王 志，蔡春芳*，丁惠明，葉元土，崔廣同，任勝杰，邱小亮

（1.蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，江蘇省水產(chǎn)動物與營養(yǎng)重點實驗室，江蘇蘇州 215123；2.蘇州市陽澄湖國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)示范區(qū)發(fā)展有限公司，江蘇蘇州 215123）

在三大類能量營養(yǎng)物質(zhì)中，蛋白質(zhì)相對比較昂貴，功能強(qiáng)大，因此是飼料質(zhì)量和價格最重的評價依據(jù)。然而蛋白質(zhì)作為供能物質(zhì)，其功能可被脂肪和糖類所代替，因此飼料中充足的脂肪和糖可起到節(jié)約蛋白質(zhì)的作用（Cui等，2017；江星等，2013）。然而，任何水產(chǎn)動物對營養(yǎng)需求的考量都必須基于各種營養(yǎng)素之間的平衡與互作（Silva等，1991），飼料能量營養(yǎng)素的不平衡可能會導(dǎo)致脂肪在甲殼動物肝胰腺中蓄積（張南南等，2016；González-Fél等，2002），甚 至 會 抑制水產(chǎn)動物的正常生長（Zhao等，2015；Xu等，2013），限制飼料中蛋白質(zhì)的消化和利用（陳乃松等，2012），造成機(jī)體的氧化損傷等（Du等，2008）。因此配制飼料時還要注意其能量蛋白比。

本課題組在前期關(guān)于日本沼蝦（Macrobrachium nipponense）脂類營養(yǎng)需求研究中發(fā)現(xiàn)，磷脂可改善日本沼蝦對脂類的利用性（磷脂影響日本沼蝦對飼料脂肪的需要量，動物營養(yǎng)學(xué)報，待刊）。本研究將進(jìn)一步探討高磷脂水平下日本沼蝦飼料中適宜的能量蛋白比，以期為日本沼蝦飼料配方的設(shè)計和完善提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗飼料 本試驗以魚粉、植物性蛋白質(zhì)飼料和干酪素為蛋白源（魚粉為定量添加，滿足飼料的適口性），將魚油、豆油、磷脂油比1∶1∶4混合為脂肪源，以糊精為糖源。設(shè)置三個蛋白（36%、40%、44%）和兩個可消化能水平（11和12 MJ/kg），配制成6種試驗飼料。飼料配方見表1。飼料的制作過程參照本實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作流程，簡述之：通過粉碎機(jī)將固態(tài)飼料原料粉碎并過80目篩，均勻混合后加入脂肪源重新混合均勻，并添加一定量的水混勻，在雙螺桿擠條機(jī)中制成直徑為1.0 mm的顆粒飼料，風(fēng)干后置于自封袋密封，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 養(yǎng)殖管理 試驗在蘇州市相城區(qū)陽澄湖現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)園有限公司的研究生工作站進(jìn)行。試驗用蝦苗購自江蘇省蘇州市甪直鎮(zhèn)本地蝦苗繁育場，幼蝦初始體質(zhì)量為（0.28±0.06）g，健康無病，規(guī)格整齊。試驗蝦在養(yǎng)殖水池暫養(yǎng)15 d，禁食24 h 后，分養(yǎng)于24個100 cm×100 cm×100 cm的塑料缸內(nèi)。缸內(nèi)盛水約300 L，并放置有生物性和非生物性的附著基供日本沼蝦攀附。每缸放養(yǎng)200尾。每種飼料投喂4缸試驗蝦，隨機(jī)分配投喂。每天上午7：30和下午18：30各投飼1次，采用飽食投喂，同時及時撈出死蝦并稱重。試驗用水為紗網(wǎng)過濾、沉淀24 h后的湖水。每天用虹吸管排污1次，隔天換水1/3。試驗期間水溫24～28℃，水體pH為7.5～8.1，氨氮低于0.05 mg/L，溶氧保持在6.2～7.1 mg/L。養(yǎng)殖周期為8周。飼養(yǎng)結(jié)束后，禁食24 h，采樣。

