(shù)R2=0.9921。

2 結(jié)論與討論

2.1 溶劑的選擇

維生素B2微溶于水，易溶于酸性物質(zhì)在強(qiáng)酸溶液中穩(wěn)定。維生素B1在酸性溶液中很穩(wěn)定，在堿性溶液中不穩(wěn)定，易被氧化和受熱破壞。實驗證明維生素B1和維生素B2都易溶于酸性溶液，因此采用酸性溶液作為提取溶劑，在酸性溶液篩選中分別采用磷酸溶液、甲酸溶液來溶解維生素B1和維生素B2，實驗發(fā)現(xiàn)采用磷酸溶液維生素B2比較穩(wěn)定，但維生素B1雖易溶解但出峰峰形不好，而采用1%甲酸溶液維生素B1和維生素B2都易溶解且出峰峰形美觀，故最終采用1%甲酸溶液做提取溶劑。

2.2波長的選擇

在進(jìn)行探究液相色譜條件之前，先將配置好的對照品做一個最大吸收波長的掃描，在190nm-400nm處掃描發(fā)現(xiàn)維生素B1和維生素B2標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別在243nm處和268nm處有最大吸收波長。綜合考慮檢測靈敏度、機(jī)體吸收、雜質(zhì)干擾等因素，最終選擇280nm作為測定波長，在此波長下維生素B1和維生素B2分離效果好、基線穩(wěn)定、靈敏度高、穩(wěn)定性好。

2.3流動相的選擇

2種維生素雖同屬水溶性維生素，但是化學(xué)結(jié)構(gòu)并不相關(guān)，理化性質(zhì)與色譜行為差異大，本研究分別對甲醇-水，0.1%甲酸-乙腈，離子對試劑-乙腈系統(tǒng)的進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)在甲醇-水系統(tǒng)下維生素B2難以分離，在0.1%甲酸-乙腈系統(tǒng)下維生素B2峰形不好，干擾大。因此，考慮離子對試劑作為流動相，在離子對試劑選擇上，從戊烷、己烷、庚烷、辛烷的碳鏈長度和保留程度進(jìn)行分析，保留時間越長，分離效果越好。通過試驗表明，使用庚烷磺酸鈉時維生素B2分離度良好，同時，離子對試劑濃度增加保留時間也增加，庚烷磺酸鈉的理想的濃度為0.005mol/L，在此濃度下維生素B2能達(dá)到很好的分離效果，同時也較少對液相系統(tǒng)和色譜柱的損害，能達(dá)到較好的基線分離，維生素B2出峰時間合適，峰形較好，干擾少，最終選擇5mmol/L庚烷磺酸鈉溶液-乙腈為本實驗流動相。

2.4精密度

取維生素B1和維生素B2的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果測得維生素B1的進(jìn)樣RSD為0.8%;維生素B2的進(jìn)樣RSD為0.78%，符合儀器精密度分析要求

2.5加樣回收率

精密稱取同一批已知含量的針葉櫻桃提取物樣品，精密加入濃度為1mg/mL 的維生素B1和維生素B2貯備液適量，按4.2.1項下制備方法供試液共6份，進(jìn)樣分析，由測得量與加入量計算回收率，結(jié)果維生素B1的加樣回收率在98.0 %～101.4%之間，平均加樣回收率為99.5%，維生素B2的加樣回收率在100.0 %～102.0%之間，平均加樣回收率為101.1%，表明方法準(zhǔn)確度較好，符合要求。

2.7樣品的含量測定

稱取針葉櫻桃提取物約1.0g，精密稱定。按4.2.1方法制備供試品溶液，進(jìn)樣20μL，記錄樣品峰面積，以對照品峰面積做對照，利用外標(biāo)法計算VB1和VB2的含量。計算得出針葉櫻桃提取物中VB1的含量為2.72mg/g，VB2的含量為2.98mg/g。

2.8 結(jié)論

2.8.1 主要結(jié)論

1.最佳色譜條件為：色譜柱Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm×5?m），柱溫：40℃常溫;進(jìn)樣體積20?l;流速1mL/min;檢測波長280nm。流動相A：5mmol/L庚烷磺酸鈉溶液，流動相B：乙腈;等濃度洗脫。

2.在本研究所建立的色譜條件下，維生素B1的加樣回收率在98.0 %～101.4%之間，平均加樣回收率為99.5%，維生素B2的加樣回收率在100.0 %～102.0%之間，平均加樣回收率為101.1%，表明方法準(zhǔn)確度較好，符合要求。

3.本研究所測針葉櫻桃提取物中B族維生素的含量為2.72mg/g，維生素B2的含量為2.98mg/g。

綜上結(jié)論，本研究找出一種能快速、有效的提取針葉櫻桃提取物中維生素B1和維生素B2的方法并能準(zhǔn)確的對其含量進(jìn)行定量分析的HPLC方法。

作者簡介：徐菁、女、漢族、籍貫：貴州省貴陽市、學(xué)歷研究生、就讀于貴陽學(xué)院、專業(yè)食品工程