馮清，李嘉泓，宋燕

（贛州市人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科，江西 贛州 341000）

近幾年來，隨著輔助生殖實(shí)驗(yàn)室技術(shù)的發(fā)展，三氣培養(yǎng)技術(shù)在胚胎培養(yǎng)的應(yīng)用中不斷提升，并獲得良好的臨床效果。在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)過程中，氣體純度、氣體比例和培養(yǎng)箱種類的差異，可能造成胚胎培養(yǎng)的微環(huán)境的差異進(jìn)而影響胚胎質(zhì)量。本研究為明確桌面培養(yǎng)箱三氣培養(yǎng)在體外受精胚胎移植技術(shù)中的應(yīng)用價(jià)值，回顧分析119個(gè)IVF周期隨機(jī)使用桌面培養(yǎng)箱三氣培養(yǎng)或大培養(yǎng)箱兩氣培養(yǎng)的胚胎結(jié)局和臨床妊娠結(jié)局，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2017年1月至2017年7月本科采用體外受精-胚胎移植（IVF-ET）技術(shù)治療不孕不育的患者夫婦作為研究對(duì)象。女方患者年齡≤35歲，獲卵數(shù)在5～15個(gè)，排除多囊卵巢綜合征、子宮內(nèi)膜異位癥等非輸卵管性因素患者?；仡櫺苑治龌颊逫VF周期資料，將患者IVF周期資料分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組共41個(gè)周期，對(duì)照組共78個(gè)周期。

1.2 方法 實(shí)驗(yàn)組采用桌面培養(yǎng)箱三氣培養(yǎng)（COOK-MIN-1000，5%O2，6%CO2，89%N2)；對(duì)照組采用大培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)（Labotect-C200，6%CO2，空氣）。培養(yǎng)試劑均采用德國Vitrolife G5系列。兩種培養(yǎng)箱實(shí)際溫度均為37.0℃。具體培養(yǎng)過程為：Day 0取卵后將卵冠丘復(fù)合物放入G-IVF培養(yǎng)液中等待受精。精液優(yōu)化處理后加入卵冠丘復(fù)合物中使精液終濃度為10×104/ml。短時(shí)受精4～6 h后將卵冠丘復(fù)合物移入未加精的G-IVF培養(yǎng)液中。Day1去顆粒細(xì)胞后將合子移入G-1微滴皿中培養(yǎng)再觀察受精情況。Day2、Day3觀察卵裂情況并確定胚胎移植、冷凍及養(yǎng)囊胚情況。繼續(xù)培養(yǎng)的胚胎移入G-2培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)。Day5～Day7分別觀察囊胚形成情況并決定冷凍的囊胚。對(duì)照組為更換培養(yǎng)箱前的大培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)方式，實(shí)驗(yàn)組為桌面培養(yǎng)箱三氣培養(yǎng)方式。氣體均由廣東省佛山市梅塞爾公司提供高純氣體（氣體純度達(dá)99.999%）。

1.3 觀察指標(biāo) 2PN率：2PN數(shù)/受精卵子數(shù)×100%；2PN卵裂率：2PN卵裂數(shù)/2pn數(shù)×100%；優(yōu)質(zhì)胚胎：2PN來源，Day3為Ⅰ級(jí)胚胎的7～9細(xì)胞胚胎；優(yōu)胚率：優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)/卵裂胚數(shù)×100%；臨床妊娠率：臨床妊娠周期數(shù)/移植周期數(shù)×100%；著床率：著床的胚胎數(shù)/移植胚胎總數(shù)×100%；囊胚形成率：囊胚總數(shù)/Day3養(yǎng)囊胚的胚胎總數(shù)×100%；囊胚冷凍率：冷凍囊胚數(shù)/囊胚總數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 選擇統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果分析，計(jì)量資料（重復(fù)性測(cè)定結(jié)果）以“±s”形式施以t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料（CV）以百分率形式施以χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組的2PN率、2PN卵裂率、優(yōu)胚率、囊胚形成率、冷凍囊胚率均高于對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組的臨床妊娠率、著床率均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 桌面培養(yǎng)箱三氣培養(yǎng)與大培養(yǎng)箱兩氣培養(yǎng)各種率的比較Table 1 The comprations of two culture methods on key rates

