李俊雅 李君 梁曉

摘要 [目的]研究燈盞細(xì)辛中有效成分燈盞花乙素的積累動(dòng)態(tài)。[方法]采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）測(cè)定燈盞細(xì)辛中燈盞花乙素的含量，色譜柱：菲羅門ODS（150 mm×4.6 mm，4 μm），流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（40：60），檢測(cè)波長(zhǎng)335 nm。[結(jié)果]樣品平均加樣回收率為95.68%，RSD為1.55%（n=6）。燈盞細(xì)辛藥材中燈盞花乙素的含量在不同采收期有明顯的變化規(guī)律，而同一采收期不同的藥用部位則無(wú)明顯差異。[結(jié)論]該研究為燈盞細(xì)辛的規(guī)范化種植研究提供科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞 燈盞細(xì)辛;燈盞花乙素;采收期;反相高效液相色譜法;動(dòng)態(tài)積累

中圖分類號(hào) S567.23文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2019）10-0150-02

Abstract [Objective] The research aimed to study the dynamic accumulation of scutellarin in differernt harvest periods of Erigeron breviscapus.[Method]RPHPLC was used to measure the content of scutellarin，chromatographic column ODS（150 mm×4.6 mm，4 μm），mobile phase methanol0.1% phosphoric acid solution（40∶60），the detection wavelength was 355 nm.[Result]The average recoveries were 95.68%，RSD was 1.55%.The content of scutellarin in Erigeron breviscapus varied obviously in different harvesting periods，but there was no significant difference in different parts during the same harvesting period.[Conclusion]This study provides a scientific basis for the standardized planting research of Erigeron breviscapus.

Key words Erigeron breviscapus;Scutellarin;Harvest periods;RPHPLC;HPLC;Dynamic accumulation

燈盞細(xì)辛，又名燈盞花，為菊科植物短葶飛蓬（Erigeron breviscapus）的干燥全草，主要分布于云南、廣西、貴州、四川、湖南等省區(qū)[1]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明燈盞花乙素是燈盞細(xì)辛中主要的有效成分，藥理學(xué)試驗(yàn)研究也證實(shí)燈盞花乙素具有擴(kuò)張毛細(xì)血管的作用，可改善血液微循環(huán)、增加組織血流量、提高機(jī)體耐缺氧能力等。臨床上常用來(lái)治療缺血性腦血管疾病，如短暫性腦缺血發(fā)作（TIA）、腦血栓、腦栓塞以及中風(fēng)后遺癥等[2-7]。

隨著國(guó)家最近3年的“精準(zhǔn)扶貧”政策，廣大的西南部山區(qū)和農(nóng)村開(kāi)展常用中藥材種植業(yè)已成為不少農(nóng)民脫貧致富的好途徑，為了更好地開(kāi)發(fā)利用燈盞細(xì)辛藥材資源，筆者對(duì)不同采收期、不同產(chǎn)地及不同藥用部位的燈盞細(xì)辛藥材中燈盞乙素動(dòng)態(tài)積累的規(guī)律進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器。高效液相色譜儀（Waters600，美國(guó)Waters公司）;紫外檢測(cè)器（Waters468，美國(guó)Waters公司）;Watres PC800色譜工作站;超聲波清洗器（YQ-520C，上海易凈超聲波儀器有限公司）;電子天平（BS224S，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

1.1.2 試劑。燈盞花乙素（中國(guó)食品藥品檢驗(yàn)研究院，批號(hào)113530-201809）;甲醇、乙醇、異丙醇、乙腈為色譜純，天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司;試驗(yàn)研究所用其他試劑均為分析純。

1.1.3 試材。研究所用燈盞細(xì)辛樣品分別采集于云南省開(kāi)遠(yuǎn)市（燈盞細(xì)辛GMP基地）、廣西省全州縣、貴州省鐘山區(qū)等地，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)張?jiān)骑w教授鑒定，所有樣品均為菊科植物燈盞細(xì)辛（Erigeron breviscapus）的全草。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)照品溶液的制備。精密稱取燈盞花乙素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.l? mg的溶液，搖勻，即得。

1.2.2 供試品溶液的制備。取本品燈盞細(xì)辛干燥粗粉約0.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿適量，加熱回流至提取液無(wú)綠色，棄去氯仿液，藥渣揮去溶劑，連同濾紙筒一并移入具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，放置1 h，水浴中加熱回流1 h后放冷，再次稱定其重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25 mL，回收溶劑至干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

1.2.3 色譜條件。色譜柱為菲羅門ODS（150 mm×4.6 mm，4 μm）;流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（40∶60）;流速1 mL/min;柱溫25 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)335 nm。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。分別從0.106 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液中吸取5、10、15、20、25 μL做HPLC分析。以峰面積（X）為橫坐標(biāo)、燈盞花乙素對(duì)照品含量（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.5 精密度考察。取燈盞花乙素對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得各次峰面積，以峰面積計(jì)算RSD值，要求RSD小于3%。

1.2.6 穩(wěn)定性考察。取同一燈盞細(xì)辛樣品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、12 h依次注入高效液相色譜儀進(jìn)行分析，測(cè)得每個(gè)時(shí)間點(diǎn)燈盞花乙素的峰面積并計(jì)算其RSD值，要求RSD小于3%。