1.3 分析與測定

1.3.1 生長性能、飼料效率 將每缸所有日本沼蝦撈出后分別稱總重，記錄尾數(shù)，用于計算增重率（WG）、成活率（SR）、特定增長率（SGR）及飼料系數(shù)（FCR）。每缸取6尾蝦，剝離其完整肝胰腺稱重，用于計算其肝體比值（HSI）。

1.3.2 體成分和飼料概略養(yǎng)分測定 稱重后的蝦用于水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪等體成分分析，其中水分含量測定采用低溫冷凍干燥法（LJB 18型冷凍干燥機(jī)，北京四環(huán)科學(xué)儀器廠有限公司）；粗蛋白質(zhì)含量測定采用凱氏定氮法（GB 5009.5-2010。所用消化儀：LNK 87型，江蘇省宜興市科教儀器研究所；蒸餾儀：KN 520型，濟(jì)南阿爾瓦儀器有限公司）；粗脂肪含量測定采用索氏抽提法（GB/T 14772-2008）；灰分含量的測定采用GB 5009.4-2010方法測定，樣品先于200℃ 碳化至不冒煙，再于550℃ 陶瓷纖維馬弗爐（8-10 TP型，上海慧泰儀器制造有限公司）中灼燒至恒重。飼料總能采用全自動氧彈量熱儀（PARR 6300型，上海昌吉地質(zhì)儀器有限公司）測定；總糖的測定參考文獻(xiàn)（李如亮等，1998）中的方法，其余成分的測定同體成分測定方法。飼料概略養(yǎng)分見表1。

1.3.3 計算與統(tǒng)計分析

相關(guān)的計算公式如下：

成活率/%=Nt/N0×100；

飼料系數(shù) =m1/（mt-m0）；

特定生長率 /%/d=（lnmt- lnm0）/t×100

表1 試驗飼料配方及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

增重率 /%=（mt-m0）/m0×100 ；

蛋白質(zhì)效率=（mt-m0）/m2；

肝體指數(shù)/%=m3/mt×100。

式中，Nt為試驗結(jié)束存活蝦數(shù)量（尾）；N0為試驗開始蝦數(shù)量（尾）；mt為試驗結(jié)束體質(zhì)量（g，含死蝦質(zhì)量）；m0為試驗開始體質(zhì)量，g；m1為攝入飼料量（干物質(zhì)質(zhì)量），g；m2為蛋白質(zhì)攝入量，g；t為試驗時間，d；m3為肝胰臟質(zhì)量，g。

試驗數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，所有數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0進(jìn)行單因子方差分析（one-way ANOVA）和雙因子方差分析（two-way ANOVA），同時進(jìn)行Duncan氏多重比較，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。此外，就不同能量水平下SGR、FCR、PER與E/P間的相關(guān)性采用回歸分析。

2 結(jié)果

由表2可知，各組蝦的 WG、SGR、PER和FCR差異顯著（P＜0.05），蝦體水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪與粗灰分含量差異不顯著（P＞0.05）。當(dāng)攝食的飼料的蛋白含量為36%，E/P比為34.30 MJ/kg時，日本沼蝦的WG和SGR最高，F(xiàn)CR最低。雙因子方差分析結(jié)果表明：隨著飼料蛋白水平的增加，日本沼蝦的SR、WG、SGR和FCR均無顯著性差異（P＞0.05），PER呈現(xiàn)顯著下降趨勢（P＜0.05）。隨著可消化能水平的提高，日本沼蝦的WG、SGR、PER顯著提高（P＜0.01）。

表2 不同E/P的飼料對日本沼蝦生長性能和體組成的影響

圖1 能量蛋白比與特定生長率的關(guān)系

圖2 能量蛋白比與飼料系數(shù)的關(guān)系

圖3 能量蛋白比與蛋白質(zhì)效率的關(guān)系

回歸分析結(jié)果表明，可消化能水平為11 MJ/kg時，日本沼蝦SGR隨E/P升高（即蛋白含量下降）呈先升高后下降的態(tài)勢，獲得最高SGR的 E/P值為26.27（圖1）；可消化能水平為12 MJ/kg時，日本沼蝦SGR隨E/P的升高而升高，F(xiàn)CR隨E/P的升高而下降；（見圖1，圖2）。在可消化能一定的情況下，PER都隨著E/P的升高而升高，可消化能為11 MJ/kg時，每增加1 MJ/kg能量可提高PER 0.0302；可消化能為12 MJ/kg時，每增加1 MJ/kg能量可提高PER 0.0319（見圖3）。

