何樂(lè)春，陳福軍

1.重慶醫(yī)療器械質(zhì)量檢驗(yàn)中心&重慶市醫(yī)療器械質(zhì)量與安全控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401147；2.遼寧省藥械審評(píng)與監(jiān)測(cè)中心，遼寧 沈陽(yáng) 110006

引言

生化分析儀對(duì)于所有醫(yī)院的檢驗(yàn)科都屬于最基本和必不可少的診斷分析儀器。目前，國(guó)內(nèi)大型醫(yī)院使用的全自動(dòng)生化分析儀為進(jìn)口品牌或是國(guó)內(nèi)知名度較高的邁瑞儀器，然而由于資金問(wèn)題，許多基層醫(yī)院只能配備價(jià)格低廉的國(guó)產(chǎn)生化儀，而對(duì)生化儀的性能驗(yàn)證則是基層醫(yī)院引進(jìn)新設(shè)備時(shí)必需開(kāi)展的工作[1]。醫(yī)療器械行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 0654-2008《全自動(dòng)生化分析儀》對(duì)生化儀的性能驗(yàn)證方法進(jìn)行了詳細(xì)規(guī)定，然而對(duì)于基層醫(yī)院工作人員來(lái)說(shuō)，行標(biāo)中所需的標(biāo)準(zhǔn)溶液和十萬(wàn)分之一天平都是難以企及的實(shí)驗(yàn)條件[2-3]。本文在研究行標(biāo)的基礎(chǔ)上，使用3種常規(guī)生化試劑盒對(duì)某國(guó)產(chǎn)品牌儀400速和200速生化儀分別進(jìn)行了性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，從而為基層醫(yī)院提供了一種可行性強(qiáng)、結(jié)果可靠的生化分析儀性能驗(yàn)證方法。

1 材料與方法

1.1 儀器

200速/小時(shí)某國(guó)產(chǎn)全自動(dòng)生化分析儀，代號(hào)A200；400速/小時(shí)某國(guó)產(chǎn)全自動(dòng)生化分析儀，代號(hào)A400。

1.2 試劑

終點(diǎn)法、速率法和兩點(diǎn)速率法的3種反應(yīng)動(dòng)力學(xué)試劑盒各一盒，校準(zhǔn)品和質(zhì)控品選用市售朗道復(fù)合血清，其詳細(xì)信息，見(jiàn)表1。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 0654-2008《全自動(dòng)生化分析儀》規(guī)定，生化儀的性能驗(yàn)證項(xiàng)目包括雜散光、吸光度線性范圍、吸光度準(zhǔn)確度、吸光度穩(wěn)定性、吸光度重復(fù)性、溫度準(zhǔn)確度、樣品攜帶污染率、加樣準(zhǔn)確度與重復(fù)性和臨床項(xiàng)目的批內(nèi)精密度。在理解行標(biāo)各項(xiàng)檢驗(yàn)指標(biāo)的目的和查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上，本文擬采用試劑準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)、試劑重復(fù)性實(shí)驗(yàn)、試劑線性范圍實(shí)驗(yàn)和樣本污染攜帶共4個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目作為儀器的驗(yàn)證方法[4-9]，從而為基層醫(yī)院的生化儀驗(yàn)證建立一種實(shí)驗(yàn)材料易得、操作簡(jiǎn)便且驗(yàn)證結(jié)果可靠的儀器性能評(píng)估方法。

表1 試劑盒的基本信息

通過(guò)試劑的線性范圍實(shí)驗(yàn)對(duì)儀器的雜散光、吸光度線性范圍進(jìn)行驗(yàn)證。雜散光的存在會(huì)使比爾定律產(chǎn)生偏移，直接限制被分析測(cè)試樣品濃度的上限，當(dāng)被分析的試樣濃度越大，其分析誤差就越大[10-12]。線性范圍實(shí)驗(yàn)的待測(cè)樣本為系列濃度梯度樣本，其高濃度樣本已達(dá)到試劑的檢測(cè)上限。若儀器的雜散光不合格，則線性范圍實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)性必定偏低，因此以試劑的線性范圍實(shí)驗(yàn)對(duì)儀器的雜散光進(jìn)行驗(yàn)證。吸光度的線性范圍主要驗(yàn)證儀器的吸光度是否與待測(cè)物的濃度成正比關(guān)系，因此可間接通過(guò)試劑的線性范圍實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證[13]。

