海秀玲姜怡鄧（通訊作者） 張效敏白曉林

（1寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院 寧夏 銀川750004）（2寧夏醫(yī)科大學(xué) 寧夏 銀川750004）（3寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院 寧夏 銀川750000）

高血脂是最早被公認(rèn)、也是最重要的動脈粥樣硬化危險因素，而近年來高同型半胱氨酸血癥是新顯現(xiàn)的動脈粥樣硬化危險因素，同時血管拉傷后的新生內(nèi)膜增生有助于動脈粥樣硬化的形成[1]。動脈粥樣硬化是心腦血管病的病理基礎(chǔ)，因此，開展高同型半胱氨酸血癥的發(fā)生機(jī)制及相關(guān)的防治研究是心腦血管疾病領(lǐng)域的重點(diǎn)關(guān)注問題。內(nèi)源性抗氧化劑牛磺酸、谷胱甘肽、胱氨酸、金屬硫蛋白等已經(jīng)成為目前拮抗高同型半胱氨酸血癥和動脈粥樣硬化相關(guān)研究的熱點(diǎn)。為了進(jìn)一步探究血管拉傷與動脈粥樣硬化的關(guān)系，我們以隨機(jī)平行對照的方法，嘗試采用球囊拉傷兔子腹主動脈后在高脂合并高同型半胱氨酸血癥的情況下開展此項研究，相關(guān)內(nèi)容具體報告如下。

1.資料與方法

表 三組兔子的血清生化指標(biāo)檢測結(jié)果數(shù)據(jù)對比

1.1 一般資料

選取30只健康雄性新西蘭大耳白兔作為分析對象，體重在2.0～2.5kg之間，平均體重為（2.13±0.37）kg，由本市的實驗動物中心提供。試劑L-蛋氨酸、?；撬帷⒛懝檀加擅绹鳶igma公司提供；同型半胱氨酸試劑盒由北京利德曼生化股份有限公司提供；氧化型低密度脂蛋白試劑盒由美國CUSABIO公司提供；球囊導(dǎo)管由美國Coridis公司提供；球囊擴(kuò)張壓力泵由美國Coridis公司提供。

1.2 方法

30只雄性新西蘭大耳白兔先給予標(biāo)準(zhǔn)飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后隨即分為干預(yù)組、模型組和正常組三組，每組10只。正常組給予普通家兔飼養(yǎng)飼料；模型組給予2%的蛋氨酸、高脂飼料，再加上球囊拉傷腹主動脈；干預(yù)組給予2%的蛋氨酸、高脂飼料和1%的牛磺酸，再加上球囊拉傷腹主動脈。高脂飼料由0.5%膽固醇、8%豬油和5%的蛋黃混合普通飼料組成。各組兔分籠飼養(yǎng)，自由飲水，隔周稱重，根據(jù)具體情況調(diào)整給藥劑量，連續(xù)飼養(yǎng)12周[2]。

對三組的大耳白兔均進(jìn)行球囊拉傷腹主動脈處理。首先經(jīng)兔耳緣靜脈緩慢注射濃度為3%的戊巴比妥鈉溶液，溶液的注入量根據(jù)兔子的體重而定，標(biāo)準(zhǔn)為每千克30毫克。待藥物起作用、兔子完全麻醉后進(jìn)行輸液器的連接。將250ml的生理鹽水和1.0氨芐西林配制成輸液，給予緩慢靜脈滴注。在兔一側(cè)下肢腹股溝一下區(qū)域備皮，采用碘伏消毒，鋪洞巾，注射利多卡因使其局部麻醉。依次切開表皮、皮下組織，將一側(cè)的股動脈充分暴露，在解剖時注意對近側(cè)動脈分支的保護(hù)。子安動脈遠(yuǎn)端給予結(jié)扎，用利多卡因浸潤股動脈，使其達(dá)到擴(kuò)張的效果。在腹股溝韌帶下2cm處用穿刺針穿刺股動脈，將Runfhrog導(dǎo)入，進(jìn)入長度以20cm左右為宜[3]。向球囊內(nèi)推注生理鹽水，使球囊充盈，直到其壓力達(dá)到8～10大氣壓，將球囊向回拉伸至髂骨動脈，反復(fù)回拉三次以造成腹主動脈內(nèi)皮損傷。將球囊吸成負(fù)壓后退出球囊，將股動脈夾閉后結(jié)扎。自兔耳緣靜脈注射肝素鈉200U抗凝。向切口內(nèi)放入8萬U慶大霉素防止切口感染。最后將手術(shù)切口進(jìn)行縫合。

1.3 觀察指標(biāo)和相關(guān)處理方法

1.3.1 血清學(xué)檢查 在研究開始后的第0周、第2周、第12周從兔的心臟采血3ml，3000r/min離心10min，取上層清液移動到EP管，放置入冰箱保存，溫度為-80℃。甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）、高同型半胱氨酸采取成批化驗的方式，在常溫融化一小時內(nèi)進(jìn)行檢測。

1.3.2 腹主動脈標(biāo)本處理 在對30只兔子進(jìn)行為期12周的喂養(yǎng)后，自兔耳緣靜脈注射空氣處死兔子，對其的腹主動脈進(jìn)行分離，分離后截取0.5cm的新鮮組織做冰凍切片油紅O染色；截取0.5cm做透射電鏡檢查；截取1cm用濃度為10%的中性甲醛溶液固定，在24h后脫水，進(jìn)行石蠟包埋，切片后做HE染色處理。剩余的組織用來做大體油紅O染色[4]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