3 討論

本試驗結(jié)果表明隨著可消化能水平升高，PER上升。攝入的蛋白質(zhì)除了用于構(gòu)成機(jī)體組成成分等功能外，還可用于作為能量消耗（Hu等，2008），當(dāng)飼料中脂肪和糖含量豐富時，動物會利用脂肪和糖類氧化供能，降低蛋白質(zhì)作為能量消耗的比例，使攝入的蛋白能夠更多地用于構(gòu)成機(jī)體，起到節(jié)約蛋白質(zhì)的作用（Catacutan等，2002；Lee等，2002）。本研究中飼料能量的差異很大程度上是由于脂肪含量的不同（表1），因此PER的提高主要是因為脂肪對蛋白質(zhì)的節(jié)約作用。研究結(jié)果也提示高磷脂時飼料中脂肪水平達(dá)10%時仍能被日本沼蝦很好的利用，與我們前期研究一致。

試驗結(jié)果還表明，蛋白質(zhì)水平從36%升高到44%，PER下降，SGR最高值也在飼料蛋白為36%時。李貴鋒等在探究不同蛋白質(zhì)（26%、30%、33% 和 36%）和能量水平（13.5和 14.5 MJ/kg）對建鯉幼魚（Cyprinus carpiovar Jian）生長性能的影響時也發(fā)現(xiàn)，在飼料能量較高時（14.5 MJ/kg），33%的蛋白質(zhì)水平就能夠獲得最佳的生長性能和FCR（李貴鋒等，2012）。Ai等報道用高蛋白飼料喂養(yǎng)花鱸（Lateolabrax japonicus）幼魚并不能獲得最高的SGR和最低的FCR（Ai等，2004）。這些研究結(jié)果一致表明過分追求高蛋白并不利于養(yǎng)殖動物的生長。就日本沼蝦生長而言，本研究結(jié)果表明飼料中蛋白36%、可消化能為12 MJ/kg相對比較合適。

有趣的是，不同能量水平下，日本沼蝦對于E/P變化的響應(yīng)不同。在可消化能水平為11 MJ/kg時，日本沼蝦SGR隨著E/P升高（即蛋白水平下降）呈先升高后下降的態(tài)勢，獲得最高SGR的 E/P值為26.27 MJ/kg（圖1）。這一現(xiàn)象與在克氏原螯蝦（Procambarus clarkii）（于寧等，2014）、尖齒胡鯰（Clarias gariepinus）（Tibbetts等，2015）和黑線鱈（Melanogrammus aeglefinus）（Ali等，2015）上的研究結(jié)果相似，表明日本沼蝦在可消化能較低（11 MJ/kg）時，蛋白質(zhì)水平容易成為生長的制約因素。而當(dāng)可消化能提高到12 MJ/kg時，日本沼蝦的SGR隨E/P的升高而升高，F(xiàn)CR隨E/P的升高而下降（見圖1，圖2）。本實驗結(jié)果提示，日本沼蝦飼料中適宜的E/P值為34.30 MJ/kg或更高，高于虞冰如等（1990）在日本沼蝦上研究結(jié)果（33.48 MJ/kg），這可能與飼料中較高的磷脂水平改善了脂類的利用有關(guān)（Sánchez等，2014）。

E/P與PER回歸分析結(jié)果表明，可消化能為11 MJ/kg時，每增加1 MJ/kg能量可提高PER 0.0302；可消化能為12 MJ/kg時，每增加1 MJ/kg能量可提高PER 0.0319?？梢娔芰繉Φ鞍踪|(zhì)的節(jié)約作用并沒有隨飼料能量水平的升高而下降，提示日本沼蝦飼料中能量水平可進(jìn)一步提高，以節(jié)約更多的蛋白質(zhì)。

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