1.2.7 重復(fù)性考察。平行稱取5份燈盞細(xì)辛全草粉末各0.1 g，按“1.2.2”方法制備供試品溶液，進(jìn)行HPLC分析，計(jì)算RSD值，要求RSD值小于3%。

1.2.8 加樣回收率考察。精密稱取燈盞細(xì)辛全草干燥粉末5份，分別加入一定量的燈盞花乙素對(duì)照品，按“1.2.2”方法制備供試品溶液，進(jìn)行HPLC分析，測(cè)得燈盞花乙素的含量，計(jì)算加樣回收率和RSD值。

1.2.9 樣品的含量測(cè)定。取不同產(chǎn)地、不同采收期、不同用藥部位的燈盞細(xì)辛藥材，按“1.2.2”方法制備供試品溶液，按照“1.2.4”方法測(cè)定其含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件及適應(yīng)性試驗(yàn) 在“1.2.3”色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL（進(jìn)樣前樣品用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾），注入液相色譜儀，測(cè)定，即得，分析結(jié)果見(jiàn)圖1和圖2。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，燈盞花乙素與其他成分分離良好，理論板數(shù)以燈盞花乙素峰計(jì)算不低于5 000，分離度大于1.5，符合《中國(guó)藥典》要求。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 通過(guò)上述色譜方法定量測(cè)定燈盞花乙素對(duì)照品，以峰面積（X）為橫坐標(biāo)、燈盞花乙素對(duì)照品含量（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，數(shù)據(jù)經(jīng)回歸處理，得燈盞花乙素的回歸方程為y = 384 310 x+25 509（r=0.999 7），說(shuō)明燈盞花乙素在5.01～24.60 μg線性良好。

2.3 精密度試驗(yàn) 按照“1.2.5”方法，重復(fù)進(jìn)樣5次，定量測(cè)定含量，計(jì)算RSD值為1.51%，表明精密度良好，符合含量測(cè)定的要求。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按照“1.2.6”方法，測(cè)定燈盞花乙素的峰面積，計(jì)算供試品的RSD值為2.04%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 按照“1.2.7”方法，平行樣6份，定量測(cè)定含量，測(cè)得供試品RSD值為2.24%，表明供試品的重現(xiàn)性良好。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 由表1可知，燈盞細(xì)辛藥材的加樣平均回收率為95.86%，RSD為1.55%，表明該方法回收率較好，方法可行。

2.7 不同產(chǎn)地、不同采收期、不同藥用部位燈盞細(xì)辛中燈盞花乙素的含量測(cè)定 取各地所產(chǎn)燈盞細(xì)辛干燥全草樣品，按照“1.2.2”方法制備供試品溶液，進(jìn)行HPLC分析，測(cè)定含量，結(jié)果表明（表2），不同產(chǎn)地?zé)舯K細(xì)辛藥材中燈盞花乙素的含量存在一定的差異，云南省開(kāi)遠(yuǎn)市的燈盞細(xì)辛藥材無(wú)論是莖、葉還是花中的燈盞乙素含量都比同一采收期的廣西省全州縣和貴州省鐘山區(qū)要高一些;人工種植的燈盞細(xì)辛藥材中燈盞花乙素的含量明顯高于野生品種;不同產(chǎn)地?zé)舯K花乙素的含量呈規(guī)律性變化，其中在6月中旬—6月下旬含量較高，隨后逐漸下降。

3 結(jié)論與討論

經(jīng)查閱大量文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，燈盞花乙素易溶于甲醇，在乙醇或水中微溶。根據(jù)這一特性，在樣品溶液制備中以甲醇為提取溶劑[7-10]。試驗(yàn)中曾選用甲醇-水（60∶40）、乙腈-水（45∶55）、甲醇-醋酸-水（60∶1∶39）等作為流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離效果較差，分離度和理論塔板數(shù)達(dá)不到要求。經(jīng)過(guò)反復(fù)多次摸索試驗(yàn)條件，發(fā)現(xiàn)采用甲醇-0.1%磷酸水溶液（40∶60）為流動(dòng)相，燈盞花乙素可以與相鄰成分達(dá)到基線分離，且出峰時(shí)間、峰形均良好[11]。

分別對(duì)不同產(chǎn)地、不同采收期、不同藥用部位燈盞細(xì)辛中燈盞花乙素的含量進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地?zé)舯K細(xì)辛藥材中燈盞花乙素的含量存在一定的差異，人工種植的燈盞細(xì)辛藥材中燈盞花乙素的含量明顯高于野生品種;同一采收期不同產(chǎn)地的燈盞細(xì)辛藥材莖、葉、花的含量差別很小，地上部分燈盞花乙素的含量均符合《中華人民共和國(guó)藥典》之標(biāo)準(zhǔn)[1];不同產(chǎn)地?zé)舯K花乙素的含量呈規(guī)律性變化，其中在6月中旬—6月下旬含量較高，隨后逐漸下降，故建議每年6月份為燈盞細(xì)辛藥材的最佳采收期。

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