儀器吸光度準(zhǔn)確度、溫度準(zhǔn)確度和加樣準(zhǔn)確度將直接影響試劑檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此通過(guò)試劑準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)對(duì)以上指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證[14-15]。

儀器吸光度穩(wěn)定性、吸光度重復(fù)性和加樣重復(fù)性將直接影響試劑檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性，因此以試劑重復(fù)性實(shí)驗(yàn)對(duì)以上指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證[16-17]。實(shí)驗(yàn)中所選試劑的種類(lèi)來(lái)源于行標(biāo)中“臨床項(xiàng)目的批內(nèi)精密度”所規(guī)定的試劑。

1.3.1 準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)

3種試劑盒在A400和A200分析儀上以質(zhì)控品為樣本，重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算相對(duì)偏差，其值應(yīng)小于生產(chǎn)商聲明的準(zhǔn)確度值。

1.3.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

加樣重復(fù)性實(shí)驗(yàn)要求，見(jiàn)表2。將質(zhì)控品濃縮或稀釋?zhuān)筎P、ALT、Urea的濃度滿足表2中各物質(zhì)的濃度范圍。在A200和A400分析儀上每個(gè)項(xiàng)目重復(fù)測(cè)試10次，計(jì)算其CV值。

表2 加樣重復(fù)性實(shí)驗(yàn)要求

計(jì)算公式見(jiàn)式(2)和(3)：

其中，x為每次的檢測(cè)結(jié)果為1～10次的算術(shù)平均值，n為測(cè)試的次數(shù)。

1.3.3 線性范圍實(shí)驗(yàn)

由于總蛋白試劑盒為終點(diǎn)法，其反應(yīng)后的吸光度最大，相比其它兩種試劑盒能更好的反應(yīng)出儀器光源系統(tǒng)的線性情況，因此選取總蛋白進(jìn)行線性范圍實(shí)驗(yàn)。將質(zhì)控品濃縮，使其濃度達(dá)到試劑盒生產(chǎn)商聲明的線性上限濃度。線性范圍實(shí)驗(yàn)樣本配制方法，見(jiàn)表3。將高濃度樣本（H）和生理鹽水（L）按表3進(jìn)行配制成11個(gè)樣本，每個(gè)樣本用試劑盒重復(fù)測(cè)試2次并計(jì)算平均值。以樣本的理論濃度為橫坐標(biāo)，以試劑檢測(cè)濃度為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，計(jì)算相關(guān)系數(shù)R，其值應(yīng)≥0.990。

表3 線性范圍實(shí)驗(yàn)樣本配制方法

1.3.4 樣品污染攜帶

選擇TP試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以1.3.3中的線性上限樣本為高值樣本（H），生理鹽水為空白對(duì)照樣本（L），按順序進(jìn)行測(cè)試，見(jiàn)表4。

表4 樣本污染攜帶實(shí)驗(yàn)測(cè)試順序

從表4中的實(shí)驗(yàn)順序可發(fā)現(xiàn)，第4個(gè)樣品的檢測(cè)結(jié)果最易受高值樣本的影響，而第6個(gè)樣品的檢測(cè)結(jié)果受影響可忽略。因此第6個(gè)樣品可作為空白對(duì)照用于計(jì)算樣品污染攜帶，其值應(yīng)≤0.7 g/L。

樣品污染攜帶=第4個(gè)樣品的檢測(cè)結(jié)果-第6個(gè)樣品的檢測(cè)結(jié)果

2 結(jié)果

2.1 準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)

A200和A400型儀器的準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表5，每種試劑的相對(duì)偏差應(yīng)≤10%。

表5 加樣準(zhǔn)確性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

A200和A400型儀器的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表6～7，每種試劑的變異稀釋CV應(yīng)滿足表2中的要求。

2.3 線性范圍實(shí)驗(yàn)

A200和A400型儀器的線性范圍實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表8～9，其線性回歸的相關(guān)系數(shù)應(yīng)≥0.990。

2.4 樣品污染攜帶

A200和A400型儀器的樣品污染攜帶率實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表10，其結(jié)果應(yīng)≤0.7 g/L。

3 討論

3.1 準(zhǔn)確性和重復(fù)性

從表5～7可看出，ALT和Urea項(xiàng)目在A200型分析儀上的準(zhǔn)確性和重復(fù)性檢測(cè)結(jié)果均不合格，TP的準(zhǔn)確性和重復(fù)性較好；而在A400型分析儀上，所有項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果均合格。

