常建中 韓亞梅 石亞亭

摘 要：本文通過(guò)對(duì)食用農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留和獸藥殘留快速檢測(cè)常用方法酶抑制率法、酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行系統(tǒng)的介紹，突出了農(nóng)產(chǎn)品快速檢測(cè)技術(shù)在樣品前處理和檢測(cè)儀器操作等方面的優(yōu)勢(shì)，指出快速檢測(cè)技術(shù)將在農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管體系中起到重要的作用，為基層農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)管、執(zhí)法、檢測(cè)、評(píng)估等部門(mén)提供重要的技術(shù)支撐。

關(guān)鍵詞：農(nóng)藥殘留; 獸藥殘留; 快速檢測(cè); 酶抑制率法; 酶聯(lián)免疫吸附法

農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全是食品安全的前提和保障，農(nóng)產(chǎn)品安全問(wèn)題已成為目前社會(huì)廣泛關(guān)注的一個(gè)熱點(diǎn)問(wèn)題。建立完善的農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全保障體系，加強(qiáng)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全相關(guān)檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)的研究和開(kāi)發(fā)，發(fā)展快速便捷、成本低廉、準(zhǔn)確度高、易于推廣普及的檢測(cè)技術(shù)，將為各級(jí)食品和農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)管、殘留監(jiān)控和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估部門(mén)提供技術(shù)支撐。

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)具有高選擇性、高準(zhǔn)確度和高精密度等優(yōu)勢(shì)，但存在檢測(cè)儀器設(shè)備價(jià)格昂貴、操作復(fù)雜、所需試劑和耗材特殊、日常維護(hù)和后期管理十分嚴(yán)格等問(wèn)題，在基層實(shí)驗(yàn)設(shè)備條件差、工作人員

專(zhuān)業(yè)水平普遍較低、檢測(cè)樣品任務(wù)量大、需現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)并快速出具檢測(cè)結(jié)果的實(shí)際工作中難以發(fā)揮重要作用。然而，快速檢測(cè)技術(shù)作為食用農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)的基礎(chǔ)手段，則從根本上解決了這一難題，目前已成為農(nóng)產(chǎn)品安全檢測(cè)領(lǐng)域不可或缺的一部分。本文就農(nóng)產(chǎn)品安全中危害最大、影響最廣的農(nóng)藥殘留和獸藥殘留快速檢測(cè)常用技術(shù)進(jìn)行具體介紹，旨在促進(jìn)農(nóng)獸殘快速檢測(cè)技術(shù)的推廣，使其成為基層檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)和監(jiān)管部門(mén)保障農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的一種有力手段。

一、農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)

有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥是目前使用量最大的農(nóng)藥品種，在蔬菜中具有較高的檢出率。當(dāng)前，高毒禁用農(nóng)藥，特別是有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥仍是蔬菜農(nóng)藥殘留超標(biāo)的主體，占到農(nóng)藥市場(chǎng)的57%以上，同時(shí)也是菜農(nóng)首選的一類(lèi)殺蟲(chóng)劑。

酶抑制率法具有較高的專(zhuān)一性、靈敏性、準(zhǔn)確性及低成本等優(yōu)點(diǎn)，是目前市面上應(yīng)用最廣泛、研究最多且相對(duì)成熟的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)，利用此技術(shù)生產(chǎn)的各種速測(cè)儀不但使用方便、檢測(cè)速度快、靈敏度高，而且檢測(cè)范圍廣、價(jià)格實(shí)惠，在業(yè)內(nèi)普遍得到認(rèn)可，適用于相對(duì)集中、具有一定規(guī)模的農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)基地和批發(fā)市場(chǎng)開(kāi)展農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)，已成為目前監(jiān)管和控制農(nóng)藥殘留的重要手段之一。因此，該方法目前在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家已成為農(nóng)藥殘留普查和田間實(shí)地檢測(cè)的基本手段，也是我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 5009.199-2003）規(guī)定認(rèn)可的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)主流技術(shù)。

1.酶抑制率法的原理

在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶的正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物乙酰膽堿水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用農(nóng)藥殘留速測(cè)儀在412nm處測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化，計(jì)算出抑制率，通過(guò)抑制率來(lái)判定樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的存在。

2.酶抑制率法的檢測(cè)步驟（具體方法根據(jù)所購(gòu)買(mǎi)試劑盒為準(zhǔn)，圖1）

3.酶抑制率法常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)

（1） 試劑從冰箱取出后放置至室溫再使用;

（2）任何試劑使用時(shí)，應(yīng)堅(jiān)持用完一瓶配一瓶的原則，防止試劑變質(zhì);