3 討論

COOK桌面培養(yǎng)箱是三氣培養(yǎng)箱，箱內(nèi)充入預(yù)混合的三種氣體：5%O2，6%CO2，89%N2。Labotect-C200培養(yǎng)箱是單氣培養(yǎng)箱，箱內(nèi)充入高純度的6%CO2其余的氣體即為空氣。而空氣中的氧含量為21%。COOK桌面培養(yǎng)箱系統(tǒng)屬于低氧培養(yǎng)系統(tǒng)。人類輸卵管和子宮內(nèi)的生理氧濃度均比空氣低。低氧培養(yǎng)環(huán)境更接近人體生理環(huán)境。高氧培養(yǎng)環(huán)境會(huì)促進(jìn)氧化磷酸化過程并產(chǎn)生更多自由基[1-2]。自由基是強(qiáng)還原劑，影響細(xì)胞正常的生化活動(dòng)，如脂質(zhì)代謝、基因調(diào)控等。氧化損傷會(huì)產(chǎn)生更多的胚胎碎片從而影響胚胎質(zhì)量。低氧培養(yǎng)環(huán)境比高氧培養(yǎng)環(huán)境更能促進(jìn)囊胚培養(yǎng)，產(chǎn)生更多高質(zhì)量的囊胚從而顯著提高其出生率[3]。本研究結(jié)果顯示桌面培養(yǎng)箱組的低氧培養(yǎng)環(huán)境較大培養(yǎng)箱組高氧培養(yǎng)環(huán)境有更高的2PN受精率、2PN卵裂率、優(yōu)胚率、囊胚形成率、冷凍囊胚率，但可能由于樣本量不大的原因，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此結(jié)果與劉迎春等[4]的研究結(jié)果一致。2PN受精率、2PN卵裂率、優(yōu)胚率、囊胚形成率、冷凍囊胚率是胚胎早期發(fā)育的觀察指標(biāo)。這些指標(biāo)的提升預(yù)示臨床結(jié)局的改善。而臨床妊娠率和著床率在患者年齡和子宮內(nèi)膜沒顯著差異下更能反映胚胎發(fā)育的質(zhì)量和培養(yǎng)體系的效果。本研究結(jié)果亦顯示低氧培養(yǎng)環(huán)境較高氧培養(yǎng)環(huán)境能顯著地提高臨床妊娠率和著床率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。此結(jié)果與牛子儒等[5]的研究結(jié)果一致。

COOK桌面培養(yǎng)箱體積小巧，采用接觸式導(dǎo)熱，輔以熱輻射及對(duì)流傳熱。胚胎在桌面培養(yǎng)箱受熱較大培養(yǎng)箱更快更均勻。有研究[6]表明COOK桌面培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)皿從35.0℃復(fù)溫到37.0℃，MINC只需要5.5min，大培養(yǎng)箱FORMA在20 min后還沒恢復(fù)到37.0℃。僅僅打開培養(yǎng)箱門一次，大培養(yǎng)箱中培養(yǎng)皿的溫度在20 min后還沒有恢復(fù)到37.0℃。而在日常輔助生殖技術(shù)操作中，很有可能在20 min內(nèi)打開箱門不止一次。這也就意味著大培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)皿還沒恢復(fù)到設(shè)定溫度時(shí)，箱門又被打開，如此培養(yǎng)皿便在相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)不能處于37.0℃的培養(yǎng)環(huán)境中。溫度處于恒溫的培養(yǎng)系統(tǒng)更有利于胚胎的發(fā)育和提高臨床妊娠率、著床率[7-9]。本研究結(jié)果也間接表明COOK桌面培養(yǎng)箱的恒溫效果好于大培養(yǎng)箱。

COOK桌面培養(yǎng)箱具有開蓋后高速充氣功能，可讓培養(yǎng)皿內(nèi)的pH值在5 min內(nèi)快速恢復(fù)至7.3這一最佳胚胎培養(yǎng)值。pH值的快速恢復(fù)有利于胚胎處于一個(gè)穩(wěn)定、最佳的培養(yǎng)微環(huán)境[10]并最終提高胚胎的質(zhì)量和患者的臨床妊娠率、著床率及出生率。同時(shí)COOK桌面培養(yǎng)箱每艙室耗氣量為15 ml/min，可較大節(jié)省日常用氣成本。

COOK桌面培養(yǎng)箱三氣培養(yǎng)系統(tǒng)較大培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)具有更接近生理氧濃度、恒溫、快速恢復(fù)pH、用氣量小等優(yōu)點(diǎn)。采用COOK桌面培養(yǎng)箱三氣培養(yǎng)系統(tǒng)有利于胚胎培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定及形成高質(zhì)量的胚胎，為臨床治療提供良好的實(shí)驗(yàn)室保障和穩(wěn)定的臨床結(jié)局。