本次研究所得數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料用χ2檢驗，計量資料用t檢驗，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 血清指標(biāo)檢測結(jié)果

模型組與正常組相比，血漿TC、TG、LDL-C、HDL-C、ox-LDL、Hcy的數(shù)值均有顯著的升高（P＜0.05）；干預(yù)組與模型組相比，Hcy、HDL-C無顯著差異（P＞0.05），但TG、TC、LDL-C、ox-LDL明顯減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），具體數(shù)據(jù)見表。

2.2 各組兔子腹主動脈粥樣斑塊形成及病理切片改變結(jié)果

對照組兔子腹主動脈內(nèi)膜表面光滑，平滑肌排列整齊，未著色；模型組兔子內(nèi)膜明顯增厚，可見脂肪沉積形成的氣泡，可見彌漫性鮮紅色斑塊；干預(yù)組兔子內(nèi)膜不平，中層細(xì)胞增生，可見隆起條紋狀紅色斑塊。

2.3 各組兔子腹主動脈脂肪浸潤結(jié)果

正常組兔子腹主動脈內(nèi)皮平整，全層沒有紅油著色；模型組兔子腹主動脈內(nèi)中層增厚，全層都有鮮紅色米粥樣脂滴，結(jié)構(gòu)較為疏松。干預(yù)組兔子腹主動脈內(nèi)中層增厚，在內(nèi)膜層的細(xì)胞內(nèi)可以見到細(xì)小密集的紅色脂肪顆粒。

2.4 各組兔子腹主動脈彈力纖維改變結(jié)果

正常組兔子的彈力纖維呈現(xiàn)整齊的排列狀；模型組兔子的內(nèi)膜層彈力纖維出現(xiàn)增生情況，生成纖維帽，呈現(xiàn)紊亂的排序特點(diǎn)，且纖維帽以下的彈力纖維和內(nèi)彈力板出現(xiàn)變形壞死的情況，甚至斷裂或溶解。干預(yù)組兔子的腹主動脈內(nèi)中層厚度介于正常組和模型組之間，其中層彈力纖維增生，呈現(xiàn)紊亂的排列方式，內(nèi)彈力板為完整。

3.討論

?；撬崾且环N含有磺酸基的自由氨基酸。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，?；撬峋哂芯S持滲透壓、清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化等生物學(xué)效應(yīng)。從本文的研究來看，干預(yù)組Hcy、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）與模型組無顯著差異（P＞0.05），而甘油三酯（TG）等、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）有明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；干預(yù)組的粥樣斑塊面積、內(nèi)皮厚度和血管細(xì)胞間粘附分子1陽性細(xì)胞百分比、彈力纖維密度與模型組相比明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意（P＜0.05）。牛磺酸可以降低血脂和ox-LDL水平，但是并沒有降低Hcy水平，可能是高Hcy激活了血管內(nèi)皮氧化應(yīng)激反應(yīng)、促進(jìn)了ox-LDL的生成[5]。?；撬徂卓笻cy誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)，減少ox-LDL的生成，最終減輕AS。另一方面，牛磺酸還有顯著的降血脂作用，降低膽固醇，將膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸。牛磺酸的藥理機(jī)制之一為抗氧化應(yīng)激反應(yīng)。

綜上所述，?；撬嶙鳛橐环N內(nèi)源性的細(xì)胞防護(hù)物質(zhì)，對血清Hcy的水平?jīng)]有明顯的降低作用，但是對抑制內(nèi)皮增生和平滑肌增殖遷移、降低血脂水平、促進(jìn)抗氧化應(yīng)激反應(yīng)等方面有著良好的作用，通過這些方面起到拮抗As的目的。根據(jù)相關(guān)研究結(jié)果，采用傳統(tǒng)維生素等降低Hcy水平的藥物聯(lián)合?；撬醽矸乐胃咄桶腚装彼嵫Y及相關(guān)的As病變會有較好的應(yīng)用前景，值得進(jìn)行深入研究。

【參考文獻(xiàn)】

[1]王勇,袁吉祥,王磊.牛磺酸抑制高脂合并高同型半胱氨酸血癥致兔動脈粥樣硬化的病理學(xué)改變[J].中國老年學(xué),2013,33(24):6227-6229.

[2]袁吉祥,姚成立,馬云海,等.?；撬嵋种聘咧喜⒏咄桶腚装彼嵫Y致兔動脈粥樣硬化[J].中國動脈硬化雜志,2012,20(5):435-439.

[3]伊桐凝,張靜生,于世家.冠心康顆粒對高同型半胱氨酸血癥致兔動脈粥樣硬化作用及對血管炎性因子表達(dá)影響[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2013(11):38-42.

[4]王晨晨.醋柳黃酮干預(yù)高同型半胱氨酸致兔動脈硬化的實驗研究[D].山東大學(xué),2014.

[5]王曉萍,周明旺,杜改煥,等.大劑量岷當(dāng)歸對高同型半胱氨酸血癥致兔動脈粥樣硬化的影響[J].西部中醫(yī)藥,2017(7).