通過(guò)TP試劑盒的準(zhǔn)確性和精密性合格可得出兩臺(tái)儀器的光源系統(tǒng)和加樣系統(tǒng)均良好。

A200型分析儀使用速率法試劑的檢測(cè)結(jié)果不合格，原因可能是反應(yīng)時(shí)間內(nèi)反應(yīng)吸光度的監(jiān)測(cè)點(diǎn)數(shù)過(guò)少。查看儀器說(shuō)明書(shū)，A200型儀器為每30 s監(jiān)測(cè)一次吸光度值，而A400型儀器為每18 s監(jiān)測(cè)一次吸光度值，所以A400型分析儀在反應(yīng)時(shí)間內(nèi)所檢測(cè)的反應(yīng)測(cè)光點(diǎn)較A200型儀器更多。對(duì)于速率法試劑盒，其檢測(cè)結(jié)果是通過(guò)一定反應(yīng)時(shí)間內(nèi)的吸光度變化率計(jì)算而得；而吸光度變化率是通過(guò)監(jiān)測(cè)反應(yīng)時(shí)間內(nèi)每個(gè)反應(yīng)測(cè)光點(diǎn)的吸光度值，再通過(guò)最小二乘法回歸計(jì)算而得。因此對(duì)于速率法試劑，一定時(shí)間內(nèi)所監(jiān)測(cè)的測(cè)光點(diǎn)越多檢測(cè)結(jié)果會(huì)越穩(wěn)定。而終點(diǎn)法試劑檢測(cè)結(jié)果的計(jì)算只與反應(yīng)起始和反應(yīng)結(jié)束時(shí)吸光度的變化值有關(guān)，與反應(yīng)過(guò)程中測(cè)光點(diǎn)的數(shù)量無(wú)關(guān)。綜上所述，終點(diǎn)法試劑的準(zhǔn)確性和重復(fù)性較速率法試劑更好，所以在進(jìn)行儀器性能驗(yàn)證時(shí)應(yīng)更多地選擇速率法試劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

表6 A200分析儀檢測(cè)結(jié)果

表7 A400分析儀檢測(cè)結(jié)果

表8 A200線性范圍實(shí)驗(yàn)結(jié)果（g/L）

表9 A400線性范圍實(shí)驗(yàn)結(jié)果（g/L）

表10 樣品污染攜帶實(shí)驗(yàn)結(jié)果（g/L）

3.2 線性范圍實(shí)驗(yàn)

從表8和表9可看出，A200和A400型分析儀光源的線性范圍均合格，因此兩臺(tái)儀器的雜散光、吸光度線性范圍均合格。

3.3 樣品污染攜帶

從表10可看出，A200和A400型儀器的污染攜帶均合格，但A200的污染攜帶率明顯高于A400型儀器。仔細(xì)核查儀器的樣本檢測(cè)過(guò)程后發(fā)現(xiàn)，A200型儀器的加樣功能和攪拌功能由同一根樣本針完成，樣品加入反應(yīng)杯后的攪拌操作通過(guò)樣本針對(duì)反應(yīng)液的來(lái)回抽吸得以實(shí)現(xiàn)。A400型儀器有獨(dú)立的攪拌桿完成反應(yīng)液的攪拌功能，因此A400型儀器的污染攜帶率明顯優(yōu)于A200型儀器。

4 結(jié)論

（1）本文參照生化儀行標(biāo)為基層醫(yī)院建立了一種可行性強(qiáng)、結(jié)果可靠的生化儀驗(yàn)證方法。

（2）低速生化儀的吸光度監(jiān)測(cè)周期過(guò)長(zhǎng)，可能導(dǎo)致速率法試劑的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性和重復(fù)性降低。儀器的樣品針充當(dāng)攪拌桿使用可能會(huì)增加樣品污染攜帶的風(fēng)險(xiǎn)。

（3）基層醫(yī)院新進(jìn)生化分析儀時(shí)，除了做好性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)外，有條件的醫(yī)院應(yīng)考慮儀器的使用體驗(yàn)，如：軟件的可操作性、儀器的濃淡廢液是否分開(kāi)以方便廢液處理、儀器反應(yīng)杯是一次性還是可重復(fù)使用等。

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