□ 柏中波 王 晶 張國瑩 遼寧通正檢測有限公司

食品中苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸等防腐劑、非食品添加劑富馬酸二甲酯以及糖精鈉、乙?；前匪徕?、阿斯巴甜和阿力甜4種甜味劑在食品中應(yīng)用非常廣泛，且在GB 2760-2014《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》中有明確的使用限定。本文主要目的就是在更短的樣品處理和檢測時間下，更簡便的操作方法下，將8種物質(zhì)聯(lián)合檢測出來。

1 材料及方法

1.1 試劑和材料

1.1.1 試劑

①亞鐵氰化鉀溶液（92 g/L）：稱取106 g三水合亞鐵氰化鉀，加入適量水溶解，用水定容至1 000 mL。②乙酸鋅溶液（183 g/L）：稱取220 g二水乙酸鋅超聲使溶于500 mL水中，量取30 mL冰乙酸加入，最后用水定容至1 000 mL。③乙酸銨溶液（0.02 mol/L）：稱取3.08 g乙酸銨，用少量水轉(zhuǎn)移至1 L容量瓶中，加水定容。過0.45 μm水相微孔濾膜后超聲脫氣備用。

1.1.2 標準物質(zhì)

水中乙酰磺胺酸鉀、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸、阿斯巴甜、富馬酸二甲酯、阿力甜。

1.1.3 標準曲線繪制

分別吸取適量體積的標準品于1 mL容量瓶，用水定容后得到標準曲線。

1.2 儀器和設(shè)備

島津LC-20A，帶二極管陣列（PDA）檢測器；分析天平，感量為0.001 g和0.000 01 g；超聲波清洗儀；渦旋振蕩器；離心機，轉(zhuǎn)速＞8 000 r/min。

1.3 色譜條件

C18柱，內(nèi)徑4.6 mm，粒徑5 μm，柱長150 mm。

流動相：溶劑A，0.02 mol/L乙酸銨溶液；溶劑B，甲醇。

梯度洗脫程序：0～5 min，流速 1～ 0.8 mL/min， 甲 醇 5%；5～20 min， 流 速0.8～1mL/min， 甲 醇10%；20～40 min，流速1 mL/min，甲醇38%；40～48 min，甲醇5%。

進樣量：20 μL，柱溫30 ℃。

檢測波長：阿斯巴甜和阿力甜，200 nm；富馬酸二甲酯，220 nm；乙?；前匪徕?、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉，230 nm；脫氫乙酸，293 nm。

1.4 試樣處理

分別準確稱取約2.5 g（精確到0.001 g）的試樣于50 mL具塞離心管中，用10 mL移液槍準確加入18 mL甲醇水（1+1）溶液，旋緊蓋子后渦旋使充分混勻，于50 ℃水浴條件下超聲震蕩30 min，取出后充分震蕩30 s，待冷卻至室溫后加入2 mL亞鐵氰化鉀溶液和2 mL乙酸鋅溶液，再次旋緊蓋子渦旋震蕩30 s，使提取液充分混勻后于9 000 r/min條件下離心1 min，取適量上清液過0.22 μm有機系濾膜，棄去前3滴，待液相色譜測定（當(dāng)樣品澄清透明且不含蛋白質(zhì)時，如碳酸飲料、果酒、果汁、蒸餾酒等，可不加沉淀劑，直接加入4 mL水，搖勻后過膜上機）。

2 結(jié)果及分析

2.1 色譜條件選擇

2.1.1 梯度洗脫程序建立

在設(shè)定初始濃度甲醇+乙酸銨=5+95和4+96時，糖精鈉和脫氫乙酸出峰時間重合，無法對兩個色譜峰進行單獨的積分計算。調(diào)整洗脫比例為甲醇+乙酸銨=10+90，流速為1 mL/min時分離度為1.547，調(diào)整流速為0.8 mL/min時分離度為1.698。而乙?；前匪徕浽谙疵摫壤秊榧状?乙酸銨=5+95，流速為1 mL/min時出峰時間為6.98 min，才能和樣品中其他干擾雜峰相對分離開。因此，在梯度洗脫過程中選擇初始條件為時間0～5 min，流速從1 mL/min降至0.8 mL/min，甲醇比例在5 min處從5%改成10%。因為阿斯巴甜、阿力甜和富馬酸二甲酯三種物質(zhì)在甲醇+乙酸銨=5+95等度洗脫時，出峰時間較晚，分析效率低。在20 min后調(diào)整流動相比例為甲醇+乙酸銨=62+38時，3種物質(zhì)保留時間在28 min后，基線平穩(wěn)，分離度達到1.5以上，峰展寬適中，所以梯度洗脫程序設(shè)定為在20 min后，調(diào)整甲醇+乙酸銨=62+38，并保持20 min，在40 min后調(diào)整回初始濃度，保持8 min使基線重新平穩(wěn)。

2.1.2 波長選擇

由PDA光譜圖可知阿斯巴甜和阿力甜在200 nm處有最大吸收；富馬酸二甲酯和脫氫乙酸分別在220 nm和293 nm處有最大吸收；而乙?；前匪徕?、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉4種物質(zhì)在230 nm波長下吸收值較大，標準曲線線性良好，且來自流動相的基質(zhì)干擾小，所以選定230 nm做4種物質(zhì)的檢測波長。

具體標準品色譜圖如圖1-3所示。

圖1 阿斯巴甜及阿力甜色譜圖

圖2 乙?；前匪徕?、苯甲酸、山梨酸及糖精鈉色譜圖

圖3 脫氫乙酸色譜圖

表1 添加回收結(jié)果數(shù)據(jù)統(tǒng)計表

2.2 線性范圍及相關(guān)系數(shù)

對實驗方法進行方法學(xué)考察驗證，其中乙?；前匪徕洏藴示€性范圍在2～20μ g/mL時線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 76；苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標準線性范圍在0～100 μg/mL時線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2分別為0.999 66、0.999 97、0.999 98；脫氫乙酸標準 線 性 范 圍 在 1μ ～ 100 μg/mL 時 線 性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 98；阿斯巴甜和阿力甜標準線性范圍在0～100 μg/mL時線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2分別為0.999 36、0.999 69；富馬酸二甲酯標準線性范圍在2～25 μg/mL時線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2為 0.999 38。

分別準確稱取約2.5 g純牛奶、涼拌土豆絲、雞肉、酥餅試樣各6份，添加標準物質(zhì)量及回收率、變異系數(shù)見表1。

3 小結(jié)

本方法及本色譜條件對食品中的苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸3種防腐劑，非食品添加劑富馬酸二甲酯，以及糖精鈉、乙?；前匪徕洝⑺拱吞鸷桶⒘μ?種甜味劑的檢測，不僅操作方法方便快捷，分析時間短，結(jié)果精密度及準確度好，更利于提高工作效率，適用于大批量樣品的檢測。