（3）移液槍槍頭要一一對(duì)應(yīng)，不能混用，防止交叉污染;

（4）含色素較高的樣品取樣時(shí)，果肉不宜取太多，不宜切太細(xì)，否則提取液顏色過(guò)深，造成干擾，影響檢測(cè)結(jié)果;

（5）對(duì)于韭菜、蘿卜、蔥、蒜、芹菜等含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì)，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性，可采用整株蔬菜浸提法進(jìn)行處理;

（6）檢測(cè)前，將儀器開(kāi)機(jī)預(yù)熱10min，以穩(wěn)定儀器性能，提高實(shí)驗(yàn)的精確度;

（7）加入底物后，渦旋混勻，立即進(jìn)行檢測(cè)，盡量縮短操作時(shí)間，并保證操作的穩(wěn)定性。

二、獸藥殘留快速檢測(cè)

獸藥殘留是指在動(dòng)物及其產(chǎn)品中，如肉類(lèi)、牛奶、雞蛋等樣品中藥物或其代謝物的積累。在獸藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)中，酶聯(lián)免疫吸附法（簡(jiǎn)稱(chēng)ELISA）由于操作簡(jiǎn)便快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高、分析通量大等優(yōu)點(diǎn)，一直作為一種快速分析和篩選方法備受技術(shù)人員的青睞，在檢測(cè)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，以后也必將在基層監(jiān)管領(lǐng)域發(fā)揮重要的作用。

1.酶聯(lián)免疫吸附法的原理

酶聯(lián)免疫吸附法是把抗原抗體免疫反應(yīng)的特異性和酶的高效催化作用有機(jī)結(jié)合起來(lái)的一種檢測(cè)技術(shù)，它既可測(cè)抗原，也可測(cè)抗體。在特定固相載體的表面預(yù)包被免疫活性未被破壞的抗原（抗體），加入待測(cè)抗體（抗原），與相應(yīng)的酶標(biāo)記抗原（抗體）進(jìn)行抗原抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)，得到抗原或抗體的復(fù)合產(chǎn)物。然后通過(guò)洗滌的方式使固相載體上抗原或抗體的復(fù)合物與其他物質(zhì)分離，最后與底物反應(yīng)生成有色物質(zhì)。樣品中待測(cè)抗原或抗體的含量與有色產(chǎn)物量成正比，根據(jù)吸光度值計(jì)算抗原或抗體的含量。

2.酶聯(lián)免疫吸附法的檢測(cè)步驟（以鹽酸克倫特羅獸殘檢測(cè)為例，具體步驟根據(jù)所購(gòu)買(mǎi)試劑盒為準(zhǔn)，圖2）

3.酶聯(lián)免疫吸附法常見(jiàn)問(wèn)題及注意事項(xiàng)

（1）使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低;

（2）在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不呈線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象，所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作;

（3）混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象;

（4）反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚;

（5）不要使用過(guò)期的試劑盒，不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑，稀釋或摻雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化;

（6）不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封;試劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下;

（7）顯色劑若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。

三、結(jié)語(yǔ)

利用酶抑制率法測(cè)定的樣品和農(nóng)藥種類(lèi)有限，目前只用于蔬菜、水果中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留檢測(cè)，且一般用于大批量樣品的前期篩選，尚不能給出具體的定量結(jié)果;另外，檢測(cè)蔥、姜、蒜、香菜、芹菜等樣品時(shí)，易產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。而酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定獸藥殘留，目前也還停留于單項(xiàng)獸殘檢測(cè)，一次性檢測(cè)多種獸藥還存在很大的挑戰(zhàn)，而這些問(wèn)題也將成為今后快速檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域研究的重中之重。

總而言之，采用酶抑制率法和酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行農(nóng)藥殘留、獸藥殘留快速檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，試劑制備、樣品處理、儀器操作都較為簡(jiǎn)單，對(duì)檢測(cè)人員專(zhuān)業(yè)水平要求不高，快速檢測(cè)技術(shù)的及時(shí)性和準(zhǔn)確性也能夠得以充分體現(xiàn)，這些優(yōu)勢(shì)都將進(jìn)一步促進(jìn)快速檢測(cè)技術(shù)在基層監(jiān)管、執(zhí)法、檢測(cè)、評(píng)估等部門(mén)的推廣和普及，使得食品安全“從農(nóng)田到餐桌”的全程監(jiān)管制度得到更好落實(shí)，使黨的十九大報(bào)告中提出的“全面實(shí)施食品安全戰(zhàn)略，讓人民吃得放心”的目標(biāo)得以具體落實(shí)，有效解決人民群眾對(duì)食用農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的迫切需求，使我們的生活更加美好。

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