張易 劉馨

（徐州醫(yī)科大學附屬醫(yī)院 徐州 江蘇 221000）

結腸癌（colon cancer）是常見的胃腸道惡性腫瘤之一，微小RNA（microRNA，miRNA）是一類非編碼單鏈小分子RNA，miR-506是miRNA家族一員。目前多數(shù)研究表明miR-506在多種腫瘤中等惡性腫瘤中低表達[1-4]，過表達miR-506能夠抑制腫瘤惡性表型。miR-506在結腸癌中的作用報道較少，其在結腸癌組織中的表達水平及其臨床意義尚不十分清楚，本研究擬深入探究。

1.材料與方法

1.1 標本收集

主要收集徐州醫(yī)科大學醫(yī)院附屬醫(yī)院2017年1月至2018年6月間手術切除的結腸癌組織標本及癌旁正常組織，另有一例標本收集于中南大學湘雅醫(yī)院。標本共計40例其中男27例，女13例。

1.2 原位雜交（ISH）檢測miR-506的表達

切取4μm厚的組織切片，經(jīng)過烘烤、脫蠟、脫水、去除內(nèi)源性過氧化物酶的活性，修復抗原后，滴加地高辛標記的miR-506雜交探針37℃孵育60min或室溫120min，DAB顯色，顯微鏡下記錄結果，詳細步驟參考[5]。

1.3 熒光定量qRT-PCR法檢測miR-506表達水平

詳細步驟根據(jù)試劑盒說明書進行，具體步驟參考[4]。miR-506的引物序列正義：5’-TAAGGCACCCTTCTGAGTAGA-3’，反義5’-GCGAGCACAGAATTAATACGAC-3’。

1.4 統(tǒng)計學分析

用獨立樣本t檢驗分析不同結腸組織中miR-506的表達差異變化。應用卡方檢驗法分析miR-506在不同臨床病理指標中的表達差異。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2.結果

2.1 miR-506在結腸癌和癌旁組織中的表達水平

qRT-PCR檢測miR-506在40例結腸癌和癌旁組織中的表達，結果顯示miR-506在結腸癌中的表達顯著低于癌旁組織（圖1A，P＜0.01）。我們進一步采用ISH（原位雜交）檢測miR-506表達水平，同樣驗證了上述結論，并發(fā)現(xiàn)miR-506主要表達于細胞質(zhì)中（圖1B）。

2.2 miR-506水平與臨床病理特征的關系

我們選取miR-506表達水平的中位數(shù)作為標準，將miR-506表達水平分為高、低表達。分析miR-506高低表達與臨床病理特征之間的相關性。如表1所示，miR-506表達與TNM分期以及淋巴結轉移有關（P＜0.05），而與其他指標均無相關性（均P＞0.05）。

圖1 A.qRT-PCR檢測miR-506在40例結腸癌和癌旁組織中的表達；B.ISH檢測miR-506表達水平。

表1 miR-506與臨床病理特征相關性分析

3.討論

miR-506編碼基因位于X染色體上，為miR-506-514群的一員。既往研究發(fā)現(xiàn)miR-506在人類多種腫瘤中低表達。本研究首先采用qRT-PCR和原位雜交檢測miR-506表達，發(fā)現(xiàn)miR-506表達于細胞質(zhì)中，且表達水平較癌旁組織明顯降低。然后我們采用卡方檢驗檢測miR-506和腫瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴結轉移等因素相關性，發(fā)現(xiàn)miR-506低表達和較差的分期、較多的淋巴結轉移相關。上述研究說明miR-506可能成為結腸癌治療，預后判斷的潛在生物學指標。同時本研究發(fā)現(xiàn)miR-506和分化程度等臨床病理指標無統(tǒng)計學相關性，這可能是研究樣本量較少造成的，今后將進一步擴大樣本量，以期能夠得到更為精確的結果。